活血定眩胶囊含药血清对小鼠脑微血管内皮细胞b End.3细胞自噬的干预研究

论文摘要

目的探讨活血定眩胶囊含药血清对乏氧培养bEnd.3细胞自噬的干预情况。方法除正常组外,将细胞乏氧培养建立氧糖剥夺（OGD）模型,设置0,3,6和9 h不同时间段模型。用CCK8检测不同时间段细胞活性,用GFP-LC3转染,细胞免疫荧光检测4个时间段bEnd.3细胞微管相关蛋白1轻链3B（LC3Ⅱ）表达情况,以明确细胞自噬最佳时间段;然后将bEnd.3细胞分为6组:正常组、模型组、对照组和高、中、低3个浓度实验组,在6 h后,高、中、低3个浓度实验组分别加入3个百分含量（15%,10%,5%）的活血定眩胶囊含药血清,对照组加入氟桂利嗪32μmol·L-1。用免疫印迹法检测各组bEnd.3细胞的LC3Ⅱ、自噬重要调控因子Beclin-1和泛素结合蛋白P62（P62）蛋白的表达水平。结果在上述4个时间点的细胞存活率分别为（100.00±0.00）%,（86.00±2.41）%,（60.00±2.31）%和（35.00±3.35）%; bEnd.3细胞在乏氧培养6 h后LCⅡ含量较高,空白组、模型组和中剂量实验组的LC3B-Ⅱ相对表达量分别为1.01±0.03,1.84±0.02和2.00±0.01;这3组的Bcline-1相对表达量为0.27±0.01,0.39±0.01和0.43±0.01;这3组的P62相对表达量分别为0.47±0.01,0.38±0.01和0.35±0.01。上述指标:模型组与空白组相比,差异均有统计学意义（均P <0.05）;中剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义（均P <0.05）。结论活血定眩胶囊含药血清通过调控多个蛋白表达水平来促进适度自噬,调节血管内皮功能。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•   2 实验方法
•     2.1 小鼠脑微血管内皮细胞b End.3的培养[4]
•     2.2 细胞氧糖剥夺模型（OGD）的建立[4]
•     2.3 含药血清制备[5]
•     2.4 分组和干预方法
•       2.4.1 以CCK8检测细胞不同时段活性[6]
•       2.4.2 以GFP-LC3转染免疫荧光检测LC3-Ⅱ[7]
•       2.4.3 分组及处理方法
•       2.4.4 用硝酸还原酶法检测NO浓度和分光光度法测定SOD的活性[5]
•       2.4.5 用免疫印迹技术检测b End.3细胞中Bcline-1、LC3Ⅱ和P62蛋白的表达[8-9]
•   3 统计学处理
• 结果
•   1不同时间段细胞活性比较
•   2 GFP-LC3转染后LC3-Ⅱ在不同时间段表达量
•   3 活血定眩胶囊含药血清对b End.3细胞中NO含量和SOD生物活性的影响
•   4 活血定眩胶囊含药血清对自噬相关蛋白Bcline-1、LC3Ⅱ和P62的影响
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 董平,侯红燕,黄凯,董万涛,巩彦龙,宋敏

关键词: 活血定眩胶囊,含药血清,细胞,自噬

来源: 中国临床药理学杂志 2019年23期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 甘肃中医药大学中医临床学院,内蒙古医科大学中医学院,甘肃中医药大学附属医院骨科

基金: 国家自然科学基金地区科学基金资助项目(81760876),甘肃省高等学校科研基金资助项目(2017A-053)

分类号: R285.5

DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2019.23.024

页码: 3038-3041

总页数: 4

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