基于RNAi和蛋白质组学研究胶孢炭疽菌CgCDC2基因的功能

论文摘要

【目的】CDC2是调控细胞周期的主要因子之一,对植物病原菌的生长发育有着重要作用,但目前还未有胶孢炭疽菌CDC2蛋白生物学功能方面的研究。本试验的目的是获得胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）CgCDC2的RNAi突变体菌株,并分析CgCDC2基因的功能。【方法】利用RNAi技术和PEG介导法获得CgCDC2的RNAi突变体菌株,通过表型分析、TMT蛋白质组学分析和酶活性测定来确定该基因的生物学功能。【结果】通过PCR扩增获得CgCDC2基因,编码一个326个氨基酸的蛋白,其RNAi突变体菌株与野生型相比,生长速率减缓、分生孢子产量显著下降、对H2O2敏感性增强,PG、PL蛋白质含量、基因相对表达量和酶活性均显著降低,致病力减弱。【结论】CgCDC2参与调控胶孢炭疽菌的生长,分生孢子产量,氧化应激反应以及PG、PL的酶活性,从而降低病原菌的致病力。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 供试菌株和杧果品种
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 胶孢炭疽菌总RNA的提取和cDNA第一链的合成
•   1.3 CgCDC2基因的克隆
•   1.4 CgCDC2基因RNAi沉默载体的构建
•   1.5 原生质体制备及转化
•   1.6 CgCDC2基因RNAi转化子的鉴定
•   1.7 CgCDC2沉默突变体生长特性分析
•     1.7.1 生长速率测定
•     1.7.2 产孢量测定
•     1.7.3 胁迫因子敏感性测定
•   1.8 TMT定量蛋白质组学分析
•     1.8.1 蛋白提取与酶解
•     1.8.2 TMT标记和肽段分离
•     1.8.3 液质联用分析
•   1.9 差异表达蛋白分析
•   1.1 0 CgCDC2沉默突变体的PG、PL表达分析
•     1.1 0. 1 PG、PL蛋白质含量分析
•     1.1 0. 2 PG、PL基因的表达分析
•     1.1 0. 3 PG、PL酶活性测定分析
•   1.1 1 CgCDC2沉默突变体的致病性测定分析
• 2 结果与分析
•   2.1 CgCDC2基因的扩增
•   2.2 CgCDC2沉默突变体的鉴定
•   2.3 CgCDC2沉默突变体生长特性分析
•     2.3.1 生长速率分析
•     2.3.2 产孢量分析
•     2.3.3 胁迫因子敏感性分析
•   2.4 差异表达蛋白分析
•   2.5 CgCDC2沉默突变体的PG、PL表达分析
•   2.6 CgCDC2沉默突变体的致病性
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 夏杨,苏初连,叶子,刘晓妹,蒲金基,张贺

关键词: 杧果,胶孢炭疽菌,蛋白质组学,致病力

来源: 果树学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 海南大学,中国热带农业科学院环境与植物保护研究所·农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室·海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室

基金: 国家重点研发专项（2017YFD0202100）,海南省重大科技计划项目（ZDKJ2017003）,中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金（1630042017019）,农业农村部农业技术试验示范与服务支持项目“滇桂黔石漠化地区特色作物产业发展关键技术集成示范”

分类号: Q78

DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20190178

页码: 1483-1493

总页数: 11

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