导读:本文包含了鲑鱼降钙素基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:鲑鱼,酵母,基因,转基因,细胞,毒性,诱导。
鲑鱼降钙素基因论文文献综述
王键,魏劲松,龚颜,曾荣[1]（2013）在《鲑鱼降钙素对去卵巢大鼠骨髓细胞OPG、RANKL基因和蛋白表达的影响》一文中研究指出[目的]观察鲑鱼降钙素(sCT)对去卵巢大鼠骨密度(BMD)、血清I型胶原交联羧基末端肽(ICTP)变化的影响,以及骨髓细胞骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的基因表达和两者在胫骨骨骺端蛋白含量的变化。[方法]取3个月龄雌性SD大鼠24只,随机平均分3组:假手术组(Sham)、鲑鱼降钙素处理组(sCT)、安慰剂组(OVX)。采用双侧卵巢切除术复制骨质疏松大鼠模型。术后2周CT组予鲑鱼降钙素皮下注射12周,应用双能X线吸收仪法(DXA)测BMD,ELISA法测量血清ICTP浓度,qRT-PCR法定量骨髓细胞OPG和RANKL的mRNA表达量,免疫组织化学染色法测定胫骨干骺端OPG和RANKL蛋白表达量。[结果]与OVX组比较,sCT组的腰椎BMD上升显着(P<0.05),但股骨BMD改变不明显(P>0.05);血清ICTP含量显着降低(P<0.05);骨髓细胞RANKL的mRNA表达量变化不大(P>0.05),但OPG的mRNA表达量升高(P<0.05),OPG/RANKL的比率升高(P<0.05);胫骨干骺端也呈现出RANKL蛋白改变不明显(P>0.05),而OPG的蛋白分泌增加(P<0.05),从而OPG/RANKL的比率高于OVX组(P<0.05)的现象。[结论]降钙素可以预防腰椎BMD的丢失,降低血清ICTP水平,在体内可能主要通过上调OPG的mRNA表达和蛋白分泌,影响OPG/RANKL/RANK系统,影响破骨细胞功能,抑制骨吸收,进而达到预防绝经后骨质疏松的目的。(本文来源于《中国矫形外科杂志》期刊2013年07期）
王鹏,姜勇,田敬云,马健,张学成[2]（2012）在《多拷贝表达转鲑鱼降钙素基因酵母的急性、亚急性毒性》一文中研究指出口服转鲑鱼降钙素基因酵母为鲑鱼降钙素的应用开辟了一条新的途径.为评价转鲑鱼降钙素基因酵母的安全性,将转基因酵母分别灌胃昆明种小鼠和Wistar大鼠进行急性毒性实验(7 d)、亚急性毒性实验(8周).急性毒性实验结果表明灌喂转基因酵母对小鼠无致死效应(LD50>10 000 mg/kg);亚急性毒性实验中高(2.0 g/kg)、低(0.5 g/kg)剂量组动物的一般状况、体重、主要脏器系数、血液学指标及血液生化指标与各对照组比较,均未见明显差异(P>0.05),组织病理切片检查未发现病理性变化.实验结果说明转鲑鱼降钙素基因酵母不会对实验动物造成不良影响,是安全无毒的.图3表3参16(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2012年04期）
余琼,赵丽华,李洪丽,张巍,梁利恒[3]（2012）在《IPTG诱导浓度、时间及温度对重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因表达的影响》一文中研究指出以重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因pGEX(CGRP/msCT)的工程菌为研究对象,利用IPTG作为诱导剂,分析比较在不同IPTG诱导条件下融合基因表达的效果,确定最佳IPTG诱导条件。结果表明∶在IPTG终浓度为0.2 mmol.L-1,诱导温度为37℃,诱导时间为5 h的条件下,该融合蛋白的表达量最大。利用光密度扫描对表达产物进行初步定量的结果表明,目的蛋白约占菌体总蛋白的32.11%。(本文来源于《黑龙江大学自然科学学报》期刊2012年02期）
姜勇,张辉,王鹏,赵喜喜,徐科凤[4]（2011）在《转鲑鱼降钙素基因酵母对体外培养破骨细胞的影响》一文中研究指出用机械分离的方法获得新生Wistar大鼠的破骨细胞,在培养液中分别加入经肠激酶酶切的转鲑鱼降钙素基因酵母的上清液和密钙息(Miacalcic,鲑鱼降钙素注射液),以HE染色观察破骨细胞形态,Image-Pro Plus图像软件分析骨片上骨吸收陷窝的面积,骨片培养7天,吸收陷窝结果显示,转鲑鱼降钙素对破骨细胞吸收功能具有明显的抑制作用。(本文来源于《山东农业科学》期刊2011年06期）
兰翀[5]（2011）在《鲑鱼降钙素转基因定位整合的研究》一文中研究指出转基因动物是通过遗传工程手段对动物基因组的结构或组成进行人为改造,并使改造后的基因组在世代间可以传递和表达的动物。随着生物技术的飞速发展,通过制备转基因动物来生产蛋白药物成为当前研究热点。鲑鱼降钙素是一种治疗骨质疏松症、骨痛等症状的有效药物,已在很多国家和地区都有着广泛的应用,但其产量尚不能满足需求。利用转基因技术获得转基因山羊,实现鲑鱼降钙素的乳腺特异表达,可大量产出鲑鱼降钙素,有着良好的成本效益和市场前景。本文通过转基因的随机整合和定位整合两条路径进行了乳腺特异表达鲑鱼降钙素转基因山羊的制备研究。在随机整合转基因山羊制备方面,本研究构建了牛p-乳球蛋白启动子调控表达的鲑鱼降钙素乳腺特异表达载体pBLG-sct。从pBLG-sct载体中切出线性化的鲑鱼降钙素表达框架与筛选标记基因Neo的筛选框架共转染羊胎儿成纤维细胞,600ug/ml的G418筛选14天获得克隆细胞127株,扩大培养至6孔板,有15株细胞用于检测,其中有11株整合。取2株细胞进行体细胞克隆,其中克隆细胞株sct-neo-8的核移植融合率达到91.04%(183/201),移植受体17只,克隆细胞株sct-neo-9的核移植融合率达到88.43%(214/242),移植受体23只。移植30天后,B超妊娠检查有11头受体山羊怀孕。至妊娠57天,有1只怀孕羊流产,流产胎儿整合检测表明为sct整合阳性。为了提高转基因的表达效率,对sct的乳腺特异表达框架进行了定位整合研究。首先验证了在山羊成纤维细胞内细胞穿透性Cre酶(TAT-Cre)介导标记基因的删除效率。通过IPTG诱导大肠杆菌BL-21表达TAT-cre酶,利用SP sepharoseTM柱纯化获得1.883mg/ml的TAT-cre酶。使用200μg/ml的TAT-cre处理共转染了loxp-neo-tk-loxp框架和BLG-sct的山羊胎儿成纤维细胞克隆,统计结果显示TAT-cre酶在山羊成纤维细胞内有良好活性,其介导标记基因的删除效率达到43.9%。最后,构建了框架为loxp-zeo-sct-loxp的载体p2xGsct-zeo,并将该环状载体电穿孔转染含有loxp-neo-tk-loxp框架的hLYZ转基因山羊胎儿成纤维细胞,通过TAT-cre酶处理,检测出有定位整合的特异性条带出现,说明TAT-cre介导体p2xGsct-Zeo置换hLYZ转基因山羊基因组中的loxp-neo-tk-loxp框架,以实现目的基因定位整合的试验方案是可行的。综上所述,本研究不仅获得了随机整合鲑鱼降钙素乳腺特异表达框架的转基因细胞及胎儿,而且初步证实了利用TAT-Cre可实现转基因过程中的标记基因删除和外源基因的定位整合,为获得高表达鲑鱼降钙素转基因山羊和实现转基因的定位整合奠定了基础。(本文来源于《四川农业大学》期刊2011-05-01）
陈云松[6]（2010）在《转鲑鱼降钙素基因酵母的发酵条件优化及安全性评价》一文中研究指出降钙素是一种由32个氨基酸组成的多肽类激素,其蛋白结构的N端为二硫键,C端为脯氨酰胺基团。它在哺乳动物中起源于甲状腺C细胞,在鱼类中后腮体分泌。现在临床上广泛使用的是合成的人、鲑鱼降钙素,天然来源的猪降钙素和鳗鱼降钙素类似物,主要用于骨质疏松、高钙血症、变形性骨炎及类风湿性关节炎的治疗。由本实验室姜勇构建的转鲑鱼降钙素基因酵母yAGA2-r-sCT经实验证明具体内生物活性,这为开发鲑鱼降钙素的口服途径创造了可能,在生产上具有较大的应用潜力。为了提高发酵产量,我们对转鲑鱼降钙素基因酵母的发酵条件进行了优化,并通过动物毒理学实验对其进行了安全性评价,为实现降钙素的口服应用提供了实验数据。转鲑鱼降钙素基因酵母发酵条件的优化包括对实验用酵母培养基的改良、外界培养条件的优化、工业用培养基组成及其诱导条件的优化：(1)以豆粕水解液作为氮源,采用正交设计方法,得出转基因酵母改良增殖培养基配方为：6%豆粕水解液,3%葡萄糖,0.5%酵母提取物,1%蛋白胨,pH 5。(2)通过单因素实验,对影响酵母生长的外界条件包括温度、发酵时间、接种量、搅拌转速和通气量进行优化,得出优化条件为：温度28℃,搅拌转速为200 rpm,通气量为8 L/min,接种量为8%,培养时间为3天。(3)采用部分因子设计筛选出显着影响转基因酵母生长的因子为豆粕水解液、葡萄糖和NaCl,并利用最速上升实验确定了这叁个因子接近最大响应值所在的区域,最后结合响应面分析法得到了转基因酵母工业用增殖培养基最佳优化组合为：86.5g/L豆粕水解液,56.8g/L葡萄糖,1.10 g/L NaCl,5.0g/L K2HPO4,0.6 g/L (NH4)2SO4,0.2g/L MgSO4。(4)采用流式细胞和ELISA检测,通过对影响酿酒酵母表达鲑鱼降钙素蛋白的多个因素,包括诱导起始浓度、诱导时间、半乳糖浓度和添加方式的研究,结果表明：转鲑鱼降钙素基因酵母采用摇瓶发酵培养时,起始OD为0.8,诱导时间为12 h,半乳糖浓度为2%且一次性添加的方式下,外源蛋白的表达量达到5.92%。以大鼠和小鼠为实验对象对表达鲑鱼降钙素的转基因酵母进行了毒理学实验,包括急性毒性实验、遗传毒性实验(小鼠骨髓微核实验、小鼠精子畸形实验)传统致畸实验、大鼠30天喂养实验和长期毒性实验。经口急性毒性实验显示LD50>10.0g/k,表明转基因酵母属于实际无毒物质；遗传毒性实验结果显示小鼠红细胞微核率和精子畸形率与对照组相比没有显着差异,且无剂量-效应关系,表明转基因酵母不具有遗传毒性,没有致突变作用；传统致畸实验结果显示灌胃转基因酵母的孕鼠生长发育良好,对所产小鼠胚胎外观和胎鼠内脏和骨骼观察无致畸现象,表明转基因酵母没有对孕鼠产生母体毒性,对母鼠的生殖机能没有不良影响,对小鼠胚胎发育无致畸作用；30天喂养实验中大鼠增重、摄食量、血液和血液生化指标、脏器系数均在正常范围内,与对照组均无显着差异(P>0.05),脏器组织切片检查未发现病理性变化；90天长期毒性实验结果显示,长期饲喂转鲑鱼降钙素基因酵母不会对实验动物产生毒副作用,最大无作用剂量在5.0 g/kg·BW以上,相当于人体推荐剂量0.8 g/kg·BW.因此转鲑鱼降钙素基因酵母未对实验动物造成不良影响,是安全无毒的。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2010-06-04）
李洪丽[7]（2010）在《鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽基因原核表达的研究》一文中研究指出目前,随着我国进入老龄化社会,骨质疏松症和心血管疾病等严重威胁着人类的健康,给老年人的生活带来了严重的影响。鲑鱼降钙素(Salmon Calcitonin,sCT)是天然降钙素中活性最高的一种,对于治疗骨质疏松症有着很好的疗效。降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene Related Peptide, CGRP)是迄今为止发现的最强大的内源性扩血管肽类物质,是治疗心血管疾病的首选药物之一。临床上为了治疗骨质疏松症、心血管疾病等老年人常见疾病,对鲑鱼降钙素和降钙素基因相关肽的需要与日俱增,因此,能够获得一种双效的药用蛋白成为了人们日益关注的问题。本实验利用基因工程的方法设计并合成了鲑鱼降钙素和降钙素基因相关肽融合基因,将该基因克隆到pGEX-6p-1表达载体上,并且,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中进行表达。利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同诱导温度,不同诱导时间和不同IPTG终浓度条件对蛋白表达量的影响,从而确定最佳诱导表达条件。结果表明,成功构建了大肠杆菌表达载体pGEX(CGRP/msCT)。目的蛋白的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG终浓度为0.2mmol/L,最佳诱导时间为5小时,目的蛋白的表达量最高可达到菌体总蛋白的32.11%。(本文来源于《黑龙江大学》期刊2010-04-28）
高岩,王敬东,张学成[8]（2009）在《转鲑鱼降钙素基因酵母及RANKL对大鼠血管平滑肌细胞体外钙化的影响》一文中研究指出观察核因子kB受体激活物配体(RANKL)对大鼠血管平滑肌细胞体外钙化的调节作用,以及转鲑鱼降钙素基因酵母对RANKL调节作用的影响。体外培养大鼠血管平滑肌细胞,建立体外血管平滑肌细胞钙化模型,在培养介质中分别加入RANKL及转鲑鱼降钙素基因酵母蛋白上清液,观察细胞钙沉积、细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素的变化情况。结果表明,RANKL促进钙化培养的大鼠血管平滑肌细胞的钙沉积、细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达,而转鲑鱼降钙素基因酵母能够抑制RANKL的促钙化作用。RANKL可能通过增加细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达从而促进血管平滑肌细胞向成骨细胞转化;转鲑鱼降钙素基因酵母可能通过OPG/RANKL/RANK途径抑制血管平滑肌细胞钙化。(本文来源于《中国海洋大学学报(自然科学版)》期刊2009年06期）
陈云松,张学成,姜勇,高岩,黄维清[9]（2009）在《口服转鲑鱼降钙素基因酵母的安全性评价》一文中研究指出以小鼠为实验对象对表达鲑鱼降钙素的转基因酵母进行了毒理学实验,包括急性毒性实验、遗传毒性实验(小鼠骨髓微核实验、小鼠精子畸形实验)、传统致畸实验和大鼠30 d喂养实验.结果表明,急性毒性实验显示LD50>10.0 g/kg,属于实际无毒物质;遗传毒性实验结果均为阴性,显示无致突变性;致畸实验结果表明转鲑鱼降钙素基因酵母对小鼠不会产生母体毒性,对小鼠胚胎发育无影响且无致畸作用;30 d喂养实验中各项检测指标均无显着差异(p>0.05),组织病理切片检查未发现病理性变化.本文的结论是口服转鲑鱼降钙素基因酵母未对实验动物造成不良影响,是安全无毒的.(本文来源于《武汉大学学报(理学版)》期刊2009年05期）
余琼,平文祥,宋永,李洪丽,梁利恒[10]（2009）在《重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因分子设计及大肠杆菌表达载体构建》一文中研究指出[目的]:为了获得一种能同时对高血压和骨质疏松两种疾病有治疗作用的融合蛋白。[方法]:根据大肠杆菌偏爱密码子原则,采用基因工程的方法设计并合成了重组降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合基因,并将该基因克隆到pGEX-6P-1表达载体上,将重组质粒转化到BL21中表达。[结果]:通过DNA测序验证目的基因被正确克隆到pGEX-6P-1上。[结论]:大肠杆菌表达载体构建成功。(本文来源于《食品工业科技》期刊2009年08期）
鲑鱼降钙素基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
口服转鲑鱼降钙素基因酵母为鲑鱼降钙素的应用开辟了一条新的途径.为评价转鲑鱼降钙素基因酵母的安全性,将转基因酵母分别灌胃昆明种小鼠和Wistar大鼠进行急性毒性实验(7 d)、亚急性毒性实验(8周).急性毒性实验结果表明灌喂转基因酵母对小鼠无致死效应(LD50>10 000 mg/kg);亚急性毒性实验中高(2.0 g/kg)、低(0.5 g/kg)剂量组动物的一般状况、体重、主要脏器系数、血液学指标及血液生化指标与各对照组比较,均未见明显差异(P>0.05),组织病理切片检查未发现病理性变化.实验结果说明转鲑鱼降钙素基因酵母不会对实验动物造成不良影响,是安全无毒的.图3表3参16
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
鲑鱼降钙素基因论文参考文献
[1].王键,魏劲松,龚颜,曾荣.鲑鱼降钙素对去卵巢大鼠骨髓细胞OPG、RANKL基因和蛋白表达的影响[J].中国矫形外科杂志.2013
[2].王鹏,姜勇,田敬云,马健,张学成.多拷贝表达转鲑鱼降钙素基因酵母的急性、亚急性毒性[J].应用与环境生物学报.2012
[3].余琼,赵丽华,李洪丽,张巍,梁利恒.IPTG诱导浓度、时间及温度对重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因表达的影响[J].黑龙江大学自然科学学报.2012
[4].姜勇,张辉,王鹏,赵喜喜,徐科凤.转鲑鱼降钙素基因酵母对体外培养破骨细胞的影响[J].山东农业科学.2011
[5].兰翀.鲑鱼降钙素转基因定位整合的研究[D].四川农业大学.2011
[6].陈云松.转鲑鱼降钙素基因酵母的发酵条件优化及安全性评价[D].中国海洋大学.2010
[7].李洪丽.鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽基因原核表达的研究[D].黑龙江大学.2010
[8].高岩,王敬东,张学成.转鲑鱼降钙素基因酵母及RANKL对大鼠血管平滑肌细胞体外钙化的影响[J].中国海洋大学学报(自然科学版).2009
[9].陈云松,张学成,姜勇,高岩,黄维清.口服转鲑鱼降钙素基因酵母的安全性评价[J].武汉大学学报(理学版).2009
[10].余琼,平文祥,宋永,李洪丽,梁利恒.重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因分子设计及大肠杆菌表达载体构建[J].食品工业科技.2009
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