miR-33a-5p通过靶向作用于S1PR1抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移

论文摘要

目的初步探讨miR-33a-5p和鞘氨醇1磷酸酯受体1（S1PR1）在人乳腺癌细胞中的表达水平,确认二者的潜在靶向关系并观察miR-33a-5p及S1PR1的表达调控对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100及4种乳腺癌细胞中miR-33a-5p、S1PR1的相对表达水平并分析二者相关性;生物信息学方法及双荧光素酶报告基因分别预测和鉴定miR-33a-5p与S1PR1基因的靶向关系,并检测miR-33a-5p mimics转染MDA-MB-231细胞后S1PR1蛋白的表达。后将细胞实验分5组:miR-33a-5p对照组（miRNC）、miR-33a-5p模拟物组（miR-33a-5p mimics）、S1PR1空载体组（pLV-NC）、S1PR1过表达组（pLV-S1PR1）以及miR-33a-5p mimics+pLV-S1PR1组,MTT和划痕实验分别检测各组细胞增殖和迁移能力。结果与正常乳腺上皮细胞HBL-100比较,miR-33a-5p及S1PR1在4种乳腺癌细胞系中的表达分别显著降低和升高（P<0.05;P<0.01）,且二者呈显著负相关性（r=-0.994;P=0.006）;预测及验证结果显示,S1PR1为miR-33a-5p的靶基因,且miR-33a-5p mimics能显著降低MDA-MB-231细胞中S1PR1蛋白的表达（P<0.01）;与miR-NC组比较,miR-33a-5p mimics显著降低了细胞增殖、迁移能力（均P<0.01）;与pLV-NC组比较,S1PR1过表达显著增加了细胞增殖、迁移能力（P<0.05;P<0.01）;且与pLV-S1PR1组比较,miR-33a-5p mimics能显著逆转S1PR1过表达对细胞增殖、迁移能力的促进作用。结论 miR-33a-5p能显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移,其作用机制与靶向负调控S1PR1密切相关。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞株、主要试剂
•   1.2 细胞的培养
•   1.3 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞株中miR-33a-5p及S1PR1的水平
•   1.4 生物信息学和双荧光素酶报告实验分别预测、验证miR-33a-5p与S1PR1的靶向关系
•   1.5 Western blot检测miR-33a-5p表达调控对S1PR1表达的影响
•   1.6 MTT检测细胞增殖能力
•   1.7 划痕实验检测细胞迁移能力
•   1.8 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 miR-33a-5p与S1PR1在乳腺癌细胞株中的表达及相关性
•   2.2 miR-33a-5p与S1PR1靶向关系预测及验证
•   2.3 miR-33a-5p与S1PR1对细胞增殖能力的影响
•   2.4 miR-33a-5p与S1PR1对细胞增殖迁移的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 毛君,付珺

关键词: 乳腺癌,细胞增殖,细胞迁移

来源: 中国实验诊断学 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 肿瘤学

单位: 华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院甲状腺乳腺外科,华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院胸外科

分类号: R737.9

页码: 2152-2157

总页数: 6

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