A型流感病毒H7N9株PB1和PB2基因的克隆和真核表达

论文摘要

【目的】本试验旨在构建A型H7N9流感病毒RNA聚合酶类蛋白PB1和PB2真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。【方法】首先提取苏州分离株A型H7N9流感病毒的总RNA,通过RT-PCR技术获得了A型H7N9流感病毒PB1和PB2的全长基因,然后将其克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-Flag-PB1/PB2真核重组表达载体,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定PB1/PB2蛋白的表达。【结果】成功克隆了PB1和PB2全长基因,构建了A型H7N9流感病毒PB1和PB2蛋白真核表达载体pRK-Flag-PB1/PB2,并在293T细胞中转染表达,Western blot确定了PB1/PB2蛋白的成功表达。【结论】该表达载体的成功构建及在293T细胞中成功表达PB1和PB2蛋白,为后期开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 供试材料
•     1.1.1 毒株、细胞系和菌种
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 主要设备
•   1.2 RNA的提取
•   1.3 引物设计
•   1.4 RT-PCR扩增
•   1.5 重组质粒的构建与鉴定
•   1.6 pRK真核表达载体的构建
•   1.7 基因转染
•   1.8 Western blot鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 RT-PCR琼脂糖凝胶电泳基因条带
•   2.2 酶切鉴定H7N9毒株PB1和PB2条带
•   2.3 真核表达载体的表达验证
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 薛宇佳,杜江龙,王晨,万雪梅,杨学财,王峰,贾骁晔,冉乾东,曹欣

关键词: 型流感病毒,基因,克隆,真核表达

来源: 西南农业学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西北民族大学榆中校区生命科学与工程学院

基金: 西北民族大学研究生科研(实践)创新项目(Yxm201 8136),Zbtb1基因调控小鼠造血干细胞向淋巴细胞分化的机制研究(17JR5RA277),PLZF基因影响先天样T淋巴细胞胸腺滞留的功能和机制研究(31700763),Zbtb1基因在T细胞发育过程中调控IL-7Rα表达的功能和机制研究(81760287)

分类号: S852.65

DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2019.6.037

页码: 1448-1451

总页数: 4

文件大小: 441K

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