鸡型干扰素论文_陈伟业,葛金英,肇慧君,胡森,温志远

导读:本文包含了鸡型干扰素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干扰素,病毒,支气管炎,传染性,血凝素,素鸡,亚型。

鸡型干扰素论文文献综述

陈伟业,葛金英,肇慧君,胡森,温志远^[1]（2008）在《基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究》一文中研究指出为了探索并建立快速、敏感、准确的Ⅰ型干扰素生物学活性定量分析方法,本研究克隆了鸡Mx启动子(Mxp),并在其下游连接荧光素酶(Luciferase,luc)报告基因,构建鸡Ⅰ型干扰素活性检测质粒pMxp-luc。以pMxp-luc瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,24 h后用鸡IFN-α/β处理细胞,结果荧光素酶基因在Mx启动子的作用下获得转录表达;荧光素酶的表达量与干扰素的抗病毒活性有着良好的线性相关性,并在干扰素处理细胞6 h后就可以检测;对鸡IFN-α和IFN-β检测的敏感性分别约为抗病毒活性定量检测方法的10和100倍。该检测系统与传统抗病毒定量检测方法相比,具有快速简便、准确敏感、便于高通量检测等优势,在禽类乃至哺乳动物干扰素生物学基础和应用研究及产业化过程中具有重要应用价值。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2008年01期）

韩春来,吴志光,史喜菊,张灿,柏亚铎^[2]（2006）在《惠阳胡须鸡Ⅱ型干扰素基因在毕赤酵母中的表达及其产物活性分析》一文中研究指出为了确定惠阳胡须鸡IFN-γ基因(chIFN-γ2)在毕赤酵母中表达的重组蛋白的抗病毒活性和蛋白的二级结构,将pGEM-T-chIFN-γ2重组质粒中的chIFN-γ2基因克隆到表达质粒pPICZαB上,经酶切鉴定、PCR鉴定和测序后的序列同源性分析,证明目的基因没有发生缺失、突变,并且插入方向正确。将重组质粒电转化到毕赤酵母感受态细胞GS115中,阳性转化子经甲醇诱导表达,获得了高效分泌表达。重组IFN-γ的分子质量约为33 ku,表达量达0.604 mg/mL,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上抑制VSV的抗病毒活性为3.2×104U/mg。圆二色性分析表明,IFN-γ酵母重组蛋白属于典型的α螺旋蛋白,二级结构含量为:α螺旋55.1%,β折叠8.3%,转角13.9%,无规卷曲22.8%。采用毕赤酵母分泌表达了有活性的鸡IFN-γ,并首次证明鸡IFN-γ重组蛋白属于典型的α型蛋白。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2006年04期）

孙永科,田占成,王云峰,童光志,智海东^[3]（2005）在《鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡Ⅱ型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达》一文中研究指出将鸡Ⅱ型干扰素(ChIFN γ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这两个基因的鸡痘病毒转移载体pSY—ChIFN γS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化的能够同时表达鸡Ⅱ型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV—ChIFN γS1。rFPV—ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1 w后,可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体,重组病毒接种鸡的CD4+、CD8+和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显着高于非免疫对照鸡(P<0.05);免疫4 w后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击,rFPV—ChIFN γS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状(1/16),而非免疫对照组则有15只发病(15/16),并有2只出现死亡(2/16)。从动物实验的结果可以看出,rF—PV—ChIFN γS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。(本文来源于《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集》期刊2005-05-01）

孙永科,王云峰,智海东,刘胜旺,王玫^[4]（2005）在《表达鸡Ⅱ型干扰素重组鸡痘病毒的构建及其特性分析》一文中研究指出将鸡Ⅱ型干扰素(ChIFNγ)基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681-ChIFNγ。将pSY681-ChIFNγ转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达ChIFNγ的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγ。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选,通过PCR和间接免疫荧光等实验证实获得纯化的、表达ChIFNγ的重组鸡痘病毒。将在鸡胚成纤维细胞中培养72h的rFPV-ChIFNγ上清接种小鼠成纤维细胞(L929),通过细胞病变抑制实验证明重组ChIFNγ具有抑制水疱性口炎病毒复制的活性,培养上清的抗病毒效价为2048U/mL。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2005年01期）

孙永科^[5]（2004）在《表达鸡Ⅱ型干扰素基因和鸡传染性支气管炎病毒SI基因重组鸡痘病毒的构建及免疫效力的研究》一文中研究指出传染性支气管炎(IB)是鸡的主要呼吸道疾病之一，给养鸡业造成了巨大的损失。S1蛋白是IBV主要的免疫原蛋白之一。尽管传统方法制备的疫苗在疾病的控制上曾经发挥了重要的作用，但现在需要的是更安全并容易和野生型病毒分离的新型疫苗。在这些方面，禽痘病毒载体疫苗有其特有的优势，构建了许多表达禽类病原体主要免疫原基因的重组禽痘病毒，而且已有部分产品投入使用。但是重组疫苗的免疫力与常规疫苗的免疫水平还存在一定的差距，所以提高重组禽痘病毒疫苗的免疫效力对于面临疾病威胁的养禽业有着特别重要的意义。 干扰素具有抗病毒、抗肿瘤活性，是重要的免疫调节性细胞因子，它是由抗原或有丝分裂原激活的T细胞所合成、分泌的，对免疫系统的多种细胞具有调控作用。IFN-Ⅱ可促进抗原提呈细胞中主要组织相容性复合物的表达，从而放大体液免疫和细胞免疫。在体外既可以单独应用于疾病的防治，又可以与基因工程疫苗联合应用增强和改善其免疫效果。本研究分别构建出了在鸡痘病毒早晚期启动子LP_2EP_2控制下的鸡IFN-Ⅱ转移载体和鸡IFN-Ⅱ+IBV S1基因重组鸡痘病毒转移载体。将转移载体转染至鸡痘亲本毒S-FPV-017预感染后的CEF中，经过数轮蓝斑筛选和纯化获得重组鸡痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ和rFPV-IFN-Ⅱ-S1。PCR检测证明rFPV-IFN-Ⅱ和rFPV-IFN-Ⅱ-S1基因组中包含IFN-Ⅱ基因和S1基因。Western blotting和间接免疫荧光检测表明，rFPV-IFN-Ⅱ-S1表达了S1基因和IFN-Ⅱ基因。 为了检测重组禽痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ-S1对SPF鸡的保护效果以及鸡IFN-Ⅱ的佐剂效应，将112只四周龄的SPF鸡分平均为7组，分别接种rFPV-IFN-Ⅱ、S-FPV-017、rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗、rFPV-IFN-Ⅱ-S1、rFPV-IBVS1、IB弱毒苗，并设立非免疫鸡为对照。抗体检测结果表明rFPV-IFN-Ⅱ-S1免疫后只能引起微弱的IBV抗体，明显低于rFPV-IBVS1和IB弱毒苗免疫组。但攻毒后，rFPV-IFN-Ⅱ-S1提供的保护力却好于FPV-IBVS1和IB弱毒苗。攻毒后的病毒分离和PCR检测结果表明：rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗、rFPV-IFN-Ⅱ-S1在第8d就为阴性，rFPV-IBVS1、rFPV-IFN-Ⅱ、IB弱毒苗免疫组在第10d为阴性，而S-FPV-017和对照组在第12d才全部为阴性。病理切片观察结果表明：rFPV-IFN-Ⅱ-S1和商品化的IB弱毒疫苗效果相当，只有轻微的病变，rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗免疫鸡几乎没有病变，rFPV-IFN-Ⅱ和rFPV-IBVS1免疫组有病变，对照组病变严重且持续时间长。体重监测结果表明：接种rFPV-IFN-Ⅱ、rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗、rFPV-IFN-Ⅱ-S1不影响增重，与空白对照组相比差异不显着。综合以上的实验结果，本研究构建的共表达鸡IFN-Ⅱ和IBV S1基因的重组鸡痘病毒能有效保护免疫鸡免受IBV的攻击，减轻疫苗接种的副反应，有望被开发为抗IB基因工程疫苗，为控制IBV的发生和流行提供新手段。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2004-06-01）

程坚,刘秀梵,彭大新,刘红旗,吴艳涛^[6]（2003）在《共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力》一文中研究指出为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的基因工程疫苗 ,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素 (HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素 (IFN Ⅱ )全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE/L)的基因片段 ,定向插入鸡痘病毒转移载体 1175的痘苗病毒启动子P7.5的下游 ,得到HA和IFN Ⅱ基因分别处于P7.5及PE/L转录调控下的重组转移载体 1175HAIFN。以脂质体转染法将 1175HAIFN转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。 1175HAIFN与wt FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV HA IFN Ⅱ。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rF PV HA IFN Ⅱ。以间接免疫荧光法和细胞病变抑制试验证实 ,纯化的rFPV HA IFN Ⅱ感染的CEF能以非融合的方式同时表达HA和具有抗VSV活性的鸡IFN Ⅱ。动物试验表明 ,rFPV HA IFN Ⅱ能显着抑制静脉攻毒后 1日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡从泄殖腔排毒 ,且能减轻单表达HA的重组鸡痘病毒 (rFPV HA)抑制 1日龄SPF雏鸡增重的副作用。(本文来源于《病毒学报》期刊2003年01期）

程坚,刘秀梵,彭大新,吴艳涛^[7]（2002）在《表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建》一文中研究指出以插入鸡Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)cDNA序列的重组质粒AIFN为模板,根据鸡痘病毒早晚期启动子PE/L的序列设计上游引物,鸡IFN-Ⅱ基因的cDNA3'端序列设计下游引物,采用PCR法扩增包括启动子PE/L和鸡IFN-Ⅱ全长cDNA序列的基因片段。将该扩增片段定向插入鸡痘病毒转移载体1175中,获重组转移载体1175IFN,用以转染已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡(Gallusgallus)胚成纤维细胞(CEF)。1175IFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了表达IFN-Ⅱ的重组鸡痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ。通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV-IFN-Ⅱ。以细胞病变抑制实验证实,rFPV-IFN-Ⅱ感染的CEF表达了具有抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的鸡IFN-Ⅱ。rFPV-IFN-Ⅱ(M.O.I=0.01)感染CEF72h后,培养上清中IFN-Ⅱ的表达量为1280U/mL。动物实验表明,rFPV-IFN-Ⅱ接种雏鸡7d或14d后,其在体内表达的IFN-Ⅱ可显着减轻载体鸡痘病毒对1日龄SPF雏鸡体重增长的抑制作用。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2002年02期）

程坚^[8]（2001）在《表达和共表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒》一文中研究指出H9亚型禽流感病毒（AIV）近年在我国部分地区广泛流行，给养禽业造成了严重的经济损失。油乳剂全病毒灭活苗虽对该亚型禽流感的控制发挥了重要作用，但由于其存在干扰免疫监测及成本较高等缺点，使用受到了限制。为了研制新型禽流感疫苗以克服上述缺点，我们对H9亚型AIV中国分离株的血凝素（HA）基因和鸡Ⅱ型干扰素基因（IFN-Ⅱ）进行了克隆、测序和分析，构建了表达HA基因及共表达HA基因和鸡IFN-Ⅱ基因的两种重组鸡痘病毒（rFPV-HA、rFPV-HA-IFN-Ⅱ），并测定了它们的免疫效力。1 H9亚型AIV中国分离株HA基因cDNA的克隆及序列初步分析 以酚-SDS法提取H9N2亚型AIV中国分离株A/Chicken/China/F/1998（简称F株）的基因组RNA，以此为模板，采用cDNA合成法及反转录聚合酶链式反应（RT-PCR），扩增到长度分别为1.1Kb和0.8Kb的两段HA基因片段。测序结果表明，这两个片段覆盖了HA基因的完整阅读框架，且在它们的重迭区有单一的PstⅠ酶切位点。利用这一酶切位点，将这两个片段连接成插入在质粒pUC18的HindⅢ和SalⅠ位点之间的全长HA基因，得重组质粒pUCHA。测定pUCHA位于HindⅢ和SalⅠ位点之间外源片段的核苷酸序列。 本研究获得的HA基因片段共有1708个核苷酸，包含了HA完整的阅读区的1680个核苷酸，推测其编码560个氨基酸，其中前18个氨基酸为信号肽序列，其余542个氨基酸组成的前体蛋白在第320位氨基酸处被切割为HA1和HA2多肽。F株HA裂解位点的氨基酸序列为RSSR↓GLF，不含连续的碱性氨基酸，具有低致病性AIV HA裂解位点的特征。F株与H9亚型AIV原型毒株A/Turkey/Wisconsin/1/66（H9N2）的HA基因的同源性较低，氨基酸和核苷酸的同源性分别为84.1％和82.9％。n 扬州大学博士学位论文 以 HAI CDNA的 55－1004 n酸为基元，建立 1992－1999年间 HgNZ亚型 AIV中国及绷边国家和地区分离株的遗传发生树。结果表明，近年来在这一地区流行的HgNZ亚型AJV招可敞为叁憎系，同一谱系内，毒株间HA艄酸的同源性在95％以上。F株与髓地区的部分俯株及94年北京分离株的亲龈系较近，形成谱系卜 香港地区的另一些分离株和巴基斯坦分离株形成谱系2，它们与某些南美分离株的亲缘关系很近；与谱系1的亲缘关系也较近，它们之间HA核昔酸的同源性在 gi％R右；韩国分离株形成的谱系 3，该谱系与谱系 1、二的亲缘关系很远，它们之间HA核昔酸的同源性只有83％左右。2 表达HA辜因的直组鸡痘病霉的构巨 以 Hnd皿及 Sal消化PUCHA，得到 1．7Kb的 HA基因片段，将n向插人FPV插入载体 11 75的 Hnd Ill和 Sal位点之间，使之处于痘苗病商启动子 P7．5的下游，得到转移删 11 75HA。按常规的B眠脓染方法将其转染至已感染 FPV中国疫酣282E4（Wt郴）的鸡胚成纤测胞（CEF），通过筛选蓝色的病毒腑获得并纯化重组鸡痘病毒uV－HA。以PCR ＄＄1；ill实，dq，v－HA基因组中插有HA基因：以间接兔疫荧光肌实，fPV－HA感染的C扭釉了HA。3 表达鸡IFN－H羹因的匣组鸡痘病羹的钩 来达产物的生物活性 根据已发表的鸡 WN0基因序列，设计一对5！物，以 RTPCR方法从经 Con A刺激的鸡脾脏细胞中扩增出全长的鸡IFN二基因的cDNA序列。将扩增的基因片段定向插人质粒 AF09的 Sal和 Hnd IH位点之间，使其位于痘苗病毒早晚期启动子PEI的下游。 根据启动子 P肌的序列设计上游引物，鸡 IFNl基因的 cDNA 3 M列设计．下游5！物，以PCR法扩增包含痘苗病毒早晚期启动子PM在内的鸡IFN刁的基因片段。经一系列步骤，将扩增片段定向插人 FPV JWA载体 11 75中，得到转移载体1175IFN，用以转染已感染tFPV的CEF，并按上述重组病毒的构建和纯化方法，获得插谰 rw－n基因的靴重赈毒 ev－r：w－11。在 rrnv－lrx－11中，rw－11基因处于PDe的转录调控下。 以细胞病鲫制W侧－IFNI感染的CEF越了具有抗水泡性口炎病毒（VSV）活性的鸡IFN刁。fPV－mI（M．O．H．m）感染CEF 72小时后，培养上清中 IFN刁的表达量为 1280 U／ITl。动物硼表明，接种 rFPV－IFN刁 天或14天后，其表达的 IFNJ可显着减轻载体鸡痘病毒对 1日龄 SPF tills｛＄重增长的 程坚：表达和共表达Hg亚型肖流感病毒HA基因和鸡！FN坝基因的重组鸡痘病毒 ＊ 抑制作用。 4A表达HA墓因和鸡HN－11基因的直组鸡扈清羹的构建 经一系列步骤，将IFN－11的基因及其上游的启动子PM插人含全长HAcDNA 的质粒pUCm中，得重组质粒PHAIFN。在PHAJFN中，HA基因和IFN刁基因 的3’糊邻。将串联在一起的HA基因和IFNJ基因（包含上游启动子Py）片 段切下，将其定向插人 FPV e载体 11 75中，得到转移狲 11 75HAIFN。在 11 75HAff：N中，HA基因和 IFN。11基因分别处于启动子 P7．5和 PWh的转录控制下， 且转录方向正好相对。在IFN－11基因3’端有一痘苗病毒转录终止子，可避免这两 个基?(本文来源于《扬州大学》期刊2001-05-01）

鸡型干扰素论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

为了确定惠阳胡须鸡IFN-γ基因(chIFN-γ2)在毕赤酵母中表达的重组蛋白的抗病毒活性和蛋白的二级结构,将pGEM-T-chIFN-γ2重组质粒中的chIFN-γ2基因克隆到表达质粒pPICZαB上,经酶切鉴定、PCR鉴定和测序后的序列同源性分析,证明目的基因没有发生缺失、突变,并且插入方向正确。将重组质粒电转化到毕赤酵母感受态细胞GS115中,阳性转化子经甲醇诱导表达,获得了高效分泌表达。重组IFN-γ的分子质量约为33 ku,表达量达0.604 mg/mL,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上抑制VSV的抗病毒活性为3.2×104U/mg。圆二色性分析表明,IFN-γ酵母重组蛋白属于典型的α螺旋蛋白,二级结构含量为:α螺旋55.1%,β折叠8.3%,转角13.9%,无规卷曲22.8%。采用毕赤酵母分泌表达了有活性的鸡IFN-γ,并首次证明鸡IFN-γ重组蛋白属于典型的α型蛋白。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

鸡型干扰素论文参考文献

[1].陈伟业,葛金英,肇慧君,胡森,温志远.基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究[J].畜牧兽医学报.2008

[2].韩春来,吴志光,史喜菊,张灿,柏亚铎.惠阳胡须鸡Ⅱ型干扰素基因在毕赤酵母中的表达及其产物活性分析[J].中国兽医科学.2006

[3].孙永科,田占成,王云峰,童光志,智海东.鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡Ⅱ型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达[C].中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集.2005

[4].孙永科,王云峰,智海东,刘胜旺,王玫.表达鸡Ⅱ型干扰素重组鸡痘病毒的构建及其特性分析[J].农业生物技术学报.2005

[5].孙永科.表达鸡Ⅱ型干扰素基因和鸡传染性支气管炎病毒SI基因重组鸡痘病毒的构建及免疫效力的研究[D].西北农林科技大学.2004

[6].程坚,刘秀梵,彭大新,刘红旗,吴艳涛.共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J].病毒学报.2003

[7].程坚,刘秀梵,彭大新,吴艳涛.表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建[J].农业生物技术学报.2002

[8].程坚.表达和共表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒[D].扬州大学.2001

论文知识图

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