导读:本文包含了坐骨神经缺损论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:神经,周围神经,细胞,损伤,坐骨神经,体细胞,干细胞。
坐骨神经缺损论文文献综述
魏帅[1]（2019）在《股神经分支基膜管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究》一文中研究指出目的:随着社会经济的快速发展,周围神经损伤的发病率也在逐年升高,给患者的生活质量和社会的和谐发展均带来了不利影响。除了可以减张缝合的小段神经缺损之外,自体神经移植仍然是治疗大段周围神经缺损的金标准,但其存在着许多问题,如来源受限、供区的二次损伤等。目前同种异体去细胞神经移植物对于桥接周围神经缺损展现出了其良好的临床应用前景。基膜管是去细胞神经的主要成分,但是不同种类去细胞神经移植物的基膜管是否存在差异,尚未见相关研究报道。本研究探索了大鼠股神经皮支与肌支基膜管的差异,同时观察其去细胞神经移植物在修复大鼠坐骨神经缺损中是否存在作用差异,为临床不同种类神经移植物的选择和3D打印组织工程神经提供一定的参考依据。方法:(1)取健康8周龄雄性SD大鼠的新鲜股神经的皮支与肌支,采用QAR-CAA-67抗体蛋白芯片技术检测股神经皮支和肌支结构蛋白表达情况,获取其差异表达蛋白;同时对其超微结构、组织学染色观察。(2)取SD大鼠股神经及其分支进行化学去细胞处理,对其超微结构、组织学和拉曼光谱特征进行评价。(3)通过动物体内实验,将股神经皮支去细胞神经移植物(Acellular femoral nerve cutaneous branch grafts,CBG)和肌支去细胞神经移植物(Acellular femoral nerve muscular branch grafts,MBG)分别填充于壳聚糖空导管中制作用以桥接大鼠坐骨神经缺损的(15mm)的组织工程去细胞神经移植物。实验动物随机分为4组(n=10),分别植入CBG(CBG组)、MBG(MBG组)、壳聚糖空管(Hollow chitosan conduit,HCC组)以及自体神经(autologous nerve grafts,ANG组)修复缺损。术后通过步态分析、形态学以及组织学等检测方法评价其修复大鼠坐骨神经缺损的效果。结果:在髓鞘和基膜管(28~37nm)厚度方面,股神经肌支均大于皮支;股神经肌支乙酰胆碱酯酶染色阳性部位所占比例较大,而皮支染色阴性部位所占比例较大;基因本体论富集分析显示在细胞成分(cellular component)方面细胞外空间(extracellular space)是高度富集的,更多的相关基因在股神经肌支中表达上调;术后12周,CBG组、MBG组以及ANG组的步态分析、腓肠肌肌肉湿重恢复率及病理学观察等检测的结果优于HCC组,CBG组和MBG组结果相似,组间无统计学差异,但两组结果均略差于ANG组,且具有统计学差异。结论:感觉神经(皮支)来源和运动神经(肌支)来源的神经移植物虽然在成分和基底膜结构上存在差异,但是其体内修复效果相似。3D打印神经移植物时必须考虑到其内部神经基膜管的厚度(28~37nm)和叁维空间取向性结构。(本文来源于《石河子大学》期刊2019-06-01）
王宇强[2]（2019）在《透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究》一文中研究指出目的:(1)体外分离新生SD大鼠雪旺细胞并培养,超速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体并进行特异性蛋白鉴定。透射电镜观察雪旺细胞外泌体的粒径和分布。(2)研究雪旺细胞外泌体对神经元及雪旺细胞的生物学作用。观察和研究透明质酸凝胶缓释外泌体的生物学特征参数。(3)探讨透明质酸水凝胶包裹缓释雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管修复大鼠坐骨神经长节段缺损的形态学和功能学效果。方法:(1)采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化法提取原代大鼠雪旺细胞,并采用DMEM/F12完全培养基培养和纯化。采用S100和Sox10进行纯度鉴定。采用CCK-8试剂盒对雪旺细胞的增殖状态进行检测。采用超高速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体,利用BCA试剂盒检测外泌体中蛋白的含量。Western blot法对雪旺细胞分泌外泌体表面标志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na~+/K~+ATP酶进行鉴定。(2)构建1%浓度的透明质酸水凝胶,并将雪旺细胞外泌体进行包裹。体外放置于PBS中采用BCA试剂盒检测外泌体的缓释曲线。应用雪旺细胞外泌体干预雪旺细胞和神经元,CCK-8试剂盒检测外泌体对雪旺细胞的增殖作用,以及对两种细胞生物活性蛋白分泌的作用。ELISA法检测培养第1、3、5天后,外泌体干预的雪旺细胞表达神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)、髓鞘零蛋白(P0)、细胞极性蛋白Par-3的水平。同时ELISA法检测外泌体干预后第1、3、5天时神经元中生长相关蛋白43(Growth-associatedprotein-43,GAP-43)、神经丝蛋白-200(Neurofilament-200,NF-200)、βIII–Tubulin的表达水平。(3)静电纺丝制备PCL神经导管,并采用扫描电镜观察导管的大体形态及显微结构,测量纤维丝的直径。采用小量程的力学仪器检测PCL神经导管的的杨氏模量、最大应力、最大载荷、最大断裂张力等力学参数。采用透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管,制备15mm长节段大鼠坐骨神经缺损,并进行端端吻合。采用单纯透明质酸填充PCL导管作为对照组,自体神经移植组也进行对照。在术后4、8、12周时检测大鼠坐骨神经指数、再生神经电生理功能。荧光金逆行示踪检测大鼠神经元胞体的存活情况及神经再生的情况。透射电镜观察叁组再生神经的有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积。NF-200和S100对各组再生神经的免疫荧光染色,观察期神经结构再生情况。HE染色观察叁组大鼠腓肠肌肌纤维直径的差异。结果:(1)雪旺细胞在光镜下可以看到呈梭型,体积不大,存在双极,细胞核在中间,比较明显,有折光性。细胞多呈纵行排列的形态。雪旺细胞在接种2小时后,贴壁的比率约为23.5%,6小时时的贴壁比率增加到47.9%,而在12小时的时候有88.9%的细胞贴壁,在16小时以后细胞贴壁的比率均高于99%。在培养3天时,雪旺细胞数量较最初增长了3.9倍,而培养7天时增长了11.4倍。S-100和Sox-10双标荧光染色对雪旺细胞鉴定的纯度为97%。外泌体粒径主要分布在100-160 nm之间,本研究测得的外泌体的平均直径在125 nm。Western blot检测显示外泌体特异性蛋白CD63、TSG101、CD9在本研究所提取的雪旺细胞外泌体中均有表达,而非外泌体表达蛋白Rab5和Na~+/K~+ATP酶则未见表达。(2)外泌体在透明质酸凝胶中前3天释放比率较大,第一天释放比率为34%,第叁天达到41%,随着时间的延长,释放逐渐缓慢。在第4、5、6、8、16、32天时的累积释放比率为43%、47%、51%、53%、75%、90%,而在第64天时候检测得出累积释放率为99%,几乎完全释放。对照组轴突数量为35.4±4.3,而外泌体刺激组为126.3±14.4(P<0.05)。在轴突生长长度方面,外泌体组的平均长度长达(1563.0±132.5)μm,显着高于对照组的(864.3±77.4)μm(P<0.05)。外泌体干预组雪旺细胞在培养后的第3、5、7天时细胞增殖水平均显着高于对照组(P<0.05)。外泌体刺激后的雪旺细胞分泌NGF、BDNF、髓鞘零蛋白(P0)、细胞极性蛋白Par-3的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平(P<0.05)。外泌体刺激后的DRG神经元细胞分泌的标志性蛋白进行检测,结果发现GAP-43、NF-200、βIII–Tubulin的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平(P<0.05)。(3)PCL神经导管的内孔直径为1500μm左右,而管壁的厚度约为500μm,表面纤维丝均匀分布,纤维丝平均直径为4.9μm。PCL神经导管孔隙率为(89.7±2.6)%、最大应力为(7.5±0.6)MPa、杨氏模量为(22.4±2.1)MPa、最大断裂张力为(596.4±33.8)%、最大载荷为(5.6±0.8)N,符合神经再生要求。术后第4、8、12周时PCL/HA-EXO组大鼠的再生神经有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积显着高于PCL/HA组,而G-ratio值则显着低于PCL/HA组(P<0.05)。而叁个时间点中,PCL/HA-EXO的有髓轴突的数量、再生轴突的面积和G-ratio值均与自体神经移植组差异无统计学意义(P>0.05)。术后12周时可见PCL/HA-EXO组大鼠轴突沿着导管顺行生长,有明显的方向性。并且神经轴突及雪旺细胞的表达显着高于PCL/HA组,与自体神经移植组差异不明显。各组大鼠术后随着时间的延长,复合肌动作电位幅度、神经传导速度及潜伏期均有所改善,但PCL/HA-EXO组和自体神经组较PCL/HA组改善更为明显,术后4、8、12周叁个时间点均显着高于PCL/HA组(P<0.05)。在术后第8周时,PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的神经传导速度及潜伏期均无显着性差异,而复合肌动作电位仍存在一些差异(P<0.05)。而术后12周时,叁个指标则在PCL/HA-EXO组和自体神经移植组中无统计学差异(P>0.05)。PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数在术后叁个时间点均显着高于PCL/HA组(P<0.05),并且在术后第8,12周时PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数相似,无统计学差异(P>0.05)。术后12周PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的腓肠肌纤维直径分别为(68.4±6.2)μm和(72.3±7.6)μm,显着高于PCL/HA组(P<0.05),而PCL/HA-EXO组和自体神经移植组则无统计学差异(P>0.05)。结论:(1)本研究成功分离提取了新生SD大鼠雪旺细胞,纯度高,满足后续实验要求。采用超速离心法加超滤法能够成功提取雪旺细胞分泌的外泌体,经鉴定是雪旺细胞分泌的外泌体,纯度较高。(2)透明质酸水凝胶能够有效的包裹和缓释雪旺细胞分泌的外泌体,其缓释曲线与体内雪旺细胞增殖迁移及神经轴突再生的时间相似,能够更好的在体内应用。雪旺细胞分泌的外泌体能够有效的促进雪旺细胞增殖,促进雪旺细胞和神经元特异性蛋白分泌,能够较好的促进神经再生。(3)PCL/HA-EXO神经导管能够有效的促进大鼠长节段神经缺损的运动功能康复及组织学及电生理学明显改善。(本文来源于《天津医科大学》期刊2019-05-01）
郭奇[3]（2018）在《新型组织工程神经体外构建、修复大鼠坐骨神经缺损效果的研究》一文中研究指出目的通过系统研究周围神经横断损伤后免疫反应和神经再生的关系,在分子水平探讨促进周围神经再生的潜在靶向分子。为获得更好的修复效果,利用组织工程技术在体外构建新型组织工程神经修复大鼠周围神经缺损,综合评价其在神经修复方面的效果,以期在未来指导临床治疗神经损伤工作。方法利用基因芯片分析技术寻找与免疫反应和神经再生相关的差异表达基因,综合分析差异基因和调控蛋白质的交互网络关系,通过实时定量PCR和免疫组织化学染色验证差异基因。从幼年SD大鼠皮肤内分离、培养SKPs细胞,诱导分化为SKP-Neurons和SKP-SCs,利用SKP-Neurons和SKP-SCs与壳聚糖/丝素导管共培养来构建新型组织工程神经。构建的新型组织工程神经修复大鼠坐骨神经10 mm缺损。术后通过行为学、神经电生理、荧光金逆行示踪、神经和神经支配靶肌肉形态学等指标综合评价修复效果。结果1.基因分析验证:差异基因筛选结果显示有600多个基因和10个经典途径参与免疫反应,其中约60个基因参与神经再生的5个经典途径,分析并筛选出6个参与多途径的基因,它们被用来进行实时定量PCR和免疫组织化学染色验证。证明基因分析的准确性,筛选的差异基因可能为未来靶向药物治疗神经损伤提供实验依据。2.新型组织工程神经构建:SKP-SCs和SKP-Neurons壳聚糖/丝素导管培养构建的全新组织工程神经,细胞状态良好,组织工程神经构建成功;在细胞组分上与正常神经一致,具有神经轴突、施万细胞和细胞外基质成分。3.步态分析:实验组与自体组比较,在8 w具有统计学差异(p<0.05),4 w和12 w无统计学差异(p>0.05);实验组同支架组比较在4 w、8 w和12 w均有显着统计学差异(p<0.01)。4.神经电生理:术后12 w进行神经电生理检测,实验组与自体组比较在近/远端复合动作电位振幅方面均无统计学差异(p>0.05);但神经传导速度方面,自体组优于实验组(p<0.05)。实验组、自体组、支架组同非手术侧的正常神经对比还有一定差距(p<0.01)。5.再生神经形态学分析:术后2 w时,实验组部分个体坐骨神经近端轴突已穿组织工程神经到达桥接远端。术后12 w时,再生神经远端免疫组织化学和透射电镜结果在远端神经轴突密度、有髓神经纤维直径、髓鞘厚度和髓鞘板层数等方面均表现出:自体组优于实验组(p<0.05),实验组优于支架组(p<0.05),实验组、自体组和支架组与非手术侧的正常神经仍有一定差距(p<0.05)。6.荧光金逆行示踪:术后12 w,在再生神经远端注射荧光金逆行示踪剂,2w后脊髓运动神经元个数统计和背根节感觉神经元百分数统计结果示,实验组和自体组均优于支架组(p<0.01),实验组和自体组间无差异(p>0.05),尤其在脊髓运动神经元个数上,实验组和自体组和非手术侧的正常神经无差异(p>0.05)。7.坐骨神经靶肌肉形态学分析:术后12 w腓肠肌肌肉湿重,实验组和自体组无差异(p>0.05),实验组和自体组均优于支架组和缺损组(p<0.05)。Masson染色可见缺损组的靶肌肉萎缩明显,失去正常肌肉形态。腓肠肌肌纤维截面积的统计结果为非手术侧的正常神经优于自体组(p<0.05),自体组优于实验组(p<0.05),实验组优于支架组(p<0.05),支架组优于缺损组(p<0.05)。腓肠肌胶原纤维含量则表现为实验组和自体组无差异(p>0.05)。缺损组运动终板萎缩变形呈线,实验组、自体组和支架组可见圆形和椭圆形运动终板。结论1.通过芯片技术全面系统地探讨了大鼠坐骨神经离断后,经近端残端参与免疫反应和神经再生过程相关基因表达变化情况,差异基因相关编码蛋白的交互情况,并应用实时定量PCR和免疫组织化学染色验证芯片结果的可靠性。为揭示神经再生分子过程提供新的线索,也为未来周围神经损伤的微环境调节以及靶向药物治疗提供依据。2.将SKP-SCs和SKP-Neurons与可降解壳聚糖/丝素导管共同构建的新型组织工程神经,细胞组分与正常神经相近,并沉积有丰富细胞外基质。3.将SKP-SCs和SKP-Neurons与壳聚糖/丝素导管共同构建的新型组织工程神经修复大鼠坐骨神经10 mm缺损,术后12 w神经和神经支配靶肌肉在形态和生理功能上已大部分恢复,与自体神经修复效果基本一致(p>0.05)。本研究为临床应用自体皮肤分离、培养SKPs,分化SKP-SCs和SKP-Neurons以及构建组织工程神经修复各种临床神经缺损提供了实验依据,同时也为组织工程研究提供新线索。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-11-01）
林飞[4]（2018）在《电纺聚乳酸/磷酸钙/胶原修复大鼠坐骨神经缺损的研究》一文中研究指出周围神经损伤在日常生活中也经常见到,通常由于车祸、火灾以及自身遗传病等引起。自体神经移植由于本身的局限性并不能满足现实需要,而单一材料神经导管不能很好修复神经损伤,因此复合神经导管的研究就显得非常重要。复合神经导管可以依据周围神经受损的具体情况,选择不同材料,制备成不同尺寸,满足神经修复实际需求。本文使用聚乳酸(PDLLA)、磷酸钙(β-TCP)和I型胶原(Collagen),将PDLLA、β-TCP和Collagen溶于有机溶剂(二氯甲烷:乙酸乙酯=7:3),利用静电纺丝制备PDLLA/β-TCP/Collagen复合薄膜,并设置纯PDLLA组、PDLLA/β-TCP组为对照组。对样品进行红外光谱图测试、扫描电镜观察、力学拉伸实验和体外降解实验研究;培养血旺细胞对样品进行毒性分析,提取兔子新鲜血液对样品进行溶血率测试;样品安全性能达到生物医用植入材料国家标准后,将薄膜样品植入大鼠背部皮下两个星期,将与薄膜接触的皮下组织进行取材进行免疫组织化学染色(TNF-α)分析;将样品用于修复大鼠右腿10mm的坐骨神经缺损,并设置自体移植组为对照实验,叁个月内对大鼠的整体外观进行大体观察,叁个月后分别取出腓肠肌和新生神经,切取腓肠肌中段进行HE染色观察和肌肉萎缩率研究,对新生神经的中段部位进行HE染色、免疫荧光染色(DAPI、mouse anti-neurofilament 200)和醋酸双氧铀柠檬酸铅染色观察。经过红外分析可得叁组样品均已成功制备;通过扫描电镜可得薄膜纤维大小均一,PDLLA、PDLLA/β-TCP和PDLLA/β-TCP/Collagen组孔洞直径分别为2.51±0.53μm,2.72±0.61μm,3.01±0.74μm,具有半通透性(0<dia<10μm)结构,便于营养成分的流入,阻止淋巴组织等的进入;各组均具有一定的力学性能;由叁个月降解实验分析可得PDLLA/β-TCP/Collagen组质量损失率为35%,具有适宜降解性能,pH值基本维持在中性,PDLLA/β-TCP/Collagen组的降解速率和pH值的调控均好于a和b组,可以为神经再长提供临时环境;培养血旺细胞进行细胞毒性测试,可得各组材料细胞毒性均为一级,经溶血率测试可得叁组导管溶血率较小,均达到国家对于生物医用植入材料的标准;在大鼠叁个月恢复期间观察可得PDLLA/β-TCP/Collagen组大鼠右腿脚趾溃疡和疼痛感恢复情况要快于纯PDLLA组和PDLLA/β-TCP组,慢于自体移植组。由皮下两周包埋染色实验可得PDLLA/β-TCP/Collagen导管组炎症反应小于纯PDLLA组和PDLLA/β-TCP组,生物相容性较好。术后叁个月对大鼠腓肠肌进行分析可得PDLLA/β-TCP/Collagen组腓肠肌萎缩率小于纯PDLLA组(p<0.05),大于自体移植组(p>0.05)。PDLLA/β-TCP/Collagen组的血旺细胞(蓝色)和神经丝(绿色)密度均大于纯PDLLA组和PDLLA/β-TCP组,接近于自体移植组;PDLLA/β-TCP/Collagen组腓肠肌肌细胞的平均直径大于纯PDLLA组和PDLLA/β-TCP组(p<0.05),接近于自体移植组(p>0.05)。PDLLA/β-TCP/Collagen组的纤维形态,轴突直径和髓鞘厚度均好于纯PDLLA组和PDLLA/β-TCP组(p<0.05),接近自体移植组(p>0.05)。(本文来源于《武汉理工大学》期刊2018-05-01）
王莹,李文媛,尹国华,李智刚,金在顺[5]（2018）在《二氢睾酮联合脂肪源性干细胞对小鼠坐骨神经缺损后脑源性神经营养因子及其受体TrkB表达的影响》一文中研究指出目的探讨二氢睾酮(DHT)与脂肪源性干细胞(ADSC)联合应用对小鼠脱细胞同种异体神经支架移植坐骨神经缺损后脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体Trk B的表达和功能恢复的影响。方法 30只成年C57BL/6小鼠随机分为脱细胞神经支架(ANA)组、ADSC组和DHT+ADSC组。坐骨神经功能指数(SFI)、电生理和胫前肌湿重比方法检测神经运动功能的恢复,Western印迹检测神经移植体内BDNF及其受体Trk B的蛋白表达。NF200免疫荧光法检测神经支架中轴突表达,并示踪PKH26标记的移植ADSC。结果与ADSC组比较,DHT+ADSC组神经移植体内BDNF和Trk B蛋白相对表达明显增高,NF200表达增强,PKH-26标记的ADSC数量显着增高(P<0.05)。与ANA组比较,ADSC组和DHT+ADSC组电生理波幅明显增高、神经传导速度明显增快、延迟期明显缩短、胫前肌湿重比率明显增高,其中DHT+ADSC组神经恢复作用显着优于ADSC组(P<0.05),而且DHT+ADSC组SFI明显高于ANA组和ADSC组(P<0.05)。结论 DHT联合ADSC移植对小鼠脱细胞异体神经支架修复坐骨神经缺损后轴突再生和功能恢复的作用优于ADSC组,其机制可能与促进神经移植体内BDNF及其受体Trk B表达,进而促进移植的ADSC存活有关。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年06期）
吕丹[6]（2017）在《缓释Ⅵ型胶原诱导巨噬细胞极化促进大鼠坐骨神经缺损再生的应用研究》一文中研究指出目的:(1)Fmoc固相合成法合成RADA16-I自组装多肽,质谱鉴定并对其理化性质进行表征。静电纺丝制备PCL神经导管及对其力学性能进行测定。(2)采用RADA16-I自组装水凝胶包裹缓释Ⅵ型胶原,观察其在体外的释放曲线。采用Ⅵ型胶原诱导极化巨噬细胞,观察其体外极化巨噬细胞的效果。采用共培养模型,研究极化后的巨噬细胞对雪旺细胞增殖及功能的影响。(3)探讨RADA16-I自组装水凝胶包裹缓释Ⅵ型胶原填充PCL神经导管修复长节段大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:(1)采用Fmoc固相合成法合成RADA16-I自组装多肽。采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对合成的多肽进行纯化。采用~1H NMR核磁共振对合成及纯化后的小分子化合物RADA16-I进行表征。红外光谱检测化合物的红外吸收。透射电镜观察水凝胶纤维形貌。自组装水凝胶的流变性质采用流变仪进行检测。静电纺丝制备PCL神经导管,扫描电镜对PCL导管进行观察及测量纤维丝平均直径,改良比重法测量孔隙率并用小量程力学拉伸测量仪对其应力-应变曲线进行测定,计算杨氏模量、最大应力、最大载荷和最大断裂张力。(2)制备含有0.1%Ⅵ型胶原与1%RADA16-I混合液,室温静置以后制得混合水凝胶。取25ul的水凝胶填充于PCL支架中,置入PBS中,于0.5、1、2、3、4、5、6、7、14、28、56天时间点分别收集培养孔的上清液。采用ELISA法检测Ⅵ型胶原累积释放比率。分离、纯化、鉴定雪旺细胞。将大鼠RAW264.7巨噬细胞接种在24孔板中,每孔加入含0.1%Ⅵ型胶原的RPMI1640低糖培养基,培养及干预72小时后,采用CD68、CCR7、iNOS、CD206和CD163鉴定巨噬细胞相关表型。将Ⅵ型胶原诱导巨噬细胞极化后的培养液与新鲜的DMEM/F12培养基以1:1的比例混合,进行雪旺细胞的培养,建立不同极化状态巨噬细胞与雪旺细胞共培养模型,干预5天后用CCK-8检测雪旺细胞增殖。采用RT-PCR检测共培养条件下对雪旺细胞GDNF、NGF、NT3和MBP mRNA的表达。(3)制备含有0.1%Ⅵ型胶原与1%RADA16-I的混合水凝胶,填充17mm PCL神经导管并桥接大鼠坐骨神经15mm长节段缺损。采用单纯RADA16-I水凝胶填充PCL导管和自体神经移植作为参照。术后第3、14天时,免疫荧光染色显示巨噬细胞分化情况。在术后4、8、12周时,采用坐骨神经指数、电生理检测、免疫荧光、再生神经及肌肉形态学分析评估大鼠神经再生效果。结果:(1)RADA16-I的出品率为85.6%,RADA16-I自组装多肽形成水凝胶后,红外光谱峰值发生位移,以离子键互补的方式形成水凝胶。RADA16-I浓度的提高,其成胶的温度上升。RADA16-I浓度提高,成胶pH值有所上升。(2)Ⅵ型胶原释放的周期很长,长达56天。但在前6天时其释放比率较大,0.5 days:32.3±3.1%;1 days:38.2±4.1%;2 days:43.1±3.8%;3 days:47.8±5.7%;4 days:52.5±6.1%;5 days:56.0±5.2%;6 days:62.2±4.5%。在第6天到第56天之间,其释放逐渐放缓,7 days:65.1±5.3%;14 days:71.6±5.0%;28 days:78.8±4.1%;56days:98.7±0.8%。S100和Sox10荧光双标染色鉴定雪旺细胞纯度高达96.3%。经过VI型胶原72h的诱导极化后,M2型巨噬细胞所占CD68+细胞比例高达55.2%。Ⅵ型胶原极化组共培养模型下的雪旺细胞增殖在培养第3、5天时均显着高于对照组(P<0.05)。极化后的巨噬细胞培养液能够显着的促进雪旺细胞高表达GDNF、NGF、NT3和MBP mRNA,均显着高于对照组(P<0.05)。(3)支架植入术后3天和14天PCL组的M1巨噬细胞的比例(CCR7+/CD68+or iNOS+/CD68+)明显高于PCL/CollagenⅥ组(P<0.05)。支架植入术后3天和14天PCL/CollagenⅥ组M2巨噬细胞的显示比例(CD206+/CD68+or CD163+/CD68+)明显高于PCL组(P<0.05)。PCL/Collagen VI组的再生轴突面积、有髓轴突数量、髓鞘直径、G-ratio及髓鞘厚度在3个时间点均显着优于PCL组(P<0.05)。在12周时,有髓轴突数量和G-ratio在自体神经组和PCL/Collagen VI组之间无显着差异(P>0.05)。免疫荧光显示PCL/Collagen VI组的神经纤维及雪旺细胞较为有序的排列生长,可见雪旺细胞沿着轴突生长方向包裹,其也显示了较好的再生效果。PCL/Collagen VI组和自体神经组感觉及运动神经元数量、坐骨神经指数、CMAP、神经传导速度及CMAP潜伏期均显着优于PCL组(P<0.05),但PCL/Collagen VI组和自体神经组在上述指标中均无统计学差异(P>0.05)。肌肉染色分析也显示PCL/Collagen VI组肌肉纤维直径明显优于PCL组(P<0.05),PCL/Collagen VI组和自体神经组的肌肉纤维直径无统计学差异(P>0.05)。结论:(1)本研究成功的制备了RADA16-I多肽,其能够在生理条件下自组装形成水凝胶,能够满足外源性蛋白的包裹要求。PCL电纺导管力学性能可满足大鼠体内神经再生要求。(2)RADA16-I水凝胶能够有效的包裹和缓释VI型胶原,其缓释曲线与体内巨噬细胞招募、迁移时间相似,能够更好的在体内应用。VI型胶原在体外能够有效的诱导极化巨噬细胞向M2型转化,并且其能够促进雪旺细胞生物学功能。(3)RADA16-I水凝胶包裹缓释VI型胶原能够在体内有效极化巨噬细胞向M2型转化,并且有效的提高神经再生质量和运动功能恢复水平。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-09-01）
向飞帆,阳运康,谭小琦,魏代清,杨琨[7]（2017）在《脱细胞神经支架联合干细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损的meta分析》一文中研究指出背景:研究表明,脱细胞神经支架不仅具有天然神经的空间叁维结构,而且具有低免疫原性,但对于长段神经缺损的修复效果仍不理想。为此,有学者将脱细胞神经支架复合种子细胞构建组织工程神经,以提高其治疗效果。目的:系统评价脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞移植修复大鼠坐骨神经缺损的疗效。方法:检索PubM ed、The Cochrane Library、EMbase、CNKI、WanF ang和VIP数据库,查阅关于脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞修复大鼠坐骨神经缺损的随机对照实验,检索时限均为建库至2016年7月。由3名研究员按纳入和排除标准独立筛选文献、提取数据和评价文献的方法学质量,采用Review Manger5.3软件进行meta分析。结果与结论:最终10篇文献纳入研究,共计252只大鼠。Meta分析结果显示:(1)脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组的坐骨神经功能指数均优于单纯脱细胞神经支架组:2周[SMD=2.73,95%CI(1.92,3.54),P<0.000 01],4周[SMD=4.57,95%CI(3.43,5.70),P<0.000 01],6周[SMD=1.62,95%CI(0.18,3.06),P=0.03],8周[SMD=4.90,95%CI(2.96,6.84),P<0.000 01];(2)术后12周脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组神经传导速度、潜伏期、振幅优于脱细胞神经支架组:神经传导速度[SMD=1.39,95%CI(0.99,1.78),P<0.000 01],潜伏期[MD=-0.98,95%CI(-1.19,-0.76),P<0.000 01],振幅[SMD=1.23,95%CI(0.62,1.85),P<0.000 1];(3)脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组髓鞘厚度均优于单纯脱细胞神经支架组:术后8周髓鞘厚度[MD=0.14,95%CI(0.07,0.21),P<0.000 1],术后12周髓鞘厚度[SMD=1.85,95%CI(1.63,2.08),P<0.000 01],术后12周有髓神经纤维数[SMD=3.59,95%CI(2.63,4.55),P<0.000 01];(4)术后8周脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞组腓肠肌湿重优于单纯脱细胞神经支架组[SMD=4.22,95%CI(2.40,6.03),P<0.000 01];(5)当前证据表明,脱细胞神经支架联合间充质干细胞或许旺细胞治疗大鼠坐骨神经缺损较单纯脱细胞神经支架更有助于神经再生和功能恢复。受纳入文献质量的限制,以上结论需更高质量、更大样本的随机对照实验加以验证。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2017年22期）
徐沁同,孟德华,张键,潘剑锋,江立波[8]（2017）在《血管内皮细胞联合同种异体神经移植修复长距离大鼠坐骨神经缺损》一文中研究指出目的:探讨血管内皮细胞(EC)联合去细胞同种异体神经移植修复长距离大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:80只雌性Sprague-Dawley大鼠,20只取双侧1.5cm长坐骨神经,Hudson优化法制备去细胞同种异体神经(ANA);60只均于右侧建立1.5cm长坐骨神经缺损模型,随机分为反转吻合坐骨神经的自体神经(ANG)移植组、ANA移植组及ANA+EC移植组(n=20)。术后1、2、4、12周,每组各取5只进行测试,指标包括:坐骨神经功能指数(SFI)、电生理检查[动作电位潜伏延迟率(LDR)、神经传导速度恢复率(NCVRR)和复合肌动作电位恢复率(CMAPRR)]、最大强直收缩力恢复率(MTFRR)、腓肠肌湿重恢复率(MWRR)、微血管增生率(MVDPR),术后12周甲苯胺蓝染色下测量神经纤维数量、髓鞘厚度、G ratio,并行电镜观察。结果:术后早期,ANA+EC移植组大鼠SFI、MVDPR较ANA移植组改善明显(P<0.05);术后晚期,ANA+EC移植组大鼠CMAPRR、MTFRR、MWRR较ANA移植组恢复更佳(P<0.05);术后12周时,ANA+EC移植组再生神经数量和形态更接近ANG移植组。结论:对于长距离坐骨神经缺损的大鼠模型,使用载血管内皮细胞的去细胞同种异体神经进行神经移植修复,早期肌肉功能优于单独使用去细胞同种异体神经,晚期神经纤维的数量和质量更接近于自体神经移植。(本文来源于《中国临床医学》期刊2017年03期）
曾海涛[9]（2017）在《血管化纳米复合材料n-PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管修复大鼠坐骨神经缺损》一文中研究指出目的:探索血管化纳米复合材料n-PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管对大鼠坐骨神经损伤修复的效果。方法:将60只重280-350g成年雄性SPF级SD大鼠随机分成4组全部在右后肢手术下完成坐骨神经15mm缺损模型。A组PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管桥接+局部注射内皮生长因子基因(pHVEGF16)组;B组单纯PDLLA/PRGD/HAP/VPA神经导管桥接组;C组自体神经移植组;D组硅胶管桥接组。术后每2周进行坐骨神经功能指数检测并观察动物一般情况,每4周检测腓肠肌湿重,叁个月后取材并进行神经肌肉电生理、组织学和透射电子显微镜观察等检测并分析神经再生情况。结果:一般状况:大鼠右后足发生足底溃疡或坏疽的的情况为A组2只、B组5只、C组4只、D组6只。坐骨神经功能指数显示,A组大鼠右后肢运动功能恢复速度较快效果最好,其后依次为自体神经移植组、单纯神经导管移植组,恢复最慢的为硅胶管桥接组。电生理测试:术后12周A组和C组间坐骨神经传导速度比较差异无统计学意义(P>0.05),但A组优于B组和D组且差异分别有统计学意义(P<0.05)。腓肠肌湿重:A组明显优于B组和D组(P<0.05)而A组与C组比较无明显统计学意义(P>0.05)。组织学电镜观察:术后叁个月A组大鼠再生神经纤维排列密集,再生神经纤维成熟已接近正常神经组织,仅见少数新生的幼稚有髓神经纤维和个别脱髓鞘改变,电镜下可见大量成熟再生神经纤维,雪旺细胞空泡样改变少见,A组大鼠新生坐骨神经轴突计数明显优于B组和D组(P<0.05),与C组相较无统计学差异(P>0.05)。结论:运用n-HAP/PRGD/PDLLA/VPA复合神经材料导管合并局部注射血管内皮生长因子基因(pHVEGF16)治疗大鼠坐骨神经15mm缺损显示出了良好的神经修复效果,说明人工神经导管血管化的重要性净额此种复合神经材料导管对于损伤神经再生的有效性,而局部注射pHVEGF16的适宜浓度和毒性作用有待进一步研究。(本文来源于《武汉大学》期刊2017-05-01）
邓熊[10]（2017）在《参附注射液玻璃化保存的大鼠坐骨神经修复异体神经缺损》一文中研究指出目的:探讨参附注射液提高大鼠坐骨神经深低温玻璃化保存效果的可行性。方法:将SPF级SD雄性大鼠坐骨神经分别在含有不同浓度参附注射液(0%、5%、10%、30%)的玻璃化液(A、B、C、D组)中深低温(-80℃)保存4周,观察不同浓度参附注射液组保存后坐骨神经超微结构,双荧光染色共聚焦显微镜(LSCM)观察神经生物活性,Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达。用保存后的大鼠坐骨神经修复对应Wistar雄性大鼠(A'、B'、C'、D'组)坐骨神经10mm缺损,术后不同时间段对大鼠基本情况进行观察,同时在实验周期中(4、8、12、16周)对大鼠坐骨神经功能进行检测对比,于第16周对移植段大鼠神经传导速度和潜伏期进行检测,观察再生神经组织学形态。结果:透射电镜观察,A、B、C、D组均存在不同程度的脱髓鞘改变,但B、C、D组轻于A组;LSCM观察,B、C、D组绿色荧光较强,红色荧光较弱,A组绿色荧光较弱,红色荧光最广;Bcl-2蛋白表达,A组低于B、C、D组,B组低于C、D组差异具有统计学意义(P<0.05),Bax蛋白表达,B、C、D组低于A组,C、D组低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05),两种蛋白在C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。移植术后各期SFI,术后16周后电生理、再生神经有髓纤维数及髓鞘厚度,均显示C'、D'组优于A'、B'组,差异有统计学意义(P<0.05),但A'、B'两组比较及C'、D'两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后16周再生神经超微结构,A'、B'组有髓神经纤维数较少、直径较细,分布稀疏,髓鞘较薄;C'、D'组再生有髓神经纤维数量较多,分布广泛、髓鞘较厚。结论:参附注射液能提高玻璃化保存大鼠坐骨神经的效果,促进异体移植后受体坐骨神经的再生。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2017-05-01）
坐骨神经缺损论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:(1)体外分离新生SD大鼠雪旺细胞并培养,超速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体并进行特异性蛋白鉴定。透射电镜观察雪旺细胞外泌体的粒径和分布。(2)研究雪旺细胞外泌体对神经元及雪旺细胞的生物学作用。观察和研究透明质酸凝胶缓释外泌体的生物学特征参数。(3)探讨透明质酸水凝胶包裹缓释雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管修复大鼠坐骨神经长节段缺损的形态学和功能学效果。方法:(1)采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化法提取原代大鼠雪旺细胞,并采用DMEM/F12完全培养基培养和纯化。采用S100和Sox10进行纯度鉴定。采用CCK-8试剂盒对雪旺细胞的增殖状态进行检测。采用超高速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体,利用BCA试剂盒检测外泌体中蛋白的含量。Western blot法对雪旺细胞分泌外泌体表面标志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na~+/K~+ATP酶进行鉴定。(2)构建1%浓度的透明质酸水凝胶,并将雪旺细胞外泌体进行包裹。体外放置于PBS中采用BCA试剂盒检测外泌体的缓释曲线。应用雪旺细胞外泌体干预雪旺细胞和神经元,CCK-8试剂盒检测外泌体对雪旺细胞的增殖作用,以及对两种细胞生物活性蛋白分泌的作用。ELISA法检测培养第1、3、5天后,外泌体干预的雪旺细胞表达神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)、髓鞘零蛋白(P0)、细胞极性蛋白Par-3的水平。同时ELISA法检测外泌体干预后第1、3、5天时神经元中生长相关蛋白43(Growth-associatedprotein-43,GAP-43)、神经丝蛋白-200(Neurofilament-200,NF-200)、βIII–Tubulin的表达水平。(3)静电纺丝制备PCL神经导管,并采用扫描电镜观察导管的大体形态及显微结构,测量纤维丝的直径。采用小量程的力学仪器检测PCL神经导管的的杨氏模量、最大应力、最大载荷、最大断裂张力等力学参数。采用透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管,制备15mm长节段大鼠坐骨神经缺损,并进行端端吻合。采用单纯透明质酸填充PCL导管作为对照组,自体神经移植组也进行对照。在术后4、8、12周时检测大鼠坐骨神经指数、再生神经电生理功能。荧光金逆行示踪检测大鼠神经元胞体的存活情况及神经再生的情况。透射电镜观察叁组再生神经的有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积。NF-200和S100对各组再生神经的免疫荧光染色,观察期神经结构再生情况。HE染色观察叁组大鼠腓肠肌肌纤维直径的差异。结果:(1)雪旺细胞在光镜下可以看到呈梭型,体积不大,存在双极,细胞核在中间,比较明显,有折光性。细胞多呈纵行排列的形态。雪旺细胞在接种2小时后,贴壁的比率约为23.5%,6小时时的贴壁比率增加到47.9%,而在12小时的时候有88.9%的细胞贴壁,在16小时以后细胞贴壁的比率均高于99%。在培养3天时,雪旺细胞数量较最初增长了3.9倍,而培养7天时增长了11.4倍。S-100和Sox-10双标荧光染色对雪旺细胞鉴定的纯度为97%。外泌体粒径主要分布在100-160 nm之间,本研究测得的外泌体的平均直径在125 nm。Western blot检测显示外泌体特异性蛋白CD63、TSG101、CD9在本研究所提取的雪旺细胞外泌体中均有表达,而非外泌体表达蛋白Rab5和Na~+/K~+ATP酶则未见表达。(2)外泌体在透明质酸凝胶中前3天释放比率较大,第一天释放比率为34%,第叁天达到41%,随着时间的延长,释放逐渐缓慢。在第4、5、6、8、16、32天时的累积释放比率为43%、47%、51%、53%、75%、90%,而在第64天时候检测得出累积释放率为99%,几乎完全释放。对照组轴突数量为35.4±4.3,而外泌体刺激组为126.3±14.4(P<0.05)。在轴突生长长度方面,外泌体组的平均长度长达(1563.0±132.5)μm,显着高于对照组的(864.3±77.4)μm(P<0.05)。外泌体干预组雪旺细胞在培养后的第3、5、7天时细胞增殖水平均显着高于对照组(P<0.05)。外泌体刺激后的雪旺细胞分泌NGF、BDNF、髓鞘零蛋白(P0)、细胞极性蛋白Par-3的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平(P<0.05)。外泌体刺激后的DRG神经元细胞分泌的标志性蛋白进行检测,结果发现GAP-43、NF-200、βIII–Tubulin的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平(P<0.05)。(3)PCL神经导管的内孔直径为1500μm左右,而管壁的厚度约为500μm,表面纤维丝均匀分布,纤维丝平均直径为4.9μm。PCL神经导管孔隙率为(89.7±2.6)%、最大应力为(7.5±0.6)MPa、杨氏模量为(22.4±2.1)MPa、最大断裂张力为(596.4±33.8)%、最大载荷为(5.6±0.8)N,符合神经再生要求。术后第4、8、12周时PCL/HA-EXO组大鼠的再生神经有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积显着高于PCL/HA组,而G-ratio值则显着低于PCL/HA组(P<0.05)。而叁个时间点中,PCL/HA-EXO的有髓轴突的数量、再生轴突的面积和G-ratio值均与自体神经移植组差异无统计学意义(P>0.05)。术后12周时可见PCL/HA-EXO组大鼠轴突沿着导管顺行生长,有明显的方向性。并且神经轴突及雪旺细胞的表达显着高于PCL/HA组,与自体神经移植组差异不明显。各组大鼠术后随着时间的延长,复合肌动作电位幅度、神经传导速度及潜伏期均有所改善,但PCL/HA-EXO组和自体神经组较PCL/HA组改善更为明显,术后4、8、12周叁个时间点均显着高于PCL/HA组(P<0.05)。在术后第8周时,PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的神经传导速度及潜伏期均无显着性差异,而复合肌动作电位仍存在一些差异(P<0.05)。而术后12周时,叁个指标则在PCL/HA-EXO组和自体神经移植组中无统计学差异(P>0.05)。PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数在术后叁个时间点均显着高于PCL/HA组(P<0.05),并且在术后第8,12周时PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数相似,无统计学差异(P>0.05)。术后12周PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的腓肠肌纤维直径分别为(68.4±6.2)μm和(72.3±7.6)μm,显着高于PCL/HA组(P<0.05),而PCL/HA-EXO组和自体神经移植组则无统计学差异(P>0.05)。结论:(1)本研究成功分离提取了新生SD大鼠雪旺细胞,纯度高,满足后续实验要求。采用超速离心法加超滤法能够成功提取雪旺细胞分泌的外泌体,经鉴定是雪旺细胞分泌的外泌体,纯度较高。(2)透明质酸水凝胶能够有效的包裹和缓释雪旺细胞分泌的外泌体,其缓释曲线与体内雪旺细胞增殖迁移及神经轴突再生的时间相似,能够更好的在体内应用。雪旺细胞分泌的外泌体能够有效的促进雪旺细胞增殖,促进雪旺细胞和神经元特异性蛋白分泌,能够较好的促进神经再生。(3)PCL/HA-EXO神经导管能够有效的促进大鼠长节段神经缺损的运动功能康复及组织学及电生理学明显改善。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
坐骨神经缺损论文参考文献
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论文知识图
