抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立

论文摘要

为实现甲硝唑单链抗体（single-chain variable fragment,scFv）在大肠杆菌中的可溶性表达,以甲硝唑抗体可变区基因（VH、VL）为模板,扩增甲硝唑的scFv基因,scFv双酶切后与PLIP6/GN载体重组,构建重组质粒PLIP6/GNscFv,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆转大肠杆菌BL21经温度诱导表达重组单链抗体,并通过聚丙酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对其鉴定。采用竞争酶联免疫（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明诱导表达的scFv分子量接近33 kDa,能够特异性识别兽药甲硝唑,半抑制率（IC50）为（0.72±0.04）ng/mL。选择虾样品进行添加回收试验,建立的方法检测其回收率在88.54%到113.27%之间。这说明成功构建重组质粒PLIP6/GN-scFv并实现可溶性表达并可用于实际样品检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 主要仪器设备
•   1.3 试验方法
•     1.3.1 总核糖核酸 （ribonucleicacid, RNA） 的提取
•     1.3.2 抗体可变区基因 （VH、VL） 扩增与鉴定
•     1.3.3 重叠延伸PCR扩增全长scFv基因
•     1.3.4 PLIP6/GN-scFv表达质粒构建
•     1.3.5 融合蛋白scFv-AP诱导表达
•     1.3.6 可溶性scFv-AP抗原结合活性鉴定
•     1.3.7 样品前处理
•     1.3.8 样品的添加回收试验
•   1.4 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 可变区 （VH、VL） 基因扩增与scFv基因片段拼接
•   2.2 重组质粒阳性克隆筛选、鉴定
•   2.3 scFv序列分析
•   2.4 scFv-AP融合蛋白的诱导表达及SDS-PAGE分析
•   2.5 甲硝唑scFv-AP竞争ELISA的测定
•   2.6 样品添加回收试验
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 何扩,张秀媛,王云峰,赵瑞平,李育峰

关键词: 甲硝唑,单链抗体,融合蛋白,诱导表达,酶联免疫吸附

来源: 食品研究与开发 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 河北省农产品食品质量安全分析检测重点实验室河北北方学院

基金: 河北省高等学校科学技术研究项目(QN2016242)

分类号: TS207.3

页码: 46-50

总页数: 5

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