莱茵衣藻IFT144蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

论文摘要

为后续研究纤毛相关蛋白IFT144的功能,通过构建重组表达载体获取IFT144抗原蛋白,利用纯化过后带有His标签的IFT144抗原蛋白免疫新西兰白兔,收集4次免疫后的血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶521 000。经Western blot及免疫荧光技术检测表明,纯化后的抗血清能够与Chlamydomonas reinhardtii 21gr（CC1690）鞭毛IFT144蛋白特异性结合,说明anti-IFT144特异性良好。该抗体效价高,特异性良好,为IFT144蛋白的功能及其相关机制的研究提供了实验材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验材料
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 主要仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 表达载体pET-28a-ift144的构建
•     1.2.2 融合蛋白6×His-IFT144的表达与纯化
•     1.2.3 动物免疫
•     1.2.4 抗血清效价测定
•     1.2.5 抗血清纯化
•     1.2.6 Western blot检测抗体特异性
•     1.2.7 莱茵衣藻中IFT144蛋白定位
• 2 结果与分析
•   2.1 原核表达载体的构建及鉴定
•   2.2 融合蛋白的表达及可溶性分析
•   2.3 融合蛋白的纯化
•   2.4 抗血清效价的测定
•   2.5 抗体的特异性分析
•   2.6 IFT144蛋白在莱茵衣藻中的定位
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 冯雳,魏志新,花梦婷,邢俊俏,陈龙,丁梅

关键词: 莱茵衣藻,纤毛,多克隆抗体,表达纯化,免疫荧光技术

来源: 湖南师范大学自然科学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江汉大学系统生物学研究院遗传与生物技术研究中心

基金: 国家自然科学基金青年项目(31601090)

分类号: Q943.2

页码: 32-37

总页数: 6

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