尼罗罗非鱼淋巴毒素α基因克隆与表达分析

论文摘要

【目的】克隆尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）淋巴毒素α基因（lymphotoxin alpha, LTα）,分析该基因的组织分布,探讨该基因在抗菌抗病毒免疫过程中的重要作用。【方法】通过RACE技术获得尼罗罗非鱼淋巴毒素α基因（On-LTα）的cDNA全长,通过生物信息学分析其序列结构特征;利用实时荧光定量PCR检测基因的组织分布特征,以及健康尼罗罗非鱼感染无乳链球菌后该基因的表达变化,并进一步分离出尼罗罗非鱼非特异性毒性细胞（NCC）,检测脂多糖（LPS）和聚肌胞苷酸（Poly I:C）刺激后,On-LTα在NCC中的表达变化。【结果】On-LTα基因序列全长为2699 bp,包含705 bp开放阅读框（ORF）,编码234个氨基酸（GenBank登录号:MK770358）。该蛋白属于跨膜蛋白,具有肿瘤坏死因子（TNF）家族保守结构域。实时荧光定量结果表明,On-LTα在健康尼罗罗非鱼11种组织中均有表达,在脾脏中的表达量最高;无乳链球菌刺激后,该基因在脾脏中的表达量显著升高;LPS与PolyI:C刺激后,On-LTα在NCC中表达量也显著上调。【结论】On-LTα参与了尼罗罗非鱼抗菌抗病毒的免疫应答过程。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 总RNA的提取及c DNA的合成
•     1.2.2 On-LTα基因全长c DNA克隆
•     1.2.3 On-LTα基因生物信息学分析
•     1.2.4 无乳链球菌人工感染
•     1.2.5 尼罗罗非鱼头肾非特异性细胞毒性细胞（NCC）的分离
•     1.2.6 LPS和Poly（I:C）刺激NCC
• 2 结果与分析
•   2.1 On-LTα基因c DNA全长序列及氨基酸序列分析
•   2.2 On-LTα蛋白空间结构预测
•   2.3 同源性比较及进化分析
•   2.4 尼罗罗非鱼On-LTα基因的组织分布
•   2.5 无乳链球菌刺激后尼罗罗非鱼脾脏中On-LTα表达变化
•   2.6 LPS、Poly I:C分别刺激NCC后On-LTα的表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邹子鸿,郑琦,黄瑜,汤菊芬,王蓓,鲁义善,简纪常,蔡佳

关键词: 尼罗罗非鱼,淋巴毒素基因,基因克隆,基因表达,非特异性细胞毒性细胞

来源: 广东海洋大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31302226,31572651),广东海洋大学优秀硕士学位论文培育项目(201833)

分类号: Q78

页码: 1-8

总页数: 8

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