导读:本文包含了分段克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:色素上皮衍生因子,人皮肤鳞状细胞癌,分段克隆,细胞增殖
分段克隆论文文献综述
张志彬,彭胜男,刘藕根,张颖鹏,李春明[1]（2019）在《色素上皮衍生因子的分段克隆表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响》一文中研究指出目的有关色素上皮衍生因子(PEDF)短肽对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的研究鲜有报道。文中旨在获得PEDF蛋白的分段克隆表达,并观察对人皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL-1)细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增PEDF1、PEDF2和PEDF3目的基因,将回收的片段用NheI/HindⅢ酶切,插入至pET28a(+)载体。连接产物转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,并把融合蛋白的进行分离、纯化。采用CCK-8方法检测24 h、48 h及72 h,不同浓度100、400、800和1000 nmol/L PEDF1、PEDF2和PEDF3肽段对SCL-1细胞增殖影响。结果成功构建PEDF1、PEDF2和PEDF3的原核表达载体,PEDF1、PEDF2和PEDF3融合蛋白,相对分子质量约为18 000、17 000和13 000。24 h时,800 nmol/L、1000 nmol/L浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.61±0.03)、(0.78±0.07)]较0 nmol/L PEDF3 (1.00±0.00)明显降低(P<0.05);48 h时,400、800、1000nmol/L浓度PEDF3SCL-1细胞增殖呈现显着抑制,并呈剂量依赖性(P<0.05);72 h时,800、1000 nmol/L浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.53±0.05)、(0.51±0.05)]较400、0 nmol/L[(0.60±0.05)、(1.00±0.00)]显着降低(P<0.05)。结论成功分段克隆表达PEDF融合蛋白,PEDF3抑制了SCL-1细胞增殖,为进一步筛选PEDF活性功能短肽提供了基础。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2019年10期）
李立梅,毛赫,左彤彤,赵秀香,刘庆珍[2]（2019）在《黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁营口分离物基因组测定及分段基因克隆》一文中研究指出黄瓜绿斑驳花叶病毒Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV)是葫芦科作物的重要检疫性病毒。本研究以田间自然感病的西瓜叶片为试材,采用RT-PCR获得该病毒(CGMMV-LNYK)基因组全长(登录号MG745849),以pBluescriptⅡSK(-)为载体,分别克隆其所编码的4段基因,并采用人工接种验证它们的体外侵染活性。结果表明:该病毒与韩国分离物KW(登录号AF417242)亲缘关系最近,相似度达99.8%,并成功克隆了CGMMV-LNYK编码的4段基因,分别记为RNA1～RNA4。经人工接种,发现RNA1和RNA4能侵染葫芦,表现明显花叶症状,与该病毒接种葫芦症状一致,且接种RNA1后的症状较RNA4明显,4种RNA混合接种症状最为明显,经RT-PCR检测,发病植株可扩增到与接种的RNA大小相等的片段。(本文来源于《植物保护》期刊2019年03期）
李爽,席俊,贺梦雪,皮江一,于秋荣[3]（2018）在《大豆致敏原β-伴大豆球蛋白α’亚基的分段与克隆鉴定》一文中研究指出大豆是引起人们食物过敏的八大过敏原之一,β-伴大豆球蛋白是大豆主要致敏蛋白之一,并且3个亚基α、α’、β都具有致敏性。利用生物信息学软件对β-伴大豆球蛋白α’亚基进行Overlapping(重迭)分段,通过PCR技术扩增到目的片段,与pMD 18-T载体连接;对重组质粒进行PCR和双酶切鉴定,鉴定结果与基因序列一致,成功构建克隆载体。(本文来源于《食品科技》期刊2018年03期）
贺梦雪,席俊,皮江一,李爽,于秋荣[4]（2017）在《大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白α亚基的分段及克隆载体的构建》一文中研究指出利用生物信息学软件将大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白α亚基分为相互重叠的4个片段(A、B、C、D),设计和合成系列引物。利用PCR技术分别扩增β-伴大豆球蛋白α亚基Overlapping分段基因,将其插入到p MD-18T vector中,对重组质粒进行PCR和双酶切鉴定,测序结果与设计基因序列一致,成功构建了克隆载体。为研究β-伴大豆球蛋白α亚基的分段表达及抗原表位的筛选提供参考。(本文来源于《食品科技》期刊2017年07期）
皮江一,席俊,贺梦雪,李爽[5]（2017）在《大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白β亚基的抗原表位分析及分段克隆》一文中研究指出利用生物信息学软件SWISS-MODEL对大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白β亚基建立出三级结构模型,并根据Disco Tope 2.0服务器预测出该模型的构象表位相关区段,采用分段克隆方式扩增目的基因的3个片段区域,利用PCR技术扩增目的基因全长及3个互相重迭的片段(A、B、C)将其连接至p MD18-T载体,并转化到大肠杆菌感受态JM109。经蓝白斑筛选,以及对重组质粒进行PCR和双酶切验证,测序结果与设计的基因序列一致,成功得到了目的基因片段的阳性克隆子,为β-伴大豆球蛋白β亚基分段表达及抗原区域位置的筛选与鉴定提供参考。(本文来源于《食品工业科技》期刊2017年18期）
周全,刘原君,孙长贵,郭媛丽,马璟玥[6]（2016）在《衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构分析及分段克隆表达》一文中研究指出目的预测衣原体噬菌体phi CPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构,并将Vp1表达为更小的蛋白片段,为后续实验奠定基础。方法通过蛋白空间结构分析网站I-TASSER和Predict Protein对phi CPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构进行预测,应用TA克隆的方法将Vp1分为不同的部分进行克隆表达,最后通过Western blot技术分别对目的蛋白进行鉴定。结果根据空间结构预测结果以及相关背景资料将衣原体噬菌体phi CPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分进行克隆表达,目的蛋白Vp11-189和Vp1190-502的基因序列长度分别为567bp和939bp,经检索确定两蛋白碱基序列与Genebank结果相同。而且,Western blot结果显示两目的蛋白的相对分子质量分别为20k Da和35k Da。结论成功将衣原体噬菌体phi CPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分进行表达,这为后期的深入研究提供了一定的实验基础。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2016年05期）
周全[7]（2016）在《衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的分段克隆表达及其与沙眼衣原体相互作用的功能区域初探》一文中研究指出沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种较常见性传播疾病(Sexually transmitted disease,STD)病原体。沙眼衣原体感染后,患者会出现一系列的临床症状,例如宫颈炎、阴道炎、子宫内膜炎、盆腔炎、非淋菌性尿道炎、前列腺炎、Reiter综合征、性病性淋巴肉芽肿等[1,2]。若感染沙眼衣原体后不积极治疗,则可能导致女性患者出现自然流产、胎膜早破、异位妊娠、早产和输卵管性不孕等严重并发症的发生。而且长期、反复的沙眼衣原体感染可能增加女性患者宫颈鳞状上皮细胞癌、艾滋病感染的危险性[3]。2001年,据世界卫生组织(WHO)报道,世界上每年有新增沙眼衣原体感染病例约9200万例,其中有70%女性患者及50%男性患者为无症状感染者,而实际的感染者远远超出此统计数字[4]。美国疾病控制与预防中心(CDC)的统计数据显示:从2007年-2012年,在青中年人群中沙眼衣原体的感染率达到1.7%[5]。沙眼衣原体感染已经成为美国最为常见的性传播疾病,发病率较高,每年新增感染者大于140万[6]。并且,女性患者发病率高于男性患者[7]。泌尿生殖道沙眼衣原体感染已经成为最常见的性传播疾病之一。泌尿生殖道沙眼衣原体感染严重的危害了人类的健康,如何更好的治疗该疾病,已经成为了较为重要的公共卫生问题。近些年来,由于抗生素的滥用,耐药菌感染率不断增加,使抗生素在细菌感染性疾病中的应用遇到了瓶颈。临床中,衣原体的治疗也遇到了同样的难题。而衣原体噬菌体对衣原体的天然杀伤作用为衣原体感染性疾病的控制及治疗提供了良好的发展前景,可以利用衣原体噬菌体作为一种生物制剂来治疗沙眼衣原体的感染。但在此之前,我们需要进一步的确定衣原体噬菌体与衣原体的相互作用区域,以便更好的了解两者间的相互作用机制。衣原体噬菌体具有叁种主要结构蛋白,包括Vp1,Vp2和Vp3。Vp1是主要的并且是最大的衣原体噬菌体衣壳蛋白,一些研究显示Vp1可能是衣原体噬菌体识别粘附宿主的功能区域[8,9]。对Vp1氨基酸序列的分析显示在其氨基酸序列216-299和462-467间存在两个明显的不同区域[8]。其中较大的被称为IN5环,研究者预测它暴露在病毒表面并在其表面形成蕈样突起。较小的区域被称为INS,也考虑是暴露在病毒表面,而且预测其与IN5环位置极为贴近并相互作用[9]。在衣原体噬菌体Vp1序列的差异主要是指区域:IN5和INS。这表明IN5和INS区域参与受体的识别。硅片分析证实两个区域彼此相邻,这表明它们在决定不同衣原体噬菌体的宿主范围和组织嗜性中起主要作用[10]。相关研究发现衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体具有抑制其生长的作用[11],而且作用效果显着。本研究通过进一步缩小衣原体衣壳蛋白Vp1的表达片段,来寻找衣原体噬菌体与衣原体相互作用的功能区域。[目的]将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1分段克隆表达,初步确定衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1与沙眼衣原体相互作用的功能区域。[方法]通过I-TASSER、PredictProtien等蛋白质空间结构分析网站对衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构及其与沙眼衣原体相互作用的功能位点进行预测分析,根据预测结果以及研究背景,将衣壳蛋白Vp1分为不同的部分进行表达,通过TA克隆技术克隆表达目的蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blot免疫印迹技术对目的蛋白进行鉴定,再通过氯化钾胶回收法对目的蛋白进行纯化,并进行蛋白定量。将目的蛋白分别作用于沙眼衣原体E型标准株,观察并分析衣壳蛋白Vp1全长及两个蛋白片段分别对沙眼衣原体E型标准株的抑制作用,并进行比较分析。[结果]根据预测结果及相关背景资料将衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分,目的蛋白Vp11-189和Vp1190-502的基因序列长度分别为567bp和939bp,通过SDS-PAGE以及Western-blot鉴定结果显示蛋白Vp11-189和Vp1190-502的相对分子质量分别为20KD和35KD,并且获得了纯化的蛋白Vp11-189和Vp1190-502。同时,体外干预实验结果显示蛋白Vp11-189、Vp1190-502及Vp1对沙眼衣原体均有抑制作用,且抑制率分别为43.95%、81.74%和78.02%。[结论]成功将phiCPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189、Vp1190-502两部分进行表达,通过体外干预实验证明,蛋白Vp1190-502与衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体E型标准株具有相似的抑制作用,并且作用效果显着。蛋白Vp1的190-502氨基酸片段对沙眼衣原体生长有更为明显的抑制作用,这为后期的深入研究提供了一定的参考价值。(本文来源于《天津医科大学》期刊2016-05-01）
董晓,柯尊平,王俊峰,周明,李军[8]（2016）在《分段扩增法克隆大鼠5-脂肪氧合酶cDNA并鉴定其序列》一文中研究指出目的 5-脂肪氧合酶(5-LO)是炎性介质白叁烯合成过程中的限速酶,本研究克隆大鼠5-LO cDNA编码区,旨在为利用大鼠5-LO分析白叁烯在血管壁炎症中的作用做准备。方法从SD大鼠胚肝中提取mRNA并逆转录成cDNA,找出5-LO cDNA中独特的内切酶位点,再设计2对引物,扩出都含此酶切位点的5-LO cDNA片段。用高保真酶分段扩增出2个5-LO cDNA片段,再正确拼接,克隆成功后酶切鉴定并测序。将获取的cDNA序列与NCBI和Ensembl数据库比较序列的差异。结果用Oligo(dT)和随机引物从SD大鼠胚肝总mRNA中逆转录cDNA。以5-LO cDNA独特的PmlⅠ内切酶位点为分界点,扩增出5′端1339bp和3′端790bp的5-LO cDNA片段,将2个片段正确地拼接在pBluescriptⅡSK(+)中。经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切和测序显示,重组质粒中包含有5-LO cDNA编码区全长2025bp,它与Ensembl数据库中的序列完全一致,但与NCBI数据库中的序列有较大的差异。结论用分段扩增法从SD大鼠胚肝中成功克隆出全长5-LO cDNA编码区,并证实了其序列的正确性。(本文来源于《中华老年心脑血管病杂志》期刊2016年03期）
俞小琴,魏玲,刘秋英,黄元,赵荣策[9]（2015）在《人VIGILIN基因分段克隆及表达》一文中研究指出目的探讨人高密度脂蛋白结合蛋白(HDLBP)-VIGILIN蛋白与其他蛋白质相互作用的机制。方法根据VIGILIN基因全长编码区的结构域,将VIGILIN基因全长编码区分为N端、KH1-7、KH8-12、KH13-14、C端5段,以pDsred2-N1/VIGILIN为模板分别扩增5个片段及全长cDNA后克隆至pGEX 5X3原核表达载体,测序,然后将鉴定后的重组质粒转化到表达宿主菌E.coli BL21中进行诱导表达GST-VIGILIN融合蛋白,并用SDSPAGE电泳及Western blot检测蛋白表达结果。结果成功扩增了人VIGILIN基因编码区分段片段,并且构建到原核表达载体中,经酶切、测序鉴定证实序列完全正确,重组载体构建成功,并且在pGEX原核表达系统中诱导表达GST-VIGILIN融合蛋白,经SDS-PAGE电泳及Western blot检测初步证实表达成功。结论本实验首次根据VIGILIN蛋白不同的结构域成功构建了GST-VIGILIN分段克隆原核表达载体,并且对融合蛋白表达条件进行了优化,成功表达了GST融合蛋白。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2015年05期）
谢小冬,姜艳平,崔文,乔薪瑗,唐丽杰[10]（2015）在《单增李斯特菌内化素A分段表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出为了研究单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)Inl A蛋白入侵细胞时各段相关功能,试验采用PCR技术扩增得到L.monocytogenes 08-5923株Inl A基因片段,测序后利用Gen Bank对Inl A氨基酸序列进行分段,分为2个基因片段,即Inl A1(1~1 488 bp)和Inl A2(1 315~2 403 bp),将其分别克隆至原核表达载体p GEX-6P-1中,并转化至宿主菌中诱导表达,表达的重组蛋白经Western-blot和间接ELISA法鉴定,用纯化的重组蛋白分别免疫家兔,并用ELISA法检测家兔多克隆抗体的特异性。结果表明:表达的2种重组蛋白分子质量分别约为79 ku和64 ku,以其制备的多克隆抗体均可与单增李斯特菌Inl A天然蛋白发生反应;2种重组蛋白均能有效诱导抗体反应,其中Inl A2(new flag)诱导产生的抗体效价较高,与单增李斯特菌Inl A天然蛋白结合能力较强。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2015年03期）
分段克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
黄瓜绿斑驳花叶病毒Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV)是葫芦科作物的重要检疫性病毒。本研究以田间自然感病的西瓜叶片为试材,采用RT-PCR获得该病毒(CGMMV-LNYK)基因组全长(登录号MG745849),以pBluescriptⅡSK(-)为载体,分别克隆其所编码的4段基因,并采用人工接种验证它们的体外侵染活性。结果表明:该病毒与韩国分离物KW(登录号AF417242)亲缘关系最近,相似度达99.8%,并成功克隆了CGMMV-LNYK编码的4段基因,分别记为RNA1～RNA4。经人工接种,发现RNA1和RNA4能侵染葫芦,表现明显花叶症状,与该病毒接种葫芦症状一致,且接种RNA1后的症状较RNA4明显,4种RNA混合接种症状最为明显,经RT-PCR检测,发病植株可扩增到与接种的RNA大小相等的片段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分段克隆论文参考文献
[1].张志彬,彭胜男,刘藕根,张颖鹏,李春明.色素上皮衍生因子的分段克隆表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响[J].医学研究生学报.2019
[2].李立梅,毛赫,左彤彤,赵秀香,刘庆珍.黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁营口分离物基因组测定及分段基因克隆[J].植物保护.2019
[3].李爽,席俊,贺梦雪,皮江一,于秋荣.大豆致敏原β-伴大豆球蛋白α’亚基的分段与克隆鉴定[J].食品科技.2018
[4].贺梦雪,席俊,皮江一,李爽,于秋荣.大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白α亚基的分段及克隆载体的构建[J].食品科技.2017
[5].皮江一,席俊,贺梦雪,李爽.大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白β亚基的抗原表位分析及分段克隆[J].食品工业科技.2017
[6].周全,刘原君,孙长贵,郭媛丽,马璟玥.衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构分析及分段克隆表达[J].中国皮肤性病学杂志.2016
[7].周全.衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的分段克隆表达及其与沙眼衣原体相互作用的功能区域初探[D].天津医科大学.2016
[8].董晓,柯尊平,王俊峰,周明,李军.分段扩增法克隆大鼠5-脂肪氧合酶cDNA并鉴定其序列[J].中华老年心脑血管病杂志.2016
[9].俞小琴,魏玲,刘秋英,黄元,赵荣策.人VIGILIN基因分段克隆及表达[J].四川大学学报(医学版).2015
[10].谢小冬,姜艳平,崔文,乔薪瑗,唐丽杰.单增李斯特菌内化素A分段表达及多克隆抗体的制备[J].黑龙江畜牧兽医.2015