DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞的影响

论文摘要

为揭示盘状结构域受体1（discoidin domain receptor1,DDR1）基因对水牛泌乳性能的影响,本研究构建了水牛DDR1基因真核表达载体,并对其最佳转染时间进行摸索,同时分析DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞的影响。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,载体片段大小与目标载体片段大小一致,均为8.8 kb,测序结果显示其与目的片段序列匹配率为100%。细胞转染试验结果显示,DDR1基因过表达最佳转染时间为48 h。细胞增殖检测结果显示,DDR1基因过表达组与对照组细胞相对荧光值差异不显著（P>0.05）。细胞凋亡检测结果显示,DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞的晚期凋亡率（19.87%VS 17.49%）无影响（P>0.05）,但极显著增加了水牛乳腺上皮细胞早期凋亡率（6.48%VS 1.35%,P<0.01）。同时,DDR1基因过表达上调了水牛乳腺上皮细胞中抑凋亡基因BCL-2和XIAP的表达,而下调了促凋亡基因P53的表达。此外,DDR1基因过表达显著提高了水牛乳腺上皮细胞的迁移率（66.26%VS 58.76%,P<0.05）。综上,试验成功构建了水牛DDR1基因真核表达载体并证明了DDR1基因过表达促进了水牛乳腺上皮细胞的早期凋亡和迁移,为今后进一步研究水牛乳腺发育和泌乳性能提供了一定理论依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 样品采集
•   1.2 主要试剂和仪器
•     1.2.1 主要试剂
•     1.2.2 主要仪器
•   1.3 方法
•     1.3.1 DDR1基因真核表达载体构建
•     1.3.2 水牛乳腺上皮细胞分离培养及脂质体转染
•     1.3.3 实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因的表达量
•     1.3.4 指标测定
•       1.3.4.1 细胞增殖检测
•       1.3.4.2 细胞凋亡检测
•       1.3.4.3 细胞迁移检测
•   1.4 数据统计
• 2 结 果
•   2.1 DDR1基因真核表达载体酶切鉴定
•   2.2 不同时间DDR1基因过表达转染
•   2.3 水牛乳腺上皮细胞增殖检测
•   2.4 DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞凋亡的影响
•   2.5 DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞凋亡相关基因的影响
•   2.6 DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞迁移的影响
• 3 讨 论
•   3.1 DDR1基因过表达对水牛乳腺上皮细胞凋亡的影响
•   3.2 DDR1基因过表达对水牛乳腺迁移和增殖的影响
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陆杏蓉,段安琴,马小娅,梁莎莎,庞春英,梁贤威,邓廷贤

关键词: 基因,水牛,乳腺上皮细胞

来源: 中国畜牧兽医 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院广西水牛研究所农业农村部(广西)水牛遗传繁育重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31660649),中央引导地方基金(桂科ZY18164003),广西科技重大专项(桂科桂科AA16450002),广西自然科学青年基金(2017GXNSFBA198191)

分类号: S823

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.12.021

页码: 3635-3641

总页数: 7

文件大小: 1290K

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