蓝氏贾第虫无义mRNA的降解

论文摘要

无义介导的mRNA降解途径（nonsense-mediated mRNA decay,NMD）作为细胞内的一种重要的mRNA质量监控机制,可以降解含有提前终止密码子（premature termination codon,PTC）的异常转录本,从而避免截短蛋白质对细胞的毒害,但其详细的分子机制有待进一步阐释。蓝氏贾第虫（Giardia lamblia）作为一种寄生性单细胞原生动物,进化地位特殊,对其NMD途径的研究有利于阐明基因表达调控的分子和进化机制。本研究通过酵母双杂交及体外pull-down实验分析了贾第虫NMD途径因子上游移码蛋白1 （Giardia lamblia up-frameshift 1,Gl UPF1）、贾第虫RNA结合蛋白（Giardia lamblia HRP1,Gl HRP1）、贾第虫核糖核酸外切酶（Giardia lamblia Ski7p,Gl Ski7p、Giardia lamblia XRN1,Gl XRN1）之间的相互作用关系。结果表明,Gl UPF1全长与Gl HRP1、Gl XRN1（1～500aa）、Gl Ski7p间均可发生相互作用。而且Gl UPF1的CH结构域和C端结构域分别与Gl HRP1、Gl XRN1（1～500 aa）、Gl Ski7p相互作用。说明Gl UPF1在贾第虫NMD途径中作为招募平台,在无义mRNA识别和降解过程中发挥重要作用。为此,结合本实验室之前的研究结果,我们提出原生动物贾第虫的NMD途径:在提前终止密码子处SURF（SMG1-UPF1-eRF1-eRF3）复合物形成后,Gl UPF1被磷脂酰肌醇3-激酶（suppressor with morphogenetic effect on genitalia 1,SMG1）磷酸化修饰,NMD途径激活,随后Gl UPF1与HRP1相互作用,将转录本标记为NMD底物; Gl UPF1进而招募下游贾第虫5’-3’核糖核酸降解酶Gl XRN1、贾第虫3’-5’核糖核酸降解因子Gl Ski7p,最终降解靶标mRNA。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 生物信息学分析
•   1.3 重组质粒构建
•   1.4 酵母双杂交实验
•   1.5 蛋白质纯化与体外Pull-down分析
• 2 结果
•   2.1 蓝氏贾第虫NMD途径因子的生物信息学分析
•   2.2 NMD核心因子Gl UPF1与RNA结合蛋白Gl HRP1间的相互关系
•   2.3 蓝氏贾第虫中Gl UPF1与3'-5'降解因子Ski7p间相互关系
•   2.4 蓝氏贾第虫中Gl UPF1与5'-3'降解因子XRN1间相互关系
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吕佳,柴杨丽,周宝春,柴宝峰

关键词: 蓝氏贾第虫,无义介导的降解途径,贾第虫上游移码蛋白,贾第虫核糖核酸外切酶,贾第虫超级杀手蛋白质

来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所

基金: 国家自然科学基金(No.31772450),山西省科技攻关项目(No.20150313001-3)资助~~

分类号: Q75

DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.02.13

页码: 212-221

总页数: 10

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