导读:本文包含了电穿孔法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脐带,间质干细胞,转染,组织工程
电穿孔法论文文献综述
王泽,李春花,张宁坤,高连如,陈宇[1]（2018）在《电穿孔法转染脐带华通胶间充质干细胞的最佳条件》一文中研究指出背景:脐带华通胶间充质干细胞是目前较为原始的干细胞,为当前干细胞的研究热点之一,是基因治疗的理想载体。然而,目前尚未有对脐带华通胶间充质干细胞电转染条件的研究,因此探索脐带华通胶间充质干细胞的电转染最佳条件占据重要地位。目的:探讨不同电穿孔条件对脐带华通胶间充质干细胞转染率的影响,以确定最佳电转染条件。方法:通过控制电压、脉冲时长及细胞状态等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒EEV-EGFP转入脐带华通胶间充质干细胞,流式细胞仪检测转染率。结果与结论:(1)电压自125 V至150 V,转染率呈现递增趋势,150 V时获得最大转染率,但将电压进一步调高至170 V,转染率开始显着降低;(2)脉冲时长为5.0 ms时获得最大转染率;脉冲时长为2.5 ms和7.5 ms时转染效率均有所降低;(3)与低氧培养比较,正常培养的细胞转染率更高;(4)结果表明,正常培养的脐带华通胶间充质干细胞在电压150 V、脉冲时长5.0 ms、脉冲间隔时间50 ms、脉冲数2次时可达到较高的电转染率。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年17期）
毛丽萍,魏玉圆,王伟,翟少华,程瑶[2]（2017）在《利用电穿孔法对狂犬病病毒SRV9 Ψ区缺失株病毒的拯救及鉴定》一文中研究指出探讨电穿孔转染法对SRV9Ψ区缺失株重组病毒的拯救及鉴定。利用电穿孔细胞转染法,将纯化的Ψ区缺失株pcDNA-NPMG-L全长质粒和pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-M、pcDNA-G和pcDNA-L辅助表达质粒共转染至BHK-21细胞中,并进行盲传,借助RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western-blot及透射电子显微镜对重组病毒进行鉴定。结果显示,重组病毒能够产生绿色荧光,透射电子显微镜观察可见典型的弹状病毒,对重组毒株与亲本毒株G蛋白进行Western-blot验证,可获得相应目的条带。结果表明,通过电穿孔细胞转染法,能成功拯救出重组病毒SRV9Ψ区缺失株,为病毒的拯救提供新的转染方法,并能有效提高转染效率,为研发新型狂犬病疫苗提供参考。(本文来源于《动物医学进展》期刊2017年11期）
周文林,上村望,藤原晴彦,叶爱红,曹锦如[3]（2017）在《基于电穿孔法的快速家蚕基因功能分析技术体系》一文中研究指出目前基于蚕卵显微注射的转基因技术难度较大,且对基因功能分析的周期较长,耗费更多人力。在家蚕等多数鳞翅目昆虫中,dsRNA不能高效地进入细胞内,单纯地注射dsRNA很难引发RNAi功效。为了克服这些技术上的困难,本研究首先以同时带有EGFP和DsRed2表达框的转基因载体p PIGA3GFP导入2龄幼虫,实现了外源基因自幼虫、蛹直至成虫期全龄表达稳定性,阳性率达到55.88%。进而,利用该技术体系将Wnt1-siRNAs导入家蚕幼虫体内,明显抑制了Wnt1的表达(P<0.01),并阻碍幼虫体表斑纹的形成。结果表明,该技术体系不仅稳定可靠,而且快捷高效。(本文来源于《中国蚕学会第九届青年学术研讨会论文集（摘要汇编）》期刊2017-10-26）
张放,周载鑫,张丹丹,房贺,刘善荣[4]（2017）在《电穿孔法转染人原代成纤维细胞条件的优化》一文中研究指出目的通过优化电穿孔转染条件,探讨影响人原代成纤维细胞电转染效率和转染后细胞存活率的因素,筛选出人原代成纤维细胞的最佳电转染条件。方法通过改变脉冲电压、脉冲次数和质粒浓度等条件,将含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGFP-N1电穿孔转染入人原代成纤维细胞。利用锥虫蓝染色检测细胞存活情况,采用流式细胞术检测转染24h后的转染效率。结果在低电压模式下,脉冲电压320V、质粒浓度为20μg/mL、脉冲1次时,人原代成纤维细胞的电转染效果最理想,转染效率达到(42.53±0.63)%,细胞存活率为(74.30±3.01)%。结论优化了人原代成纤维细胞的电转染条件,在保证细胞较高存活率的前提下提高了人原代成纤维细胞的电转染效率,为后续基因功能的研究打下基础。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2017年10期）
蒋华波,夏梓元,张琼阁,王超群,郑骄阳[5]（2017）在《大肠埃希菌TG_1电穿孔法转化条件优化研究》一文中研究指出为了确立稳定的高效率电转化方案,提高构建文库的库容,分别对细菌培养温度、生长状态、电场强度、感受态细胞浓度和体积、外源基因的质量、甘油/甘露醇缓冲液体积等条件进行优化,分析了各因素对转化效率的影响。结果显示:细菌培养温度为16℃,细菌生长的OD_(600)值为0.5,密度梯度离心洗涤法,感受态细胞浓度高于1×10~(11)/m L,并设定电场强度14.25 k V/cm时进行电穿孔,转化效率最高,可达到9×10~9CFU/μg DNA。研究获得的电转化优化条件为高库容文库的构建提供了一个重要的途径。(本文来源于《生物技术进展》期刊2017年01期）
汪飞,习欠云,蒋勇,赵帅,董涛[6]（2017）在《电穿孔法转移GHRH(1-32)质粒在肌肉中表达对妊娠母猪及其后代仔猪生产性能的影响》一文中研究指出采用pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒,对妊娠后期母猪单次肌注后电穿孔法处理,观察母猪及后代仔猪生产性能。用碱变性法提取pcDNA3.0-GHRH质粒并定量。选取胎次一致的妊娠85d的母猪30头,分别注射0.9%NaCl 0,2.0,4.0mg,然后用电穿孔仪电击处理,统计母猪及仔猪的生产性能。结果显示:与对照组相比,2.0,4.0mg试验组断奶个体质量分别显着增加0.65kg(P<0.05)和0.75kg(P<0.01),初生窝质量分别显着增加1.92kg(P<0.05)和3.01kg(P<0.01),断奶窝质量分别显着增加9.33kg(P<0.05)和13.66kg(P<0.01)等,4.0mg组作用更明显;2个剂量组仔猪167日龄平均体质量分别增加5.3%(P>0.05)和7.5%(P<0.05),32-167日龄平均日增质量分别为30g(P>0.05)和46g(P<0.05),平均日采食量分别提高约70g(P>0.05)和100g(P>0.05),平均料肉比降低0.02(P>0.05)和0.05(P>0.05);2个剂量组仔猪断奶前淘汰率分别降低9.48%和10.02%,断奶后淘汰率分别降低29.18%和41.64%,达到100kg天数分别提前7d(P>0.05)和9d(P<0.05);母猪血清GHRH浓度分别提高29.76%(P<0.05)和41.89%(P<0.01),血清中激素(IGF-I、T3、T4、IL-2、IL-6)和IgG浓度均呈上升趋势等。结果表明:GHRH(1-32)表达质粒注射妊娠后期母猪可以明显的提高母猪及仔猪生产性能。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2017年01期）
陈凤,石德顺,黄贵婷,陈自洪,杨素芳[7]（2016）在《电穿孔法转染水牛脂肪干细胞与成纤维细胞的研究》一文中研究指出本研究以不同培养代数(P)水牛脂肪干细胞(buffalo adipose-derived stem cells,BASC)和成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFFs)为研究对象,采用电穿孔法对其进行转染,比较转染后细胞的相对存活率和转染效率,为生产高效转基因供体细胞奠定基础。以绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,电转染48 h后观察荧光表达,收集细胞采用血细胞计数法和流式细胞仪分析细胞相对存活率和转染效率。结果表明:电转后的BASC和BFF表达EGFP,BASC相对存活率低于BFF,P10之前BFF存活率更稳定;BASC和BFF转染效率随培养代数增加出现不同程度的降低,P10之前BFF转染效率更稳定。电转技术可用于转染BASC和BFF,并获得较高的转染效率;使用体外培养早期代数的BASC(P8之前)和BFF(P10之前)可以获得更稳定转染效率的转基因细胞。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2016年11期）
鲁世绒[8]（2016）在《树突状细胞电穿孔法转染条件的优化》一文中研究指出目的将带有EGFP的质粒电转入树突状细胞,探讨不同电转条件对树突状细胞的电转率和存活率影响。方法分离人外周血单核细胞加入刺激因子将其诱导为成熟DC,设置不同电转参数将质粒转入树突状细胞,荧光显微镜检测转染效率及细胞存活率。结果电转48小时后,镜下观察在电转条件为300V,20ms时,细胞存活率及表达率最高,结论选择适当的电转参数及细胞浓度,可明显提高转染效率同时降低细胞死亡率。(本文来源于《生物技术世界》期刊2016年04期）
牛丽丽,王秀娟,张传领,温建勋,姜丽丽[9]（2016）在《电穿孔法高效转染脑胶质瘤细胞U251的条件优化研究》一文中研究指出目的探讨不同电穿孔条件对脑胶质瘤细胞U251电转染率的影响,旨在优化脑胶质瘤细胞U251的电穿孔转染条件以获得较高转染效率。方法以脑胶质瘤细胞系U251为研究对象,在300μl电转体系中,选择不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、DNA剂量,将pEGFP-C1质粒导入U251,计算转染效率。结果在110V、脉冲250μs、细胞浓度1×106/ml、质粒2μg,转染效果最佳,转染后48 h阳性率约为69%。结论优化条件后的电穿孔法操作简单,经济省时,可用于脂质体等方法较难转染细胞(如脑胶质瘤细胞)的外源基因导入。该实验也为进一步研究其他基因转移到胶质瘤细胞的应用提供可靠的试验参数基础。(本文来源于《内蒙古医学杂志》期刊2016年01期）
王雅珍,杨舟鑫,徐伟红,吕远栋,毛根祥[10]（2015）在《电穿孔法介导转染老年人成纤维细胞参数的优化》一文中研究指出目的探究采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称p G)转染老年人成纤维细胞,从中寻找最佳的参数。方法采用电穿孔法将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒p G转染老年人成纤维细胞。荧光显微镜下观察EGFP表达并测定转染效率、细胞存活率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果本实验室电穿孔法介导的老年人成纤维细胞转染的最佳电转条件:电压:240 V;电容:750μF;DNA剂量:8μg。48 h后电穿孔法的转染率接近30%。结论用电穿孔法将质粒pG稳定转染老年人成纤维细胞耗时短,有利于在体外对老年人成纤维细胞进行后续实验。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2015年23期）
电穿孔法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
探讨电穿孔转染法对SRV9Ψ区缺失株重组病毒的拯救及鉴定。利用电穿孔细胞转染法,将纯化的Ψ区缺失株pcDNA-NPMG-L全长质粒和pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-M、pcDNA-G和pcDNA-L辅助表达质粒共转染至BHK-21细胞中,并进行盲传,借助RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western-blot及透射电子显微镜对重组病毒进行鉴定。结果显示,重组病毒能够产生绿色荧光,透射电子显微镜观察可见典型的弹状病毒,对重组毒株与亲本毒株G蛋白进行Western-blot验证,可获得相应目的条带。结果表明,通过电穿孔细胞转染法,能成功拯救出重组病毒SRV9Ψ区缺失株,为病毒的拯救提供新的转染方法,并能有效提高转染效率,为研发新型狂犬病疫苗提供参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
电穿孔法论文参考文献
[1].王泽,李春花,张宁坤,高连如,陈宇.电穿孔法转染脐带华通胶间充质干细胞的最佳条件[J].中国组织工程研究.2018
[2].毛丽萍,魏玉圆,王伟,翟少华,程瑶.利用电穿孔法对狂犬病病毒SRV9Ψ区缺失株病毒的拯救及鉴定[J].动物医学进展.2017
[3].周文林,上村望,藤原晴彦,叶爱红,曹锦如.基于电穿孔法的快速家蚕基因功能分析技术体系[C].中国蚕学会第九届青年学术研讨会论文集（摘要汇编）.2017
[4].张放,周载鑫,张丹丹,房贺,刘善荣.电穿孔法转染人原代成纤维细胞条件的优化[J].第二军医大学学报.2017
[5].蒋华波,夏梓元,张琼阁,王超群,郑骄阳.大肠埃希菌TG_1电穿孔法转化条件优化研究[J].生物技术进展.2017
[6].汪飞,习欠云,蒋勇,赵帅,董涛.电穿孔法转移GHRH(1-32)质粒在肌肉中表达对妊娠母猪及其后代仔猪生产性能的影响[J].中国兽医学报.2017
[7].陈凤,石德顺,黄贵婷,陈自洪,杨素芳.电穿孔法转染水牛脂肪干细胞与成纤维细胞的研究[J].中国畜牧杂志.2016
[8].鲁世绒.树突状细胞电穿孔法转染条件的优化[J].生物技术世界.2016
[9].牛丽丽,王秀娟,张传领,温建勋,姜丽丽.电穿孔法高效转染脑胶质瘤细胞U251的条件优化研究[J].内蒙古医学杂志.2016
[10].王雅珍,杨舟鑫,徐伟红,吕远栋,毛根祥.电穿孔法介导转染老年人成纤维细胞参数的优化[J].中国卫生检验杂志.2015