杂合木聚糖酶的设计及在毕赤酵母中的表达

论文摘要

人工设计合成木聚糖酶,为木聚糖酶分子改造研究提供新思路。采用合成生物学思路,以黑曲霉XZ-3S木聚糖酶Xyn ZF-2基因序列为基础,将N端48个氨基酸替换成Ev Xyn11 N端的34个氨基酸;引入芳香族氨基酸P9Y和H14F;在C端引入二硫键Cys38-Cys191;α-螺旋及cord区域分别引入疏水性氨基酸K164M、G166A、N160I、V111A以及G109A,设计杂合酶Xyn ZL。基因全合成后,构建毕赤酵母重组表达质粒p PIC9K-ZL,将其转化酵母菌GS115,对工程菌GS115-XynZL进行单因素发酵条件优化及重组酶酶学性质测定。最佳发酵培养基为土豆培养基,最佳诱导温度为28℃,最佳种龄为20 h,最佳诱导时间为168 h,最佳诱导起始pH值为6. 5,甲醇诱导最佳体积分数为15 mL/L。重组酶酶学性质显示:最佳反应温度为55℃,最适pH值为5. 0,杂合酶Xyn ZL在毕赤酵母中表达后具有特定性质和功能,其设计方法拓宽了木聚糖酶分子改造研究的思路。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 引物
•   1.4 验证方法
•     1.4.1 木聚糖酶基因生物信息学分析
•     1.4.2 杂合酶基因序列设计及合成
•     1.4.3 杂合酶基因工程菌构建
•     1.4.4 重组菌摇瓶发酵工艺研究
•     1.4.5 木聚糖酶活力的测定
•     1.4.6 蛋白质电泳（SDS-PAGE）分析
•     1.4.7 重组酶酶学性质测定
•       1.4.7. 1 最适作用温度及温度稳定性
•       1.4.7. 2 最适pH及p H稳定性
•     1.4.8 数据的统计学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 木聚糖酶基因生物信息学分析
•   2.2 杂合酶基因序列设计及合成
•   2.3 杂合酶基因工程菌构建
•   2.4 重组菌摇瓶发酵工艺研究
•   2.5 蛋白质电泳（SDS-PAGE）分析
•   2.6 重组酶酶学性质测定
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邵天赐,何优,张枫凯,蔡刘滕子,田艳杰,周晨妍

关键词: 木聚糖酶,糖基化,二硫键,芳香族氨基酸,疏水性氨基酸,合成生物学

来源: 食品与发酵工业 2019年19期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,一般化学工业

单位: 新乡医学院生命科学技术学院河南省合成生物学工程实验室

基金: 河南省科技攻关计划项目(162102210118),河南省高等学校重点科研计划项目(17A180035)

分类号: TQ925

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.021208

页码: 58-62

总页数: 5

文件大小: 1818K

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