刘焱赵慧颖刘颖李艳(石家庄市第一医院050011)
【摘要】目的观察冠心舒通对急性心肌梗死（AMI）基质金属蛋白酶抑制剂-1（timp-1）的影响，探讨其作用机制，为临床提供依据。方法建立大鼠的心肌梗死模型，应用冠心舒通0.4g.d-1.kg-1进行干预与心肌梗死组比较，利用逆转录-PCR技术（RT-PCR）的方法，观察心肌基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达。结果急性心肌梗死后30天冠心舒通组心肌基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)mRNA表达较心肌梗死组及假手术组明显升高(P<0.01)。结论冠心舒通有助于改善急性心肌梗死预后。
【关键词】冠心舒通急性心肌梗死基质金属蛋白酶抑制剂-1
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）39-0181-02
EffectsofGuanxinshutongtherapyontissueinhibitorsofmetalloproteinases?duringearlyaftermyocardialinfarctioninrats.
LIUYan,ShijiazhuangCityNo.1Hospital
【Abstract】Objective:ToexploreeffectsofGuanxinshutongtherapyonaftermyocardialinfarction?inrats,thisstudymeasurestissueinhibitorsofmetalloproteinase-1(TIMP-1)mRNAlevelsbyRT-PCR,soastoresearchmechanismsofmyocardialfibrosisbyGuanxinshutong.Methods:TheestablishmentofmyocardialinfarctionmodelApplicationofGuanxinshutong0.4gd-1.Kg-1,andmyocardialinfarctiongroup,usingreversetranscription-PCRtechnique(RT-PCR)methodofmyocardialinhibitorsofmetalloproteinase-1increased(TIMP-1)mRNAexpression.Results：EffectsofGuanxinshutong?toincreased?for30dinhibitorsofmetalloproteinase-1(TIMP-1)mRNAexpressionafteracutemyocardialinfarction(P<0.01).Conclusion：EffectsofGuanxinshutonghelptoimprovetheprognosisofacutemyocardialinfarction.
【Keywords】Guanxinshutongacutemyocardialinfarctiontissueinhibitorsofmetalloproteinases?
国内外研究表明[1]，左室重构是急性心肌梗死和心力衰竭治疗的重要目标。左室重构的程度与严重左室功能障碍和进展为充血性心力衰竭密切相关。细胞外基质的结构与功能是由基质金属蛋白酶家族来维系。细胞外基质的降解是由内源性基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）调节的。细胞外基质各成份过度降解造成左室扩大和心力衰竭。特别是TMP-1与许多MMPs高亲和力，抑制MMPs的蛋白水解活动，在左室重构中起直接作用。提示TIMPs水平可预测临床预后[2]。研究发现血清TIMP-1水平和左室收缩末容积及左室射血分数相关[3]。在TIMP-1缺乏鼠模型，研究TIMP-1在左室几何形态和心脏功能中的作用，在4个月龄时超声证实，鼠左室舒张末容量增加18%,心脏重量增加38%,心肌胶原含量减少可能是左室扩张的原因。这些结果表明基本TIMP-1表达维持正常左室心肌结构。有研究显示[4]，TMP-1缺乏与左室重构加重合肥大反应有关。研究表明，冠心疏通改善实验性犬急性心肌缺血和心肌梗塞的作用，能减轻心肌缺血程度及减小梗塞面积。本研究利用逆转录-PCR技术（RT-PCR）的方法，观察心肌基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达，以探讨冠心舒通对急性心肌梗死预后的影响。
1材料与方法
1.1实验动物?选取雄性Wister健康大鼠30只，月龄10~12W,质量230-250g，由河北医科大学实验动物中心提供，检疫合格。
1.2大鼠大面积心肌梗死模型建立?通过结扎冠状动脉左前降支造成大鼠大面积心肌梗死模型。大鼠称质量，经10%水合氯醛（0.3ml/kg腹腔注射）麻醉，待其呼吸平稳后固定于手术台上，四肢用针灸针连接心电图。75%酒精消毒切口部分，正中切口打开胸腔，分离气管，选环状软骨环下2~3软骨处，用21号带外鞘管的穿刺针穿刺进入气管。取出针芯，留置鞘管作为气管插管，针尾接小动物呼吸机（由江苏省特里麻醉呼吸设备公司生产），潮气量为3ml/㎏，通气频率90次/min，并依观察动物胸部起伏适当调节呼吸机参数。取前胸正中切口，切开皮肤后，钝性分离胸壁肌肉组织，在3~4肋间进入胸腔，分离心包，从剑突下方向胸腔方向及从两侧胸壁方向上方适度挤压，使心脏跳出胸腔，寻找冠状动脉左前降支，在心肌梗死组连同一小束心肌一起结扎。结扎后左室变白，并出现室壁运动减弱，心电图I、avL导联S-T段明显抬高1mm表明结扎成功，然后逐层关胸。撤掉呼吸机。自主呼吸平稳后，拔出气管插管，逐层缝合。假手术组（Sham组）只穿线绕过冠状动脉左前降支而不结扎。造模成功。术后大鼠单笼放置，待清醒后编号分笼饲养，屏障环境（温度20~26℃，湿度40~70，空气过滤纸至万级水平），鼠料喂养。将术后24h存活的30只大鼠随机分为（1）假手术对照组;（2）AMI组;（3）冠心舒通组（冠心舒通0.4g.kg-1.d-1灌胃），每组10只。
1.3标本采集
每组分别于给药后30天，取大鼠用10%水和氯醛麻醉，迅速开胸取出心脏，冰上操作，在4℃的DEPC水中洗去残余血液，剪取左室非梗死区心肌组织4块（每块约100mg），立即放入液氮壶中速冻，然后放在-80℃低温冰箱中保存。
1.4逆转录多聚酶链反应（REVERSETRANSCRIPTION，RT-PCR）采用短片段一步法[5]，进行TIMP-1逆转录PCR扩增。大鼠Timp-1引物序列：上游：5-gatatgtccacaagtcccag-3；下游：5-taaacagtgttcagggttcag-3；PCR产物长度为329bp;大鼠B-actin引物序列：上游5-gccatgtacgtagccatcca-3；下游5-gaaccgctcattgccgatag-3；内对照GAPDH长度为375bp。cDNA第一链合成?37℃反转录60min，95℃5min灭活反转录酶。热循环参数：Timp-1PCR扩增：94℃变性5min，然后再94℃变性45s，53℃退火35s，72℃延伸45s，共35个循环，最后，72℃延伸5min。目的基因长度329bpactin用作内参照，保证每次实验的相对可比性。目的基因长度375bp，同时扩赠鼠
1.5统计学方法计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，有意义时，组间两两比较采用LSD检验。以P<0.05为差异有统计学意义。采用SPSS10.0进行统计学处理。
2结果
心肌梗死后30d大鼠心肌冠心舒通组Timp-1mRNA水平较假手术组和AMI组升高，（P<0.01）。见表1。
表1大鼠心肌梗死周围区TIMP-1/β-actinemRNA变化（x-±s）p<0.01组别（n）7dF值
组别（n）7dF值假手术对照组（10）0.72±0.5232.47AMI组（10）0.48±0.2841.09冠心舒通组（10）1.13±0.2229.17
3讨论
研究表明，冠心疏通具有调整、改善心血管功能的作用，改善实验性犬急性心肌缺血和心肌梗塞的作用，能减轻心肌缺血程度及减小梗塞面积，并能抑制心肌缺血及心肌梗塞引起的血清肌酸磷酸激酶（CPK）活性升高；降低低切速下的血液粘度，降低血浆纤维蛋白原含量，抑制血小板粘附性和聚集性，改善血液流变性本研究显示，冠心舒通升高心肌梗死后30d大鼠心肌组mRNA水平。提示冠心舒通通过增加Timp-1表达来抑制基质金属蛋白酶降解蛋白活动，从而改善急性心肌梗死早期重构，改善预后降低死亡率。因此冠心舒通在冠心病治疗领域中具有广阔前景。
参考文献
[1].MannDL,BristowMR.Mechanismsandmodelsinheartfailure:thebiomechanicalmodelandbeyond.[J].Circulation2005,111(21):2837-2849.
[2].ChaneeyAL，BrowerGL，PetersonJT，etal.EffeetsofMatrixmetalloproteinaseinhibitiononventrieularremodelingduetovolumeoverload.[J]Cireulation.2002;105:1983-1988.
[3].AnneM.Romanie，eynthiaL.Burns-Kurtis，BernardGout，etal.Matrixmetalloproteinaseexpressionincardiacmyoeytesfollowingmyoeardialinfarctionintherabbit.[J]LifeSei.200I:68:799-814.
[4].PittB,WhiteH,NicolauJ,etal.EplerenoneReducesMortality30DaysAfterRandomizationFollowingAcuteMyocardialInfarctioninPatientsWithLeftVentricularSystolicDysfunctionandHeartFailure.[J].Am.Coll.Cardiol.,Aug2005;46:（10）425-431.