副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性

论文摘要

【目的】我们前期研究表明副溶血弧菌SH112株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原。本研究进一步对ompA（VPA1186）基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性。【方法】扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达载体,基因测序后对其编码蛋白质进行生物信息学分析。重组蛋白His-OmpA经纯化后,免疫ICR小鼠制备鼠多抗血清。Western blotting检测该蛋白的免疫原性及鼠多抗血清的特异性。动物实验验证其免疫保护率。【结果】成功表达分子量约为40.0 kDa的重组蛋白His-OmpA。制备的鼠多抗血清ELISA效价可达1∶50000以上。Westernblotting检测结果显示,该血清可与His-OmpA蛋白、总外膜蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,说明所表达的目的蛋白保持原蛋白的免疫原性。此外,该高免血清可与其他主要血清型的副溶血弧菌发生特异性交叉反应,而与其他非副溶血弧菌菌株无交叉反应,表明该血清特异性较高,且提示OmpA蛋白可能是副溶血弧菌属的共同保护性抗原。小鼠免疫保护实验结果表明,该蛋白可提供约35%的免疫保护率。【结论】OmpA蛋白可作为诊断副溶血弧菌感染和亚单位疫苗研制的靶蛋白,为进一步开展该蛋白的功能研究提供了参考。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 菌株、质粒和实验动物
•   1.2 试剂和仪器
•   1.3 VPA1186编码蛋白质的生物信息学分析
•   1.4 重组表达质粒的构建、鉴定和目的基因的表达
•   1.5 细菌外膜蛋白的提取
•   1.6 His-OmpA蛋白的鼠多抗制备
•   1.7 抗OmpA蛋白高免血清的特异性测定
•   1.8 His-OmpA蛋白免疫效果的初步研究
• 2 结果和分析
•   2.1 基因ompA（VPA1186）编码蛋白质的生物信息学分析
•   2.2 重组表达质粒的构建和OmpA蛋白的表达、纯化
•   2.3 His-OmpA蛋白高免血清制备、效价检测及其免疫原性检测
•   2.4 抗Omp A/（VPA1186）蛋白高免血清的鉴别诊断
•   2.5 His-OmpA蛋白免疫小鼠及免疫效果的初步研究
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王亚磊,王权,白雪瑞,别闯南,陈兆国,韩先干,蒋蔚

关键词: 副溶血弧菌,免疫原性,保护性作用

来源: 微生物学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院上海兽医研究所

基金: 国家重点研发计划(2017YFC1200201),上海市科学技术委员会科研计划(17140900400)~~

分类号: S852.4

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180483

页码: 1937-1947

总页数: 11

文件大小: 1757K

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