1.新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科乌鲁木齐830011；2.新疆医科大学附属肿瘤医院肺内一科乌鲁木齐830011
【摘要】目的：探讨不同剂量氟尿嘧啶植入剂（中人氟安，Sinofuan）治疗裸鼠恶性腹腔积液的有效性及安全性。方法：采用人胃癌MKN-45细胞株建立裸鼠腹膜移植瘤模型，32只成瘤裸鼠随机分为4组，即赋型剂对照组、氟尿嘧啶植入剂低剂量组（2mg/只）、中剂量组（4mg/只）和高剂量组（6mg/只）。严密观察各组裸鼠的一般状态、体重变化和生存期，测量腹水体积，显微镜下计数每毫升腹水中的肿瘤细胞数。结果：与对照组相比，氟尿嘧啶植入剂低剂量组（2mg/只）状态良好，体重增长缓慢，全身症状出现较晚，生存期延长（26天vs19天，P=0.020）；中剂量组于给药第2天死亡一只，高剂量组于给药后6天内全部死亡。氟尿嘧啶植入剂低剂量组的腹水体积少于对照组〔（5.961.26）mlvs（10.961.21）ml〕，P=0.000〕；每毫升腹水中的肿瘤细胞数也少于对照组〔（2.750.57）×108•ml-1vs（4.210.75）×108•ml-1，P=0.034〕。结论：低剂量（2mg/只）的氟尿嘧啶植入剂对于裸鼠MKN-45腹膜移植瘤的形成具有良好的抑制作用，可以延长腹膜移植瘤裸鼠的生存期，且安全性好。裸鼠对中剂量（4mg/只）和高剂量（6mg/只）的氟尿嘧啶植入剂耐受性差。因此，氟尿嘧啶植入剂用于裸鼠腹腔化疗的安全剂量推荐给予低剂量即2mg/只。
【关键词】氟尿嘧啶植入剂/中人氟安；胃癌；裸鼠；腹水
【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofsustained-releasefluorouracil（Sinofuan）injectedinMKN-45ascitictumorofnudemice.Methods32nudemiceperitonealtransplantedwithMKN-45cellswererandomlypidedinto4groups：controlgroup，low-dose（2mg/nudemouse），medium-dose（4mg/nudemouse）andhigh-dose（6mg/nudemouse）sustained-releasefluorouracilgroups.Thegeneralstateofthenudemice，bodymasschangesandsurvivalwasobserved.Ascitesvolumewasmeasured.Thenumberoftumorcellspermilliliterofasciteswascounted.ResultsComparedwiththecontrolgroup，thegeneralstateofnudemicefromlow-dose（2mg/nudemouse）fluorouracilinjectiongroupwerebetterwithslowerweightgain，delayedsystemicsymptomsandprolongedsurvival（mediansurvival：26daysvs17days，P<0.05），onenudemousefrommedium-dosegroupdiedontheseconddayafterintraperitonealchemotherapy，allnudemicefrommedium-dosegroupdiedwithin6daysoftheintraperitonealchemotherapy.Ascitesvolumeandascetictumorcellspermilliliterofthelow-dosesustained-releasefluorouracilgroupwerelessthanthecontrolgroup[（5.961.26）mlvs（10.961.21）ml]，P=0.000；（2.750.57）×108•ml-1vs（4.210.75）×108•ml-1，P=0.034].ConclusionLowdose（2mg/nudemouse）sustained-releasefluorouracilinintraperitonealchemotherapyshowsagoodeffectandsafetyinthetreatmentofMKN-45ascitictumorofnudemice.Itsuggeststhatonlylowdosei.e.2mg/nudemouseshouldbeappliedwhenintraperitonealchemotherapyisundergoneinnudemice.
【KeyWords】Sustained-releasefluorouracil/Sinofuan；Gastriccancer；Nudemice；Malignantascites
腹腔播散、癌性腹水是消化系统肿瘤常见的转移方式，往往预后差，且严重的影响着患者的生活质量。5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-FU）是最主要的消化系统肿瘤的腹腔化疗药物，但其半衰期短，毒副作用较大，中人氟安为5-氟尿嘧啶的缓释剂型，腹腔给药后药代动力学优势明显[1]。本文通过建立胃癌腹腔播散的动物实验模型，并在此模型中给予不同剂量的氟尿嘧啶植入剂（中人氟安，Sinofuan），观察其对MKN-45裸鼠腹膜移植瘤的作用，并探讨中人氟安用于裸鼠腹膜移植瘤腹腔化疗的最佳剂量，为进一步开展中人氟安在裸鼠肿瘤模型中的研究提供实验基础。
1材料与方法
1.1细胞株和实验动物
BALB/c（nu/nu）裸鼠32只，鼠龄4～5周，体重（192）g，雌性，购自斯莱克实验动物公司，饲养于SPF级环境中。MKN-45细胞株由新疆肿瘤防治研究所提供。
1.2主要药物和试剂及仪器
氟尿嘧啶植入剂（商品名：中人氟安，每粒约含2mg5-FU）及赋形剂对照品（芜湖先声中人药业有限公司）、胎牛血清（以色列BiologicalIndustries公司）、胰蛋白酶（以色列BiologicalIndustries公司）、RPMI-1640（以色列BiologicalIndustries公司）。
1.3低分化高转移性人胃腺癌细胞系MKN-45裸鼠腹膜移植瘤模型的建立MKN-45细胞复苏后，以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养，胰酶消化传代后，取对数生长期的细胞，经胰酶消化后，800rpm，3min离心后，以0.9%氯化钠注射液重悬，800rpm，3min离心洗涤两次后，以0.9%氯化钠注射液调整活细胞浓度为4×106•mL-1，每只裸鼠腹腔注射0.5ml（含2×106个）MKN-45细胞悬液，以此作为实验第1天。
1.4实验分组和给药方法
于MKN-45细胞腹腔接种第4天开始给予干预措施。裸鼠按体重由小至大编号1-32，随机数字法分为4组：即赋型剂对照组、氟尿嘧啶植入剂低剂量组（2mg/只）、中剂量组（4mg/只）和高剂量组（6mg/只）。每组8只（3只用于检测，另5只用于生存期观察）。氟尿嘧啶植入剂及赋形剂以植入针给药。对照组每只裸鼠植入赋形剂1粒。氟尿嘧啶植入剂低剂量组：每只裸鼠腹腔植入中人氟安1粒（含5-氟尿嘧啶约2mg）；相应地，低剂量组：2粒/只；高剂量组：3粒/只。
1.5检测指标和检测方法
1.5.1裸鼠腹水体积和肿瘤细胞数的计数中剂量组裸鼠于给药第2天（实验第6天）死亡一只，且腹泻、纳差、消瘦等不良反应明显，至实验第13天时仅余3只存活；高剂量组于给药后6天内（实验第10天）全部死亡，故中剂量组及高剂量组未进行此步骤实验。对照组及低剂量组裸鼠于接种后第13天以断髓法随机处死各组中的3只。无菌条件下开腹，收集腹水，计算体积。每份标本取200ul用4℃PBS稀释10倍，按血细胞计数法记录每毫升腹水中的肿瘤细胞数。
1.5.2一般情况及生存期观察对照组及低剂量组另5只裸鼠及中、高剂量组全部8只裸鼠在实验期间，每日观察裸鼠饮食、化疗毒副反应，隔日记录体重、腹围变化至化疗组全部裸鼠死亡，绘制小鼠体重变化曲线。记录各组小鼠的生存时间。
1.6统计学方法
采用SPSS20.0软件。计量资料正态分布用±s表示，组间比较采用t检验；用Kaplan-Meier法比较生存率的差异。检验水准α=0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1各组裸鼠的生活状态、体重变化和生存期接种后第1~4天四组裸鼠的体重随腹水的增多呈快速增加，但一般状态尚可，与对照组相比，给药后氟尿嘧啶植入剂低剂量组裸鼠体重增加较平缓，中剂量组因严重腹泻体重下降明显。见图1。对照组裸鼠于第6天后逐渐表现为精神萎靡不振、活动减少，进食进水减少，晚期腹部膨隆明显，并呈恶液质状态，至第14天对照组裸鼠开始死亡，第21天全部死亡。与对照组相比，氟尿嘧啶植入剂低剂量组裸鼠的一般状态良好，腹水生长缓慢，全身症状出现较晚，第17天开始死亡，直至第29天全部死亡。中剂量组于第6天死亡一只，至第16天全部死亡，且腹泻、纳差、消瘦等不良反应明显，高剂量组于10天内全部死亡，腹泻、纳差、消瘦等不良反应更为明显，四组裸鼠的生存曲线见图2。
与氟尿嘧啶植入剂低剂量组相比，中剂量组和高剂量组裸鼠出现化疗相关毒副反应（主要观察指标为腹泻、体重减轻）更为明显，腹泻持续时间长，且大多数裸鼠不能耐受中高剂量的氟尿嘧啶植入剂。
对照组和氟尿嘧啶植入剂低剂量组裸鼠的中位生存期分别为18和26天。（P=0.000）。见表1。
注：与对照组比较，at=14.68P=0.000；bt=3.18，P=0.034。
3讨论
消化系统肿瘤如胃癌、肝癌、结直肠癌是全世界最常见的恶性肿瘤[2]，严重威胁着人们的健康和生命。在我国，胃癌、肝癌、结直肠癌的发病率和死亡率也高居恶性肿瘤之前列[3]，且我国新发的消化系统恶性肿瘤患者中，早期者比例较低[4]，大多数患者就诊时病期较晚。晚期消化系统恶性肿瘤患者中，腹腔种植转移并不少见，很多患者出现癌性腹水，其预后往往较不伴腹膜转移的IV期患者更差[5，6]，且因常合并消化道、泌尿系或胆道梗阻，患者生活质量很差。对于腹膜转移或伴癌性腹水的IV期患者，目前常用的治疗包括全身化疗、热疗、免疫治疗、手术等治疗方式效果均欠理想[5]。而腹腔化疗因药物浓度局部高，血药浓度低，从而全身副反应轻，在临床中应用较多，是目前消化系统恶性肿瘤腹膜转移及恶性腹水的重要治疗方法。
5-氟尿嘧啶是最常用的尿嘧啶抗代谢药，是胃肠道肿瘤化疗中最为经典且研究得最多的化疗药物，包括术中腹腔局部化疗及癌性腹水的腹腔内化疗。但5-氟尿嘧啶半衰期短，在血浆中仅为10-20min，通常以持续静点或以其衍生物长程口服维持其有效的血药深度。缓释氟尿嘧啶植入剂应用高分子骨架及膜层技术控释药物，区域组织的药物浓度高，作用时间长，可解决5-氟尿嘧啶注射液腹腔化疗和全身化疗存在的局部有效药物浓度与维持时间不足的问题，从而提高疗效[8]。癌性腹腔积液患者腹腔内给予氟尿嘧啶植入剂后，腹水中5-氟尿嘧啶在4～8h达峰值，药物缓慢释放可持续15天以上[1]，其作用时间覆盖了绝大多数增殖期肿瘤细胞，克服了氟尿嘧啶注射液作用时间短的缺点，有利于杀灭腹膜转移灶及腹水中游离癌细胞；同时因为局部用药，进入血液循环的药物量少，不良反应轻微[9-11]，且对细胞免疫功能影响较小[12]。
本实验通过腹腔内给予不同剂量的氟尿嘧啶植入剂，观察其对裸鼠腹膜转移瘤的抑制作用，探讨不同剂量氟尿嘧啶植入剂的疗效，寻找合适的剂量，为后续裸鼠腹膜移植瘤的药物实验研究提供实验依据。实验结果表明低剂量的氟尿嘧啶植入剂对裸鼠腹膜移植瘤具有抑制作用，改善了腹膜移植瘤裸鼠的一般生活状态，延缓了腹水生成速度，延长了生存。实验第13天时氟尿嘧啶植入剂低剂量组的腹水量及每毫升腹水中的肿瘤细胞数均较对照组少（P均＜0.05）。氟尿嘧啶植入剂低剂量组的效果最佳，其中位生存可长达26天，而对照组仅为18天，而氟氟尿嘧啶植入剂中剂量组及高剂量组因化疗不良反应明显，生存时间较对照组低。由此，我们可以说，裸鼠对单次给予低剂量的氟尿嘧啶植入剂有很好的耐受性，较低的毒副反应，较长的生存时间。
综上所述，本研究表明低剂量（2mg/只）的氟尿嘧啶植入剂对于裸鼠MKN-45腹膜移植瘤及腹水的形成具有良好的抑制作用，可以延长腹膜移植瘤裸鼠的生存期，且不良反应轻，安全性好。裸鼠对中剂量（4mg/只）和高剂量（6mg/只）的氟尿嘧啶植入剂耐受性差。因此，氟尿嘧啶植入剂用于裸鼠腹腔化疗的安全剂量推荐给予低剂量即2mg/只。
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基金项目：新疆医科大学科研创新基金（XJC2013115）。作者简介：朱金峰（1980-），男，新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科主治医师，乌鲁木齐市新市区苏州东街789号。