家蚕超长链脂肪酸延长酶基因Bmelo424的克隆及功能分析

论文摘要

超长链脂肪酸延长酶家族基因影响生物体的多种生理功能。文中克隆了家蚕的一个该家族成员Bmelo424基因,其ORF为558 bp。该基因的蛋白序列预测有4个跨膜结构域,并有6个丝氨酸磷酸化位点、8个苏氨酸磷酸化位点和4个酪氨酸磷酸化位点,其亚细胞定位于内质网中,二级结构分析结果显示其α-螺旋和β-折叠股分别占26.7%和20%。荧光定量PCR结果显示Bmelo424基因在家蚕各组织均有表达,尤其在头部表达量最高。通过在酿酒酵母中异源表达Bmelo424基因的方法研究其对脂肪酸延伸的作用,GC-MS结果表明,携带pYES2-Bmelo424重组质粒的酿酒酵母的C16:1n-7脂肪酸含量有显著提高,而C16:0、C18:0和C18:1n-9的含量下降。温度胁迫结果显示,Bmelo424基因能够提高酿酒酵母的低温适应能力,但却降低其高温适应能力。这为探究家蚕Bmelo424基因的功能提供了参考。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验昆虫
•     1.1.2 试剂耗材
•   1.2 方法
•     1.2.1 RNA提取及cDNA合成
•     1.2.2 Bmelo424基因的克隆
•     1.2.3 Bmelo424基因的组织表达特征
•     1.2.4 Bmelo424蛋白序列和结构分析
•     1.2.5 Bmelo424表达载体的构建
•     1.2.6 pYES2-Bmelo424的诱导表达
•     1.2.7 重组产物的GC-MS分析
•     1.2.8 酿酒酵母温度胁迫处理
• 2 结果与分析
•   2.1 Bmelo424基因的克隆与分析
•   2.2 Bmelo424蛋白序列分析
•   2.3 Bmelo424基因的组织表达特征
•   2.4 重组质粒的构建和鉴定
•   2.5 重组质粒转化酿酒酵母细胞
•   2.6 重组质粒诱导产物的鉴定
•   2.7 转基因酿酒酵母的温度胁迫响应
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 左伟东,康宁,李春林,栾悦,童晓玲,代方银,鲁成

关键词: 家蚕,超长链脂肪酸延长酶,表达特征,酿酒酵母,温度胁迫

来源: 生物工程学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室,西南大学生物技术学院

基金: 国家自然科学基金(Nos.31830094,31472153),国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2013AA102507),现代农业产业技术体系项目(No.CARS-18-ZJ0102),中央高校基本科研业务费(No.XDJK2013C129)~~

分类号: Q963

DOI: 10.13345/j.cjb.180408

页码: 435-444

总页数: 10

文件大小: 1910K

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