导读:本文包含了单细胞层论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:单细胞,细胞,模型,色谱,人参,液相,穿心莲。
单细胞层论文文献综述
刘冰彤,庄永亮[1]（2019）在《肽钙螯合物VGLPNSR-Ca的结构表征及在Caco-2单细胞层的促钙吸收性能》一文中研究指出以Val-Gly-Leu-Pro-Asn-Ser-Arg(VGLPNSR)和氯化钙为原料制备了肽钙螯合物VGLPNSR-Ca.采用紫外光谱(UV)、X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、高分辨质谱等手段对VGLPNSR-Ca的结构特性进行了分析,并通过体外Caco-2单细胞层模型模拟研究了VGLPNSR-Ca在肠道中的促钙吸收能力.紫外光谱、X射线衍射、扫描电子显微镜分析结果显示,VGLPNSR-Ca形成了一个稳定的肽钙螯合物.红外光谱表明VGLPNSR-Ca的螯合位点主要为氨基的氮原子和羧基的氧原子,结合高分辨质谱分析,VGLPNSR与钙离子的螯合反应主要由氮端Val、碳端Arg及氨基酸Asn参与.根据上述分析结果预测了VGLPNSR-Ca的分子结构.此外,VGLPNSR-Ca在Caco-2单细胞层中的钙吸收率为31. 97%,是氯化钙的钙吸收率的2倍多,证明了VGLPNSR-Ca能有效提高钙的生物利用率.(本文来源于《高等学校化学学报》期刊2019年08期）
杨志峰[2]（2018）在《利用单细胞层层组装技术构建3D缺氧微环境研究miR-382和细胞自噬在肾纤维化中的作用》一文中研究指出研究背景肾纤维化,包括肾小球硬化和肾小管间质纤维化,是慢性肾脏病的普遍特征。许多病理因素,例如慢性持续感染,缺氧,控制不佳的高血压和糖尿病等,均可以引发进行性和不可逆的肾纤维化。其中糖尿病肾病(DN)主要表现为肾小球硬化,其发病机制目前尚不完全明确。高血糖、遗传背景、血流动力学异常等因素均能引起代谢改变、血管活性物质异常,无法精确解析肾纤维化的发生发展过程。因此,积极探索肾纤维化的相关发病机制,并据此研发新的治疗策略一直是研究者努力的目标与方向,其中,缺氧被认为是一个关键因素。最近的研究已经强调了肾内低氧作为慢性肾脏疾病的一个潜在机制。本研究采用单细胞层层组装技术(LBL)成功地构建了体外3D缺氧微环境,以研究miR-382和细胞自噬在肾纤维化中的作用。目的1、基于单细胞LBL技术平台,构建肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、明确缺氧微环境对肾系膜细胞miR-382以及相关信号通路的影响。3、明确miR-382诱导肾纤维化的相关机制。内容和方法1、利用单细胞LBL组织工程手段构建肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、采用qRT-PCR法和免疫荧光分析比较研究在2D、3D培养条件下,缺氧微环境对肾系膜细胞miR-382水平及相关信号通路中各种信号分子表达的影响。3、采用免疫荧光和蛋白质印迹分析(westernblotting)比较研究在2D、3D培养条件下,缺氧刺激对肾系膜细胞纤维化的影响,以及miR-382在肾纤维化中所扮演的角色。4、统计学分析采用SPSS20.0统计软件进行统计学分析,结果用均数±标准差(Mean±SD)来表示。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),方差齐时的组间比较采用Tukey法,方差不齐时组间比较采用Dunnett'sT3法,p<0.05认为有显着性差异。结果1、利用单细胞LBL组织工程手段和简单的胰酶消化的方法成功构建了肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、相比于2D培养体系,3D缺氧微环境培养体系诱导了转化生长因子β1(TGF-β1)和miR-382的高表达,通过下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)的表达导致了肾小球硬化。3、在3D细胞(3D球体内细胞)和3DM细胞(从3D球体迁移的细胞)中检测到了细胞自噬的存在。与3D细胞不同,3DM细胞中TGF-β1和纤维连接蛋白(Fn)表达降低,这证明了细胞自噬在肾纤维化中的肾脏保护作用。4、3DM细胞中CD24+细胞的比例增加,我们推测,通过自噬过程存活下来的细胞可能通过去分化获得了祖细胞的一些特征。结论本文通过对透明质酸(HA)的改性,在乙二胺(EDA)和EDC交联的作用下成功合成了带有正电荷的HA-EDA。我们使用带有正电荷的HA-EDA和带有负电荷的HA,通过LBL在单个肾系膜细胞表面形成了超薄膜。这些经过层层组装的单细胞在用胰蛋白酶处理后形成了 3D RMCs多细胞球体。相关实验结果表明,通过这种LBL/胰蛋白酶处理的方法我们成功构建了体外3D缺氧微环境。同时,本研究发现3D球体中的缺氧微环境诱导了肾系膜细胞中TGF-βl和miR-382的高表达,随后通过下调PTEN的表达导致了肾小球硬化。这种LBL组装球体为我们提供了一种灵活而实用的方法来构建缺氧微环境,以研究缺氧对肾纤维化的作用和机制。基于我们开发的3D RMCs多细胞球体,我们还惊奇地发现一些通过自噬、缺氧微环境存活下来的细胞经历了去分化并获得了一些祖细胞的特征。(本文来源于《南方医科大学》期刊2018-04-22）
何雯[3]（2018）在《四种穿心莲内酯水溶性衍生物在Caco-2和Calu-3单细胞层模型上的转运研究》一文中研究指出中药及其活性成分在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄规律是中药现代化研究的热点之一,对理解中医药的科学内涵、优选中药剂型具有重要意义。现有的关于中药及其活性成分体内吸收情况的研究主要以动物实验为主,其缺点在于存在种属差异且操作复杂、周期长、重复性差。相比于动物实验,体外细胞模型有效避免了实验动物与人体间的种属差异,重现性高,可用于高通量筛选,具有广阔的发展前景,近年来越来越多的研究者采用体外单细胞层模型评价中药及其活性成分的体内吸收情况。穿心莲内酯是药食两用植物穿心莲的主要药效成分,穿心莲内酯及其水溶性衍生物具有抗菌消炎、抗病毒等多种生物学活性,广泛应用于呼吸系统疾病的治疗。本文建立了 Caco-2和Calu-3单细胞层模型,观察四种穿心莲内酯水溶性衍生物在单细胞层模型上的转运过程,预估药物在消化道黏膜和呼吸道黏膜的渗透性。实验逐一建立四种穿心莲内酯水溶性衍生物高效液相色谱含量测定方法,并进行方法学验证,结果表明这些方法适用性好、准确度高,可用干测定穿心莲内酯水溶性衍生物的含量。采用四甲基偶氮唑盐比色法计算不同浓度穿心莲内酯水溶性衍生物作用24小时后Caco-2细胞株和Calu-3细胞株的存活率,比较其对于两细胞株细胞活性的影响,确定转运实验时的安全给药浓度。实验结果表明,四种穿心莲内酯水溶性衍生物对于两细胞株的细胞活性均表现为抑制作用,且具有浓度依赖性;四种穿心莲内酯水溶性衍生物对Caco-2细胞株细胞活性的抑制较Calu-3细胞株更大;在给定浓度范围内,四种穿心莲内酯水溶性衍生物安全性由大至小依次为穿心莲内酯总磺化物、亚硫酸氢钠穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐、脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐;当浓度低于500 μg·L-1时,四种穿心莲内酯水溶性衍生物作用于两细胞株,其存活率均接近甚至高于90%,即0-500μg·mL-1为转运实验时的安全给药浓度。实验成功建立Caco-2和Calu-3单细胞层模型,考察给药浓度、作用时间及P-糖蛋白抑制剂对穿心莲内酯水溶性衍生物转运的影响。结果表明,四种穿心莲内酯水溶性衍生物在Caco-2单细胞层模型上双侧转运均具有浓度依赖性,转运量随给药浓度升高而增大;穿心莲内酯总磺化物和脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐在Calu-3单细胞层模型上表观渗透系数值较大,呼吸道黏膜渗透性更高,更适合于肺部吸入制剂的开发,亚硫酸氢钠穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐在Caco-2单细胞层模型上表观渗透系数值较大,消化道黏膜渗透性更高,更适合于口服给药制剂的开发;添加P-糖蛋白抑制剂后,脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐在Calu-3单细胞层模型上的外排比及亚硫酸氢钠穿心莲内酯在Caco-2单细胞层模型上的外排比均显着降低,即P-糖蛋白参与二者转运过程,故联合应用P-糖蛋白抑制剂可以减少外排,促进吸收,增加渗透性。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-04-05）
赵婷婷[4]（2015）在《基于单细胞层层组装技术构建叁维多细胞肿瘤球体模型》一文中研究指出研究背景肿瘤是指机体细胞在各种致癌因素作用下发生基因突变,导致组织失去机体对其生长的正常调控,进而经过一系列不可控的异常克隆增殖所形成的异常新生组织。肿瘤包括良性和恶性两大类。肿瘤,特别是恶性肿瘤(癌症)严重危害人类的生命健康。而且随着人类寿命的不断增长,癌症的发病率和死亡率也逐渐上升,成为全世界最受关注的健康问题之一。肿瘤微环境是肿瘤细胞在其发生发展过程中所处的内环境,由肿瘤细胞本身、间质细胞、微血管、组织液及少量浸润细胞等共同组成。肿瘤的发生发展始终伴随着肿瘤细胞同其周围微环境的相互作用。相关研究已揭示,早在实体瘤血管发生之前,因肿瘤细胞迅速增殖而造成的缺氧环境可能导致肿瘤进展和更差的临床结局。而在血管形成后,肿瘤局部长期的缺血缺氧环境所造成的瘤体中央坏死也被看作是侵袭性癌的共同特征。体外模拟肿瘤细胞微环境,可以为更进一步研究肿瘤细胞癌变机理、增殖、分化及临床药物筛选提供更好的研究方法。迄今为止,在绝大多数研究中,肿瘤细胞的培养均是采用平面培养皿的二维(2D)培养模型和动物在体培养模型。在2D培养模型中,肿瘤细胞所处的环境显然与在体的实体瘤微环境截然不同,肿瘤细胞缺乏细胞外基质(extracellular matrix, ECM),无法同肿瘤微环境中的多种因素发生交互作用,导致细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间相互联系所致的细胞形态改变、细胞生长、增殖与分化等变化被忽略。相比于2D培养模型,在叁维(3D)培养条件下的肿瘤组织中存在不同表型的肿瘤细胞,包括增殖细胞、非增殖细胞以及坏死细胞等,这使培养的肿瘤细胞能够表现出更接近于在体肿瘤细胞的特性。另外,通过在裸鼠体内注射肿瘤细胞或者移植肿瘤组织的方法建立的动物肿瘤模型已经得到大多数学者的认可,这也是目前进行肿瘤研究的金标准。然而,动物肿瘤模型有一定的局限性,注射到裸鼠体内的肿瘤细胞会受到体内诸多因素的影响,体内的肿瘤细胞难免会发生不可控制的基因及相关蛋白表达的改变。因此,我们有必要探索一种更好的方法来替代2D培养系统和动物模型。3D体外组织的构建可以用来弥补二维培养模型的不足,为我们研究肿瘤及其相关机制提供了一种比动物模型更快捷、经济的可靠选择。随着近年来组织工程学的迅猛发展,基于3D培养的组织工程肿瘤技术进展迅速,呈现出多样化的发展趋势。然而,这其中的大部分方法都难以控制瘤体结构以及细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质间的相互作用。例如,多细胞肿瘤悬浮球(multicellular tumor suspension, MCTs)由多种单个细胞组成,但是细胞与细胞之间无细胞外基质,因而预想的细胞与基质之间的相互作用缺失。另一方面,目前的3D模型大多依赖于天然的和人工合成的高分子聚合物。天然分子虽然具有与ECM相似的特性,能够尽可能的模拟肿瘤微环境,但由于其往往存在残存的信号分子及不定量的杂质,导致使用天然材料的实验无法做到完全可控和绝对严谨。人工聚合高分子材料虽然避免了上述缺陷,但由于其微纤维间的孔径往往能达到细胞直径的千倍级甚至万倍级,从而导致有效成分的过快扩散和迅速丢失。据报道,胶原凝胶硬度低,降解速度快,而且其许多特性受提取过程的影响,从而限制了它们的应用。因此,从该领域发展的角度来看,我们可以将从纳米级或微纳米级到宏观水平的各种因素均应考虑在体外构建的叁维组织模型中。纳米级的细胞外基质存在诸多优点。首先,ECM本身就是由多种纳米级高分子纤维组织组成；其次,纳米级细胞外基质有较高的表面积和体积比,能够促使细胞之间的联系,并且促进生物活性分子的运输；再者,细胞膜和细胞迁移相关的细胞骨架均属于纳米级。因此,纳米级ECM可以促进细胞与细胞之间,细胞与细胞微环境之间的相互作用,在肿瘤发生发展、诊断及临床药物筛选的研究中具有明显的优势。寻找合适的生物材料,并通过便捷的方法构建叁维培养肿瘤模型,以达到模拟体内真实肿瘤微环境的目的,是本研究的重点。明胶和海藻酸钠作为天然生物材料,无毒、可降解,并且具有良好的亲水性、细胞亲和性及细胞生物相容性。在组织工程支架中,明胶/海藻酸钠溶液作为一种软支架材料,可以与细胞混合,实现细胞的立体培养。这种支架材料的优势在于不但在表面而且在支架内部也可以含有细胞,从而为多种细胞的空间合理分布提供了可能。壳聚糖是甲壳素脱乙酞化产物,属于聚阳离子多糖(Pka=6.3)物质,壳聚糖中的N-乙酞基毗喃与细胞外基质中的糖胺聚糖(GAGs)组成类似,且具有生物活性、可生物降解。本研究选用A型明胶、海藻酸钠及中分子量壳聚糖,通过层层组装和聚合的方法,构建一种体外叁维多细胞肿瘤球体模型来模拟肿瘤细胞微环境,为研究乳腺癌的癌变机理、癌细胞转移以及药物临床前评价等方面提供一种更加灵活简便的方法。上皮间质转化(Epithelial Mesenchymal Transition, EMT)是指本身具有极性的上皮细胞在某些因素的刺激下,上皮特性减少、间质特性增多、细胞基质粘附消失和细胞骨架重塑,从而导致上皮细胞极性消失,细胞运动能力增加,获得浸润性和迁移能力。在上皮来源的恶性肿瘤中,EMT是肿瘤细胞获得浸润和迁移能力的重要途径。尽管EMT的发生同肿瘤微环境密切相关,但肿瘤微环境诱导肿瘤细胞发生EMT的确切机制仍不清楚。本研究在已构建的叁维肿瘤模型的平台上比较研究二维培养体系与叁维培养体系中乳腺癌细胞EMT相关蛋白的表达差异,如CD47、N-Cadherin等。在体外叁维培养体系下模拟体内乳腺癌N-Cadherin表达增多触发EMT促进肿瘤细胞浸润和迁移的临床特点,对我们构建的叁维肿瘤模型进行验证。目的：1.构建用于基础研究以及药物筛选的体外组织工程化肿瘤叁维模型,并对该模型的形貌、表面电荷、生物相容性等性质进行研究；2.体外所构建的叁维人源性乳腺癌肿瘤模型的体外验证。方法：1.细胞培养购入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,复苏后传代,将其培养在含有10%胎牛血清,0.1%青霉素和链霉素的RPMI 1640培养基中,于37℃,含5%C02的培养箱中常规培养。每天换液,待细胞融合率达80%时,用含0.02% EDTA的0.25%的胰蛋白酶液消化并传代。待细胞量足够,取足量细胞用于层层组装。2.对单个细胞进行(明胶-海藻酸钠)3-壳聚糖的层层组装及多细胞肿瘤球体的形成设计合成与细胞相容性良好的纳米级细胞外基质成分,以促进细胞与细胞之间,细胞与细胞微环境之间的相互作用。该纳米级细胞外基质成分包括A型明胶、海藻酸钠,需分别带有正电荷和负电荷,因此细胞外基质成分依次层层包裹于细胞表面。细胞经胰酶消化后,计数1×107,于离心机中,1000rpm/min,离心5min,弃去上清液,用7ml 0.1% (w/v)明胶溶液轻轻重悬收集的细胞后,常温放置10min;接着于离心机中,1000rpm/min,离心5min,弃去明胶溶液,此时明胶层粘附于单个细胞表面。然后,用7m1预热的0.1%(w/v)海藻酸钠溶液轻轻重悬包裹有明胶层的细胞团,则带有阴离子的聚合电解质层粘附于明胶层上,常温孵育10min后,离心弃去海藻酸钠溶液；接着将等体积的A型明胶溶液(阳离子聚合电解质溶液)加入包裹有明胶和海藻酸钠的细胞团。此过程通过依次在细胞表面包裹带有相反电荷的聚合电解质叁个循环。最后,用7m1预热的0.2%(w/v) PH 6.7的中分子量壳聚糖溶液(阳离子聚合电解质)使最外层均粘附有阴离子聚合电解质(海藻酸钠)的单个肿瘤细胞之间发生聚合反应,数分钟后,1000rpm/min,离心10min,多细胞肿瘤球形成,弃去壳聚糖溶液,用预热的含10%FBS的RPMI 1640培养基轻轻重悬,然后将多细胞肿瘤球转移至一个新的六孔板中,加入RPMI 1640培养基,置于5%CO2,37℃培养箱中培养,培养基每天更换。3.组织工程化人源性乳腺癌叁维模型的表征及生物相容性研究组织工程化人源性乳腺癌叁维模型构建成功后,一般情况下,需要对其表面形貌、所带电荷、生物相容性等性质进行研究。本实验中分别采用光学显微镜、激光粒度分析仪、扫描电镜、荧光显微镜、活死染色等仪器和技术对其性质进行测量和分析。4.体外所构建叁维人源性乳腺癌肿瘤模型的体外验证实验分为叁组,3Di,3Dm和2D,称肿瘤球中的细胞为3Dis；肿瘤球培养过程中,观察发现其培养皿底板有细胞迁移出来并贴壁生长,称迁移出来的细胞为3Dms；称二维培养的细胞为2D。分别培养四天后,提取总蛋白,Western blotting检测p-ERK, ERK, CD47蛋白的表达；取出多细胞肿瘤球,PBS洗叁次,4%多聚甲醛固定24小时,30%蔗糖溶液固定1周后,冰冻切片,放于37℃干燥箱中烤24小时,免疫荧光检测E-Cadherin, N-Cadherin蛋白的表达。5.统计学分析以上实验均设有阴性对照实验,每次实验至少重复3次。统计分析采用SPSS13.0统计软件完成,结果用均数±标准差(Mean±SD)来表示。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),方差齐性的组间比较采用Tukey法,方差不齐的组间比较采用Dunnett's T3法,p<0.05认为差异有统计学意义。结果：1.成功构建体外组织工程化人源性乳腺癌叁维模型。通过A型明胶与海藻酸钠静电作用层层包裹于细胞叁个循环,得到单个肿瘤细胞层层组装的模型；然后加入中分子量壳聚糖溶液,使层层组装的单个细胞间发生聚合,形成多细胞肿瘤球,即组织工程化人源性乳腺癌肿瘤模型。2.光学显微镜下显示人源性乳腺癌叁维模型呈团块状,内部细胞(3Dis)形态规则,呈圆形,轮廓清晰,连接紧密；随着细胞培养时间的延长,一些肿瘤细胞从肿瘤球体迁出,迁移出的肿瘤细胞(3Dmms)形态规则,轮廓清晰,贴壁生长,状态良好。3.用FITC标记明胶,在荧光显微镜下单纯(明胶-海藻酸钠)3层层组装组以及(明胶-海藻酸钠)3层层组装后用壳聚糖聚合组均显示：每个细胞周围均有一层绿色荧光。这说明层层组装的纳米膜成功包裹于单个细胞。4.激光粒度分析仪测试结果显示,细胞表面电荷随着带相反电荷聚合电解质的轮流加入,呈现曲折变化,表明细胞表面层层组装上了纳米材料。5.扫描电镜观察3D体外肿瘤模型的形态显示：多细胞肿瘤球具有叁维立体结构,细胞生长良好,细胞表面成功包裹了纳米材料,保持了细胞外基质的完整性；细胞与细胞之间并非紧密连接,有较大孔隙,有利于水分,营养物质及氧气渗透,形成适于肿瘤细胞生长的叁维立体环境。6.对多细胞肿瘤球进行活死染色,荧光显微镜下观察示,整个肿瘤球呈绿色(活细胞),几乎没有红色(死细胞)出现。证明纳米材料生物相容性良好,成功构建了便于基础研究以及药物筛选的叁维人源性乳腺癌模型。7. Western blotting和免疫荧光验证了此基于单个细胞层层组装构建的叁维多细胞肿瘤球体模型内的微环境可通过N-Cadherin的过表达来触发EMT。Western blotting结果显示3Dm和2D组p-ERK和ERK的表达均明显高于3Di组；而3Di组CD47表达明显高于3Dmm和2D组。免疫荧光结果显示2D组呈现E-Cadherin过表达,但无N-Cadherin表达；而3Di组呈现高表达的E-Cadherin和N-Cadherin; 3Dm组则呈现E-Cadherin高表达,N-Cadherin低表达。结论：在本研究中,我们用超薄基质材料层层包裹单个肿瘤细胞的方法构建了一个叁维多细胞肿瘤球体模型来模拟在体实体瘤的微环境,并对该模型的形貌及表面电荷进行一系列表征,通过活死染色验证了模型中细胞的活力。还在该叁维模型的平台上进一步比较研究了二维培养体系与叁维培养体系中乳腺癌细胞EMT相关蛋白的表达差异,并且该模型在体外叁维培养体系下很好地模拟了体内乳腺癌N-Cadherin表达增多触发EMT促进肿瘤细胞浸润和迁移的临床特点,对我们构建的叁维肿瘤模型进行验证。(本文来源于《南方医科大学》期刊2015-03-26）
刘薇,杨珂,王一飞,胡明,刘中秋[5]（2013）在《UPLC法检测染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征》一文中研究指出目的研究染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法将染料木黄酮的细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-醋酸铵水溶液为流动相,以睾丸酮为内标,采用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)法检测。考察时间、pH值等因素对染料木黄酮吸收的影响,测定透过Caco-2单细胞层的染料木黄酮浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果 Caco-2细胞对染料木黄酮的吸收在1 h内呈线性,药物摄取时间定为1 h;pH值对染料木黄酮的吸收没有显着影响。染料木黄酮的线性范围为0.625～40μmol/L,日间、日内精密度均小于15%。Papp从基顶侧(apical,AP)到基底侧(basolateral,BL)为1.51×10 5cm/s,从BL侧到AP侧为1.84×10 5cm/s,其渗透系数Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)为1.22。结论染料木黄酮在肠道的吸收主要以被动扩散为主,UPLC检测方法简单、灵敏度高,可用于研究染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。(本文来源于《药物评价研究》期刊2013年02期）
祝欣刚,杨青[6]（2012）在《人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价》一文中研究指出目的利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法。方法使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性;通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度;通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响。结果使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER>500Ω.cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparent permeability,Papp)<5×10-5 cm/s,表明单细胞层的完整性良好。同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显着升高,表明单细胞层出现明显的极性分化。短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的RNA表达水平基本一致。结论含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。(本文来源于《复旦学报(医学版)》期刊2012年01期）
赵洁,杨彩华,胡明,刘中秋[7]（2010）在《人参皂苷Rb_3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征研究》一文中研究指出目的:研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法:人参皂苷Rb3细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-1mmo·lL-1甲酸铵水溶液(34∶66)为流动相,以人参皂苷Rg2为内标,采用电喷雾离子源(ESI),在负离子条件下以多重离子反应监测模式(MRM)检测。检测离子:m/z1077.7→m/z783.4(人参皂苷Rb3),m/z783.6→m/z475.1(人参皂苷Rg2)。测定透过Caco-2单细胞层的人参皂苷Rb3浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果:人参皂苷Rb3的线性范围为50～2000ng·mL-1,日间、日内精密度均小于15%。Papp从基顶侧(AP)到基底侧(BL)为3.22×10-6cm·s-1,从BL侧到AP侧为6.0×10-6cm·s-1,其P(BL-AP)/P(AP-BL)比值为1.86。结论:本方法简单、灵敏度高,可用于研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。(本文来源于《中国药房》期刊2010年03期）
赵洁,杨彩华,胡明,刘中秋[8]（2009）在《人参皂苷Rb_2透过Caco-2单细胞层的吸收特征研究》一文中研究指出目的测定人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法采用液相色谱-质谱联用(LC-MS-MS)法,测定人参皂苷Rb2浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果人参皂苷Rb2从基顶侧至基底侧的表观渗透系数Papp(AP-BL)为3.27×10-7cm·s-1,从底侧至顶侧Papp(BL-AP)为3.16×10-6cm·s-1,Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)比值为9.63。结论本研究阐明了人参皂苷Rb2在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征,这在国内尚属首次报道。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2009年12期）
胡桂香,张长会,赵文娜,俞庆森[9]（2009）在《药物对Caco-2单细胞层穿透性的QSPR研究》一文中研究指出Caco-2单细胞层用于模拟或预测体内小肠吸收均较剥离的小肠膜效果好.利用偏最小二乘分析方法研究VolSurf参数与药物透过Caco-2单细胞层的渗透系数之间的定量结构-性质关系(QSPR),得到较好的结果(r2=0.95,q2=0.75).对其它类药物的预测结果表明,用结构不同的化合物所建立的模型对肽类药物以及同系物分子均有一定的预测能力,但是当分子的柔性键多,可能形成分子内氢键时,模型的预测能力大大下降.参数分析表明对Caco-2单细胞层渗透性高的药物分子必须具有合适的氢键给体和受体;分子内局部能量极小值越大,对渗透越有利;在一定范围内体积大且球形性高的分子对渗透有利.(本文来源于《浙江大学学报(理学版)》期刊2009年03期）
李秋霞,李茹柳,陈蔚文[10]（2007）在《培养时间对Caco-2单细胞层完整性及细胞连接的影响》一文中研究指出【目的】观察培养时间对Caco-2单细胞层完整性及细胞连接的影响。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察Caco-2细胞的生长曲线;采用含有聚碳酸酯膜的特殊装置TBC(Transwell Bicameral Chambers),通过酚红透过实验观察Caco-2单细胞层的完整性和渗透性;透射电镜下观察细胞连接情况。【结果】细胞种植后的第1~7天呈增殖状态,第8天开始细胞数目下降。酚红透过实验中,在第3~4天下层培养液中所含酚红明显减少,电镜下可见有明显的微绒毛形成;细胞种植后的第13天,可见有明显的细胞连接形成。【结论】该模型用于相关研究时,应选择Caco-2单细胞层完整性增强和细胞连接形成的适宜培养时间。(本文来源于《广州中医药大学学报》期刊2007年01期）
单细胞层论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景肾纤维化,包括肾小球硬化和肾小管间质纤维化,是慢性肾脏病的普遍特征。许多病理因素,例如慢性持续感染,缺氧,控制不佳的高血压和糖尿病等,均可以引发进行性和不可逆的肾纤维化。其中糖尿病肾病(DN)主要表现为肾小球硬化,其发病机制目前尚不完全明确。高血糖、遗传背景、血流动力学异常等因素均能引起代谢改变、血管活性物质异常,无法精确解析肾纤维化的发生发展过程。因此,积极探索肾纤维化的相关发病机制,并据此研发新的治疗策略一直是研究者努力的目标与方向,其中,缺氧被认为是一个关键因素。最近的研究已经强调了肾内低氧作为慢性肾脏疾病的一个潜在机制。本研究采用单细胞层层组装技术(LBL)成功地构建了体外3D缺氧微环境,以研究miR-382和细胞自噬在肾纤维化中的作用。目的1、基于单细胞LBL技术平台,构建肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、明确缺氧微环境对肾系膜细胞miR-382以及相关信号通路的影响。3、明确miR-382诱导肾纤维化的相关机制。内容和方法1、利用单细胞LBL组织工程手段构建肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、采用qRT-PCR法和免疫荧光分析比较研究在2D、3D培养条件下,缺氧微环境对肾系膜细胞miR-382水平及相关信号通路中各种信号分子表达的影响。3、采用免疫荧光和蛋白质印迹分析(westernblotting)比较研究在2D、3D培养条件下,缺氧刺激对肾系膜细胞纤维化的影响,以及miR-382在肾纤维化中所扮演的角色。4、统计学分析采用SPSS20.0统计软件进行统计学分析,结果用均数±标准差(Mean±SD)来表示。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),方差齐时的组间比较采用Tukey法,方差不齐时组间比较采用Dunnett'sT3法,p<0.05认为有显着性差异。结果1、利用单细胞LBL组织工程手段和简单的胰酶消化的方法成功构建了肾系膜细胞的3D缺氧微环境培养体系。2、相比于2D培养体系,3D缺氧微环境培养体系诱导了转化生长因子β1(TGF-β1)和miR-382的高表达,通过下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)的表达导致了肾小球硬化。3、在3D细胞(3D球体内细胞)和3DM细胞(从3D球体迁移的细胞)中检测到了细胞自噬的存在。与3D细胞不同,3DM细胞中TGF-β1和纤维连接蛋白(Fn)表达降低,这证明了细胞自噬在肾纤维化中的肾脏保护作用。4、3DM细胞中CD24+细胞的比例增加,我们推测,通过自噬过程存活下来的细胞可能通过去分化获得了祖细胞的一些特征。结论本文通过对透明质酸(HA)的改性,在乙二胺(EDA)和EDC交联的作用下成功合成了带有正电荷的HA-EDA。我们使用带有正电荷的HA-EDA和带有负电荷的HA,通过LBL在单个肾系膜细胞表面形成了超薄膜。这些经过层层组装的单细胞在用胰蛋白酶处理后形成了 3D RMCs多细胞球体。相关实验结果表明,通过这种LBL/胰蛋白酶处理的方法我们成功构建了体外3D缺氧微环境。同时,本研究发现3D球体中的缺氧微环境诱导了肾系膜细胞中TGF-βl和miR-382的高表达,随后通过下调PTEN的表达导致了肾小球硬化。这种LBL组装球体为我们提供了一种灵活而实用的方法来构建缺氧微环境,以研究缺氧对肾纤维化的作用和机制。基于我们开发的3D RMCs多细胞球体,我们还惊奇地发现一些通过自噬、缺氧微环境存活下来的细胞经历了去分化并获得了一些祖细胞的特征。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
单细胞层论文参考文献
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