黄琪1,2张婷1黄奠坤1(1中南大学湘雅医院药剂科湖南长沙410008；2中南大学药学院湖南长沙430013)
【摘要】目的建立同时测定本院制剂氯地滴耳液中氯霉素和地塞米松磷酸钠含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为DiamonsilC18柱（200mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇-0.34%磷酸二氢钾水溶液(65∶35，V/V，1.0ml/min)，流速为1.0ml/min，检测波长为240nm，柱温为30℃。结果氯霉素在20～400μg/ml范围内浓度与峰面积线性关系良好，r=0.9999，回收率为100.8%～102.8%，RSD≤1.0%；地塞米松磷酸钠在4～80μg/ml范围内浓度与峰面积线性关系良好，r=0.9998，回收率为97.0%～102.0%，RSD≤1.5%。结论本方法简便、准确、灵敏度高、重现性好，可更好地控制本品的质量。
【关键词】氯霉素地塞米松磷酸钠含量测定HPLC
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）24-0391-02
氯霉素滴耳液系中南大学湘雅医院常用普通制剂，其处方为每100mL含氯霉素250mg、地塞米松磷酸钠4mg。主要用于内耳道感染的治疗，内含氯霉素、地塞米松磷酸钠等成分。氯霉素和地塞米松磷酸钠分别在272、242nm波长处有最大吸收[1]，但在最大吸收波长处两者相互干扰，顾影响测定结果。笔者在查阅有关文献[2～5]与试验基础上，建立以高效液相色谱(HPLC)法同时测定氯霉素滴耳液中氯霉素和地塞米松磷酸钠含量的方法，本方法简便、快速，结果准确，可做为医院制剂质控控制标准。
1仪器与试药
I.1仪器
Agilent1100系列高效液相色谱仪(包括AgilentG1310A单元泵、AgilentG1316A柱温箱、AgilentG1314A可变波长检测器)；DiamonsilC18柱(迪马公司)；AG285电子分析天平(梅特勒—托利多公司)。
1.2试药
氯霉素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130555-200923）；地塞米松磷酸钠对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100016-200914）；氯地滴耳液（中南大学湘雅医院自制，批号：100706、100723、100804）；甲醇（色谱纯，上海陆都化学试剂厂），磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），水为重蒸馏水（本院制）。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18柱（200mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇-0.34%磷酸二氢钾水溶液(65∶35，V/V，1.0ml/min)；流速：1.0ml/min；检测波长为240nm；柱温：30℃。对照品与样品的色谱图见图1。
A氯霉素和地塞米松磷酸钠标准品；B氯地滴耳液供试品
图1氯霉素和地塞米松磷酸钠标准品与地氯滴耳液样品色谱图
2.2溶液的配置
2.2.1对照品溶液制备
精密量取氯霉素对照品50.148mg、地塞米松磷酸钠对照品9.214mg，置于50ml棕色量瓶中，以甲醇溶解定容至50ml，作为对照品贮备液；精密吸取1ml对照品贮备液置于10ml量瓶中，加甲醇稀释到刻度，既得对照品溶液。
2.2.2供试品溶液制备
精密吸取供试品1ml，置于25ml棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，既得供试品溶液。
2.2.3空白溶液制备
按处方比例制成不含氯霉素和地塞米松磷酸钠的空白样品，按供试品溶液项下方法制备，既得空白溶液。
2.3线性关系考察
精密吸取对照品贮备液0.2，0.4，0.6，1，2，3，4ml，以甲醇定容至10ml量瓶中，得到氯霉素浓度分别为20.16，40.32，60.48，100.80，201.60，302.40，403.20μg/ml；地塞米松磷酸钠浓度分别为4.16，8.32，12.48，20.80，41.60，62.40，83.20μg/ml的系列溶液，摇匀。在2.1项下色谱条件下，分别进样10μl，测定峰面积。以浓度（C）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，作线性回归，氯霉素在20.16～403.20μg/ml浓度范围内线性关系良好，方程为：A=6.221C+9.1667，r=0.9999；地塞米松磷酸钠在4.16～83.20μg/ml浓度范围内线性关系良好，方程为：A=16569C+20.65，r=0.9998。
2.4精密度试验
取同一批供试品（批号：100706），按2.2.2试验中供试品溶液制备方法制得供试品溶液，连续进样5次，记录各组分峰面积，求RSD，结果氯霉素、地塞米松磷酸钠RSD分别为0.072%、0.124%。
2.5溶液稳定性
取同一批供试品（批号：100706），按2.2.2试验中供试品溶液制备方法制得供试品溶液，分别于配制后0，1，2，4，8，12，24h测定，结果表明供试品溶液在8h内稳定。结果，氯霉素和地塞米松磷酸钠峰面积的RSD值分别为0.94%、1.48%。
2.6重复性试验
取同一批供试品（批号：100706）样品5份，按2.2.2试验中供试品溶液制备方法制得供试品溶液，各取10μl进样，测定，记录各组分峰面积，求RSD，结果氯霉素、地塞米松磷酸钠RSD分别为0.48%、0.62%。
2.7加样回收率试验
精密量取已知含量的样品1ml，置于3个10ml量瓶中，分别加入精密称定的氯霉素和地塞米松磷酸钠对照品适量，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配成标准曲线范围内的低、中、高浓度的溶液，进样10μl，重复3次。以峰面积按外标法计算两组分的含量。测得氯霉素和地塞米松磷酸钠的加样回收率及精密度见表1。
2.8样品测定
取本院制剂3个批次，按2.2.2项项下方法配制样品溶液，按上述色谱条件重复进样3次，进行测定，记录其峰面积，按外标法计算氯霉素及地塞米松磷酸钠含量的RSD值，结果见表2。
3讨论
3.1动相的选择
2005版《中国药典》规定地塞米松磷酸钠的含量测定方法为HPLC法[1]，以三乙胺溶液（取三乙胺7.5ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至3.0±0.05）-甲醇-乙腈（55：40：5）为流动相，但反复几次预试验，均达不到分离要求；后根据参考文献[2]，流动相为甲醇：0.34%磷酸二氢钾溶液(60：40,V/V)，在预试验中曾参考此条件，分离度，理论踏板数均达到分离要求，但由于色谱柱与文献报道有别，保留时间较有所改变，待全部出峰所需时间为18分钟左右，后经多次试验，从峰形和分离度综合考虑，最终确定流动相为甲醇与0.34%磷酸二氢钾溶液比例定为65：35(v/v)，在10min内全部测出所需待测物质，并且分离效果符合药典所规定，达到快速准确测定要求。
3.2测波长的选择
由于地塞米松磷酸钠在240nm附近有最大紫外吸收，本制剂中氯霉素与地塞米松磷酸钠的浓度比为6.25∶1，为提高地塞米松磷酸钠的检测灵敏度，试验中选择地塞米松磷酸钠的最大吸收波长240nm为测定波长。
采用本实验方法测定地氯滴耳液中氯霉素及地塞米松磷酸钠含量，方法简便、准确、灵敏，重现性好，能同时测定地氯滴耳液中两组分的含量，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会．中国药典(二部)[S]．2005年版，北京：化学工业出版社，2005．
[2]黄奠坤，雷鹏，戴智勇．高效液相色谱法同时测定氯地滴耳液中主药的含量[J]．中国药房，2002，13（8）：497-498．
[3]唐坤，李卫强．HPLC法同时测定地氯滴耳液中氯霉素和地塞米松磷酸钠的含量[J]．中国药师，2009，12（9）：1260-1262．
[4]郭宇鹏，邱汝先，张玉武．HPLC法测定氯地滴眼液中氯霉素和地塞米松磷酸钠含量[J]．中国药师，2002，5(2)：85．
[5]李湘斌，刘建平，唐帆等．HPLC法同时测定地氯滴眼液中地塞米松磷酸钠及氯霉素含量[J]．中南药学，2004，2(3)：148．