DC-SIGN受体促进肠道病毒71型体外感染树突状细胞

论文摘要

目的探讨树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素（dendritic cell specific intercellular adhesion molecule-3 grabbing non integrin,DC-SIGN）的表达对肠道病毒71型（enterovirus type 71,EV71）体外感染人树突状细胞（dendritic cells, DCs）和293T细胞的影响。方法梯度密度离心法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,体外诱导培养DCs,通过RT-PCR方法克隆DC-SIGN分子,并构建稳定表达DC-SIGN分子的载体pLB-DC-SIGN,脂质体方法转染293T细胞。分别用EV71感染对照组293T细胞和过表达DC-SIGN的293T细胞,荧光定量PCR检测病毒mRNA,蛋白质印迹法检测EV71/VP1的表达水平;同时用DC-SIGN抑制剂酵母甘露聚糖阻断DCs表面的DC-SIGN分子后,荧光定量PCR检测病毒mRNA,蛋白质印迹法检测EV71/VP1的表达水平。结果过表达DC-SIGN的293T细胞与对照组293T细胞相比,感染病毒量明显增高,EV71/VP1表达量显著增加,而阻断DC-SIGN的DCs病毒感染量低于对照组DCs,EV71/VP1表达量明显降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 DC-SIGN分子可促进EV71体外感染DCs和293T细胞,可能是EV71感染的受体之一。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1病毒株及细胞来源
•   1.2仪器及试剂
•   1.3 DCs的诱导培养
•   1.4抑制剂酵母甘露聚糖处理DCs
•   1.5 pLB-DC-SIGN过表达载体的构建
•   1.6 pLB-DC-SIGN过表达载体通过脂质体法转染293T细胞
•   1.7荧光定量PCR方法检测EV71 mRNA
•   1.8 western blot法检测EV71/VP1
•   1.9统计学分析
• 2 结果
•   2.1 DCs诱导培养和抑制剂对DC-SIGN的阻断效果
•   2.2 pLB-DC-SIGN过表达载体的酶切鉴定与测序
•   2.3 western blot检测DC-SIGN蛋白在293T细胞的表达
•   2.4 荧光定量PCR检测EV71 mRNA
•   2.5 western blot检测EV71/VP1蛋白表达水平
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张莉,许中,沈东华,张剑峰

关键词: 树突状细胞,肠道病毒型

来源: 临床检验杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 南京医科大学附属苏州医院检验科

分类号: R392

DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2019.04.08

页码: 274-277

总页数: 4

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