间接竞争型论文_吴力专

导读:本文包含了间接竞争型论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:竞争,蛋白,金属,抗体,论文,ELISA。

间接竞争型论文文献综述

吴力专^[1]（2004）在《Zn-金属硫蛋白间接竞争型ELISA的建立与应用》一文中研究指出ELISA以其快速、准确、安全、简便的特点而成为定量测定生物体内微量有机物的理想方法。本实验的目的就是为了建立一套快速、有效、方便并能定量测定猪体组织中MT含量的ELISA法，为动物科学中的研究和应用提供MT的定量测定技术。 1．猪MT抗小鼠抗血清的制备：用戊二醛法将纯品Zn-MT与载体蛋白(BSA)偶联后，作为人工抗原，对昆明小鼠皮下注射。首次免疫时抗原中MT量分别为8ug/只、16ug/只、32ug/只、64ug/只、128ug/只；加强免疫时所用抗原量依次加倍。前3次免疫时采用的是弗氏完全佐剂乳化，后3次免疫采用弗氏不完全佐剂乳化。两批小鼠加强免疫的时间隔分别为10日和14日。用免疫双扩散方法测定抗血清效价。得出以下结论：当首次免疫抗原中MT的量为16-32ug/只，每次加强免疫时抗原量加倍，加强免疫间隔时间为10日时，其免疫效果较佳，可使大部分小鼠抗血清效价达到1：16以上。 2．抗体的纯化及鉴定：将效价达到1：16以上的MT小鼠抗血清用饱和硫酸铵盐析法浓缩出γ-球蛋白，然后用DEAE-Sephadex A50层析柱分离提纯IgG。实验中发现洗脱液pH值为7.4时洗脱第一峰即为纯化的IgG，用不连续缓冲系统聚丙烯酰胺凝胶浓度梯度电泳鉴定层析洗脱下的IgG达到电泳纯。对纯化后的IgG进行辣根过氧化物酶标记，用直接ELISA鉴定其为MT的特异性抗体。 3．ELISA的建立：运用固相抗原间接非竞争型ELISA和固相抗原间接竞争型ELISA检测猪体组织中部分样品MT的含量，结果表明：用间接非竞争型ELISA测定样品时其结果不够稳定，同一样品所对应的0D值相差较大，此方法仅适合于样品中MT定性检测；采用间接竞争型ELISA测定样品，0D值比较稳定。用方阵滴定法确定了间接竞争型ELISA的各项具体条件：抗原最佳包被浓度为6.25ug/ml，一抗(鼠抗猪)使用适宜浓度为50ug/ml，酶标抗体(山羊抗小鼠)的使用浓度为1/8000倍，反应时间为3hr。用标准MT，采用间接竞争型ELISA方法拟合的标准曲线回归方程为：y=10~5×2~((22.32880-0.39583x))，相关系数为：R=0.9592。本方法的灵敏度为4.1ng/ml，批间和批内变异系数为9.9760％-14.3858％，在实际应用中有较好的稳定性。说明本试验建立的间接竞争型ELISA具有特异性强、灵敏度较高、稳定性和重复性好、适合于大批量样品的检测等优点，不失为对MT进行定量分析的一种有效方法。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2004-06-15）