乙型肝炎病毒HBx蛋白与醛缩酶B相互作用的验证

论文摘要

目的验证乙型肝炎病毒HBx蛋白与醛缩酶B（ALDOB）存在蛋白相互作用。方法在CytoTrap细胞质酵母双杂交验证HBx蛋白与ALDOB蛋白发生相互作用的前提下,将HBx编码基因和ALDOB编码基因分别克隆入pFLAG-CMV-2载体和pcDNA3.1/myc-His（-）A载体。转染Huh7肝细胞,经蛋白质印迹法检测融合蛋白表达后,利用免疫共沉淀（CO-IP）进一步验证HBx蛋白与ALDOB蛋白在肝细胞内发生相互作用。结果 CytoTrap细胞质酵母双杂交验证HBx蛋白与ALDOB蛋白可以发生相互作用,并成功构建pFLAG-CMV-2-HBx和pcDNA3.1/myc-His（-）A-ALDOB载体,融合蛋白FLAG-HBx和ALDOB-myc可以在Huh7细胞内表达并能相互沉淀。结论 HBx蛋白和ALDOB蛋白存在直接相互作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 仪器与试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 CytoTrap细胞质酵母双杂交验证HBx蛋白与ALDOB蛋白在酵母细胞内相互作用
•     1.2.2 真核表达载体pcDNA3.1/myc-His （-） A-ALDOB的构建
•     1.2.3 Western blot检测FLAG-HBx和ALDOB-myc融合蛋白在Huh7肝细胞的表达
•     1.2.4 免疫共沉淀验证HBx蛋白和ALDOB蛋白相互作用
• 2 结 果
•   2.1 CytoTrap细胞质酵母双杂交系统分析HBx蛋白与ALDOB蛋白的相互作用
•   2.2 ALDOB和HBx重组载体的构建及鉴定
•   2.3 重组载体pcDNA3.1/myc-His （-） A-ALDOB和pFLAG-CMV-2-HBx在人Huh7肝细胞中的表达
•   2.4 免疫共沉淀验证HBx蛋白和ALDOB蛋白在Huh7肝细胞中的相互作用
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵福河,焦佰海,焦伯延

关键词: 蛋白,醛缩酶,免疫共沉淀

来源: 中国卫生检验杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 济宁市疾病预防控制中心,深圳市血液中心

基金: 济宁市科技发展计划项目[医疗卫生类(2014JNNK-25)]

分类号: R373.21

页码: 393-395+399

总页数: 4

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