弓形虫重组蛋白SAG1纳米金生物传感器诊断弓形虫病的研究

论文摘要

目的:克隆和表达弓形虫截短型主要表面抗原1（tSAG1）,建立诊断弓形虫病的纳米金生物传感器。方法:以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1编码区515位至1267位的核酸序列,克隆至pMD18-T载体,测序鉴定,亚克隆至表达载体pET-28a（+）,诱导表达tSAG1,金属螯合层析纯化,Western blot分析其免疫活性。种子生长法制备金纳米棒（Au NRs）,偶联tSAG1,构建tSAG1-Au NRs生物传感器检测人血清抗弓形虫SAG1抗体;采用非参数检验分析测定值,按大于或等于体检健康者血清红移值的x+2SD判定为阳性,计算敏感度、特异度、预测值和诊断效率。谷胱甘肽法制备金纳米簇,经活化后,与羊抗人IgG连接;将tSAG1包被在微孔板孔内,与人血清弓形虫抗体结合,再与金纳米簇-羊抗人IgG作用,加入柠檬酸三钠溶液及吗啉乙磺酸-水合物溶液稀释的过氧化氢反应30min,再加入氯金酸溶液反应1h,肉眼观察结果,并测定550nm处的吸光度值OD550;采用非参数检验分析测定值,按小于或等于体检健康者血清OD550的x-2SD判定为阳性,计算敏感度、特异度、预测值和诊断效率。结果:构建了tSAG1的表达质粒,表达纯化获得有免疫反应性的tSAG1,分子质量为约30kDa。tSAG1-Au NRs生物传感器的检验敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率依次为80.9%、90.0%、90.2%、80.6%和85.2%。基于金纳米簇模拟酶性质构建的可视化生物传感器的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率依次为80.0%、90.0%、88.9%、81.8%和85.0%。结论:基于重组tSAG1建立的纳米金生物传感器可用于检测弓形虫抗体。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1.引言
• 2.材料与方法
•   2.1 菌种与血清
•   2.2 主要试剂
•   2.3 主要仪器
•   2.4 主要试剂的配制
•   2.5 方法
• 3.结果
•   3.1 目的基因tSAG1 的克隆与鉴定
•   3.2 重组表达质粒pET-28a（+）-tSAG1 的构建
•   3.3 tSAG1 的表达、纯化与鉴定
•   3.4 金纳米棒生物传感器的构建
•   3.5 金纳米棒生物传感器的血清学检测
•   3.6 金纳米簇模拟酶可视化生物传感器的构建
•   3.7 金纳米簇模拟酶可视化生物传感器的血清学检测
• 4.讨论
• 5.结论
• 参考文献
• 综述
•   参考文献
• 附录1 ：中英文缩略词表
• 附录2 ：在校期间发表论文
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张玉娟

导师: 袁仕善

关键词: 刚地弓形虫,截短型主要表面抗原,诊断,生物传感器,弓形虫病

来源: 湖南师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,感染性疾病及传染病

单位: 湖南师范大学

分类号: Q78;R531.8

总页数: 52

文件大小: 1073K

下载量: 69