导读:本文包含了大鼠肝移植论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:他克莫司,肝细胞癌,原位肝脏移植,Treg类细胞因子
大鼠肝移植论文文献综述
王元元,邓卫平,彭吉霞,吴胜英[1]（2019）在《FK506对肝细胞癌模型大鼠肝移植术后免疫调节的影响》一文中研究指出目的:观察他克莫司(FK506)对大鼠肝细胞癌模型肝移植术术后免疫功能的影响。方法:雄性Lewis大鼠76只,DA大鼠48只。选取其中60只Lewis大鼠用二乙基亚硝胺灌胃构建肝癌模型,14周后将48只正常DA大鼠肝脏移植于造模后存活的48只肝癌模型大鼠,术后随机分为模型组,FK506高、中、低剂量组(n=12);另16只正常雄性Lewis大鼠作为正常对照组。术后FK506治疗组分别以1、0.5和0.25 mg/kg剂量灌胃4周,正常对照组和模型组给予0.9%氯化钠溶液。于治疗2周和4周时采用ELISA法分别检测外周血一氧化氮(nitric oxide,NO)及肝组织白介素-2β(Interleukin-2β,IL-2β)、IL-4β、IL-12β、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta,TGF-β1)及肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)水平;采用流式细胞仪检测Treg、CD4+T、CD8+T细胞数;RT-PCR方法检测肝脏诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因表达。结果:FK506中、高剂量组IL-2β、IL-4β、IL-12β、NO、IFN-γ、TGF-β1、TNF-α、CD4+T%、CD8+T%在治疗2周和4周时均明显降低,iNOS mRNA低表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗4周时与同组治疗2周时比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FK506对二乙基亚硝胺诱导肝细胞癌模型大鼠原位肝移植术后急性排异反应具有明显的抑制作用,这一作用主要是通过调节Treg类细胞因子及NO信号通路蛋白而实现。(本文来源于《湖北医药学院学报》期刊2019年05期）
郑雪,李静,黄俊凯,丁新,陈卫刚[2]（2019）在《骨髓间充质干细胞移植治疗四氯化碳大鼠肝纤维化的实验研究》一文中研究指出目的通过移植大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)治疗肝纤维化大鼠,并评价其疗效。方法通过全骨髓贴壁法分离培养纯化大鼠BMSC,用流式细胞仪对第3代BMSC进行表面抗原鉴定。选取清洁雄性SD大鼠20只,利用四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl_4)皮下注射构建大鼠肝纤维化模型,将肝纤维化大鼠随机分为BMSC组、PBS组,每组10只;分别通过尾静脉注射,予1 mL细胞浓度为1×10~6个/mL的BMSC细胞悬液、1mL PBS溶液,另取6只健康雄性SD大鼠作为空白对照组;移植后第5周处死各组大鼠,采集血液检测大鼠肝功;取肝脏组织切片进行HE、Masson染色,观测大鼠肝细胞组织损伤及纤维化程度,利用Image J软件计算肝脏胶原容积分数(Collagen Volume Fraction,CVF);通过qRT-PCR检测各组大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果(1)通过流式细胞术鉴定BMSC表面抗原,CD29、CD90高表达,CD45低表达。(2)与PBS组比较,BMSC组大鼠肝脏肝小叶网状结构较完整,CVF降低且Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少(P<0. 05)。(3)与PBS组相比,BMSC组大鼠肝功能改善,且差异具有统计学学意义(P<0. 05)。结论同种异体移植BMSC可以有效减少肝脏胶原沉积,改善肝纤维化大鼠肝脏功能。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2019年05期）
游茂春,刘校彤,李雅娟,罗浩东,潘世林[3]（2019）在《脂肪间充质干细胞外泌体移植治疗大鼠肝纤维化疗效研究》一文中研究指出我课题组前期研究表明脂肪间充质干细胞(ADSCs)可有效改善大鼠肝脏纤维化,但其分泌的外泌体(ADSCs-exo)是否也有类似的作用,罕见报道。本实验首先进行ADSCs原代培养并鉴定,收集P3-P6传代培养细胞培养上清液采用差异超速离心法提取外泌体。同时采用雄性SD大鼠48只,8只正常组,40只模型组采用30%四氯化碳橄榄油溶液进行腹腔注射,(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
李先亮,白纯,杨龙,李瀚,吕少诚[4]（2019）在《大鼠肝移植免疫耐受过程Th细胞和Treg细胞因子及信号通路蛋白的变化研究》一文中研究指出目的探讨大鼠肝移植免疫耐受过程中,辅助性T细胞(Th)和调节性T细胞(Treg)细胞因子及相关信号通路蛋白的变化与免疫耐受的关系。方法双袖套法建立原位肝移植模型,将大鼠分为3组:手术对照组(6只),假手术不进行肝移植;短期组(10只),术后存活10 d;耐受组(10只),术后存活100 d,移植肝功能恢复正常。检测各组大鼠肝功能指标如丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),Th1细胞因子[干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α],Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-6、IL-13),Th17细胞因子[粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-17A],Treg细胞因子[IL-10、转化生长因子(TGF)-β、IL-12p]表达水平。对各组大鼠血清进行蛋白芯片检测。结果与手术对照组比较,短期组AST明显降低,ALT明显升高(P<0.05)。而耐受组与手术对照组的AST、ALT水平比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。各组大鼠的肝组织中,与手术对照组比较,短期组Th1细胞因子IFN-γ、IL-2表达水平明显升高(均为P<0.05);耐受组Th2细胞因子IL-4的表达水平明显低于手术对照组(P<0.05);短期组Th2细胞因子IL-5、IL-6、IL-13的表达水平明显低于手术对照组(P<0.05);耐受组IL-17A的表达水平明显高于手术对照组(P<0.05)。耐受组IL-10、IL-12p的表达水平明显高于手术对照组(均为P<0.05),短期组TGF-β的表达水平明显高于手术对照组(P<0.05)。与手术对照组比较,短期组细胞间黏附分子(ICAM)-1、前血小板碱性蛋白(Ppbp)、神经纤毛蛋白(Neuropilin)-2、Notch-2蛋白的表达水平明显升高(均为P<0.05);耐受组趋化因子配基17(CXCL17)、ICAM-1、Neuropilin-2蛋白的表达水平明显升高(均为P<0.05),而B7-1蛋白的表达水平显着减低(P<0.05)。结论在大鼠肝移植自然免疫耐受过程中,Treg类细胞因子(IL-10、TGF-β、IL-12p), IL-6, IL-17以及细胞表面的跨膜信号通路分子(ICAM-1、Neuropilin-2、B7-1蛋白)在其中起到了重要的作用。(本文来源于《器官移植》期刊2019年04期）
孟凡兵,刘悦,沈宁,罗刚健[5]（2019）在《丙泊酚预处理对大鼠肝移植术后急性肾损伤的影响》一文中研究指出目的探究丙泊酚对肝移植术后急性肾损伤(AKI)的影响及其机制。方法将40只大鼠随机分为4组(假手术组、肝移植模型组、脂肪乳干预组、丙泊酚干预组),每组10只。对肝移植模型组大鼠进行原位肝移植(AOLT)模型的构建,假手术组只开腹和游离相应血管,对脂肪乳干预组和丙泊酚干预组大鼠连续3天每天分别腹腔注射50 mg/kg脂肪乳和丙泊酚。结果与假手术组相比,肝移植模型组大鼠肾脏呈现明显的组织病理学损伤,血清BUN、Cr水平显着升高,肾组织细胞凋亡显着增加,caspase3及SIRT1的表达显着上调(P <0.05)。与肝移植模型组相比,丙泊酚干预组大鼠病理学损伤显着减轻、血清BUN、Cr、细胞凋亡及caspase3表达显着降低(P <0.05),而SIRT1的表达进一步升高(P <0.05)。脂肪乳干预组大鼠上述各项指标与模型组均差异无统计学意义。结论丙泊酚预处理可上调肾组织SIRT1蛋白的表达,抑制细胞凋亡,从而减轻肝移植术后急性肾损伤。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年09期）
张先兵,李勋,熊平,易传超,陈曦[6]（2019）在《叁七总皂苷对大鼠肝移植排斥反应的影响及相关机制》一文中研究指出目的探讨叁七总皂苷(PNS)对Kupffer细胞(KCs)功能状态、肝移植术后免疫环境的影响,及其相关机制。方法分离大鼠KCs,吞墨台盼蓝鉴定KCs活性,细胞实验分LPS(-)组、LPS(+)+PNS(0μmol)组、LPS(+)+PNS(10μmol)组,、LPS(+)+PNS(20μmol)组,Western blot、ELISA检测各组细胞及上清液炎症因子和氧化应激产物的表达,免疫荧光检测KCs CD206的表达,Western blot检测NF-κB和Keap1-Nrf2-ARE通路蛋白表达。建立大鼠移植模型,分为SHAM组、LT(PBS处理)组和PNS(200 mg/kg)组,术后检测各组肝功能、炎症因子、肝组织病例、凋亡情况,并观察大鼠生存时间。结果随着PNS浓度的增加,KCs分泌促炎因子和氧化应激产物MDA水平逐渐降低,明显低于PNS(0μmol)组,而抗炎因子IL-10以及抗氧化应激产物SOD水平逐渐升高,明显高于PNS(0μmol)组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光示PNS提高了KCs表型CD206的表达。同时,PNS减少了KCs IRAK4、p-IKKα、p-IκBα、p-p65、Keap1蛋白表达,而Nrf2、ARE蛋白表达水平逐渐升高,且与低PNS浓度组比具有统计学上的差异(P<0.05)。与LT组比,PNS组的大鼠肝移植后肝功能明显改善,促炎因子表达水平降低,肝细胞凋亡减少,肝组织急性排斥病理改变减轻,大鼠生存时间明显增高(P<0.05)。另外,大鼠注射GdCl3封闭KCs功能发现,PNS组出现严重的急性排斥反应,与LT组比较无统计学上差异(P>0.05)。结论 PNS能够通过抑制NF-κB和Keap1-Nrf2-ARE通路减少活化KCs的炎症和氧化应激反应,促进KCs向免疫耐受的M2型极化,提高大鼠移植术后的生存时间。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2019年04期）
赖星[7]（2019）在《SCRAF1在调控Kupffer细胞免疫功能及诱导大鼠肝移植术后免疫耐受中的机制研究》一文中研究指出背景急性排斥反应(acute rejection,AcR)相关并发症仍是当前影响受体长期存活的重要障碍之一,如何诱导移植物免疫耐受进而减少甚至停用免疫抑制剂是移植界的难题,也是目前肝移植研究领域的热点。凋亡细胞及时清除与免疫耐受微环境形成密切相关。Kupffer细胞(KCs)是肝脏内专职吞噬细胞,也是清除凋亡细胞的主要吞噬细胞。既往研究证实,KCs介导的凋亡细胞清除是维持肝脏免疫耐受的重要因素,但KCs是如何介导凋亡细胞及时有效清除及诱导免疫耐受的分子机制仍不清楚。吞噬细胞表面磷脂酰丝氨酸(PtdSer)受体识别PtdSer是凋亡细胞吞噬过程中的关键步骤。新近发现PtdSer受体—清道夫受体家族F类成员1(SCARFI)在调控凋亡细胞清除过程中发挥着关键作用,且其调节作用强于既往发现的PtdSer受体。但相关研究主要集中在自身免疫性疾病方面,尚未涉及移植领域,更未涉及KCs。因此,探讨KCs介导的凋亡细胞吞噬清除在诱导肝移植免疫耐受中的作用及其具体机制,能够为防治肝移植后AcR及诱导免疫耐受提供新策略。第一部分SCARF1表达变化对Kupffer细胞免疫功能调控的作用研究目的:通过抑制或上调KCs中SCARF 1表达,观察SCARF 1表达变化对KCs吞噬功能以及细胞表型改变的影响以及机制。方法:(1)按照VI型胶原酶消化、梯度离心、选择性贴壁的步骤分离、培养大鼠KCs,并通过吞墨实验鉴定其吞噬功能;(2)将成功分离、鉴定后的KCs分为4组:SCARF1过表达组(AdV-SCARF1 group);过表达对照组(Ctrl-AdV group);SCARF1 抑制组(shRNA-SCARF1 group);抑制对照组(Ctrl-shRNA group),分别转染携带 AdV-SCARF1、Ctrl-AdV、shRNA-SCRAF1、Ctrl-shRNA基因的慢病毒;(3)运用免疫荧光检验病毒转染效率;(4)运用RT-PCR和Westren blot检测转染后各组KCs中SCRAF1转录和表达情况;(5)运用紫外光照射法,制备早期凋亡T细胞,并与转染后的各组KCs共培养;(6)运用免疫荧光检测各组KCs吞噬凋亡T细胞的情况;(7)运用流式细胞术检测细胞上清液中剩余凋亡T细胞数量;(8)运用流式细胞术检测各组M2型KCs细胞数量及共刺激分子CD86表达情况;(9)运用ELISA和RT-PCR检测各组KCs上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10以及TGF-β的转录和表达水平;(10)运用Western blot和免疫荧光检测各组KCs内JAK、STAT3以及磷酸化蛋白表达水平;(11)给予细胞松弛素B阻断KCs吞噬功能后,运用流式细胞术检测CD206阳性的KCs数量,运用ELISA和RT-PCR检测上清液中细胞因子的表达和转录,运用Western blot检测SCARF1、p-JAK、p-STAT3的表达。结果:(1)KCs形态正常、生长状况良好、贴壁情况良好,吞墨实验证明其具有正常的吞噬功能;(2)免疫荧光显示,转染48h后KCs中绿色荧光到达高峰;(3)Western blot和RT-PCR检测结果显示,AdV-SCRAF1组内SCARF1蛋白表达显着高Ctrl-AdV组,shRNA-SCARF1组内SCARF1蛋白显着低于shRNA-Ctrl组;而RT-PCR检测结果呈现相同趋势;(4)免疫荧光结果显示,AdV-SCRAF1组内PI阳性KCs数量显着高于Ctrl-AdV组,shRNA-SCARF1组内PI阳性KCs数量显着低于shRNA-Ctrl组;而流式细胞术结果显示,AdV-SCRAF1组内剩余凋亡T细胞数量显着低于Ctrl-AdV组,shRNA-SCARF1组内剩余凋亡T细胞数量显着高于shRNA-Ctrl组;(5)流式细胞术检测结果显示,AdV-SCRAF1组内M2 型 KCs 显着高于 Ctrl-AdV 组,shRNA-SCARFl 组内 M2 型 KCs 比例显着低于shRNA-Ctrl组;而共刺激分子CD86表达情况在AdV-SCRAF1组明显低于Ctrl-AdV组,在shRNA-SCARF1明显高于shRNA-Ctrl 组;(6)ELISA 和 RT-PCR 检测结果显示,AdV-SCRAF1组内IL-1 β、IL-6、TNF-α表达和转录水平显著低于Ctrl-AdV组,而IL-10、TGF-β表达和转录水平显著高于Ctrl-AdV组,shRNA-SCARF1组内 IL-1 β、IL-6、TNF-α 显着高于 shRNA-Ctrl 组,而 IL-10、TGF-β表达和转录水平显著低于Ctrl-AdV组;(7)Western blot检测结果显示,AdV-SCRAFl 组内 SCARF1、p-JAK、p-STAT3 表达显着高于Ctrl-AdV 组,shRNA-SCARF1 组内 SCARF1、p-JAK、p-STAT3 表达显着低于shRNA-Ctrl组;(8)AdV-SCRAF1组阻断KCs吞噬功能后,CD206阳性的KCs数量显着低于AdV-SCRAF1组;IL-1β TNF-α、IFN-丫的表达和转录显着高于AdV-SCRAF1,IL-10、TGF-β的表达和转录显著低于AdV-SCRAF1组;SCARF1、p-JAK、p-STAT3的表达也显着低于AdV-SCRAF1。结论:(1)过表达KCs内SCARFI可显着增加KCs对凋亡T细胞的吞噬清除;(2)过表达KCs中SCARFI可激活JAK/STAT3磷酸化信号通路,诱导KCs向M2型极化。(3)过表达KCs内SCARF1可减少KCs内IL-1 β、IL-6、TNF-α等促炎症因子的转录和表达水平,增加IL-10、TGF-β等抑炎症因子转录和表达水平。第二部分KCs中SCARF1表达变化在大鼠肝移植免疫耐受中的作用研究目的:经门静脉灌注转染AdV-SCARF1或SCARF1-shRNA及其对照的慢性毒,观察KCs中SCARF1表达变化在肝移植后免疫耐受中的作用机制。方法:(1)采用改良后的“双袖套法”建立Lewis→BN大鼠肝移植急性排斥模型;(2)受体随机分为3组(n=20只/组):SCARF1过表达组(AdV-SCARF1 group);SCARF1 抑制组(shRNA-SCARF1 group);对照组(Ctr1 group);(3)每组随机选择10只大鼠,观察各组大鼠平均生存时间和生存率,收集另外10只大鼠肝脏和血液标本用于后续实验;(4)运用全自动生化仪检测各组大鼠血清ALT、AST、TBIL水平,评估各组大鼠肝功能改变;(5)运用组织病理学检测各组大鼠肝组织病理损伤程度;(6)运用TUNEL实验检测各组大鼠肝组织内凋亡细胞清除程度;(7)运用免疫组化检测各组大鼠肝组织内M2型KCs数量;(8)运用ELISA检测各组大鼠血清中IL-1 β、IL-6、TNF-α、IL-10以及TGF-β的表达水平;(9)运用Western blot检测各组大鼠肝组织内JAK、STAT3以及磷酸化蛋白表达水平。结果:(1)AdV-SCARF1组受体大鼠平均生存时间和生存率较其余两组显着提高;(2)AdV-SCARF1组受体大鼠血清AST、ALT、TBIL水平较其余两组显着下降;(3)组织病理学检查结果显示,AdV-SCARF1组受体大鼠肝组织急性排斥表现程度较其余两组显着减轻,RAI评分也显着低于其余两组。(4)TUNEL实验结果提示,AdV-SCARF1组受体大鼠肝组织内凋亡细胞数量较其余两组显着减少;(5)免疫组化结果提示,AdV-SCARF1组受体大鼠肝组织M2型KCs数量较其余两组显着增高;(6)ELISA检测结果提示,AdV-SCARF1组受体大鼠血清内IL-1 β、IL-6、TNF-α表达水平较其余两组显著降低,而IL-10、TGF-β表达水平较其余两组显著显著增加;(7)Western blot实验结果提示,AdV-SCARF1组受体大鼠肝组织内SCARF1、p-JAK、p-STAT3表达显着高于其余两组。结论:(1)过表达KCs内SCARF 1显着延长了大鼠肝移植急性排斥模型平均生存时间,提高了大鼠肝移植急性排斥模型生存率;(2)过表达KCs内SCARF1显着减轻了大鼠肝移植急性排斥模型肝组织病理和肝功能损害(3)过表达KCs内SCARF1显着增加了移植肝组织内KCs对凋亡细胞的清除;(4)过表达KCs内SCARF1显着增加了移植肝组织内M2型KCs数量,减少了血清内IL-1 β、IL-6、TNF-α等促炎症因子的表达,增加了血清内IL-10、TGF-β等抑炎症因子的表达;(5)过表达移植肝脏KCs内SCARF1诱导肝移植免疫耐受的主要机制可能为JAK/STAT3信号通路的磷酸化激活。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
罗德[8]（2019）在《右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其机制研究》一文中研究指出第一部分大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型的建立情况目的:学习大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型的建立方法,为研究肝移植术后胆道缺血再灌注损伤奠定模型基础。方法:SPF级、雄性SD大鼠50只,学习过程分为两个阶段:第一阶段20只,第二阶段30只。分析手术成功率,24h大鼠存活率及建模失败原因。结果:第一阶段手术成功率70%,24h存活率60%;第二阶段手术成功率93.3%,24h存活率90%。其中建模失败的主要原因有出血、血管缝合失败、麻醉意外、气胸。结论:建立大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型,需要熟练的显微操作技术,减少各种并发症的发生、提高手术成功率,才能获得稳定的动物模型。第二部分右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其机制目的:探讨右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其可能的机制,为肝移植术后胆道并发症的治疗提供新思路。方法:SPF级、雄性SD大鼠128只,随机分成4组,假手术组(Sham)、假手术+右美托咪定预处理组(Sham+Dex)、胆道缺血再灌注组(IRI)和缺血再灌注+右美托咪定预处理组(IRI+Dex),每组32只。Sham+Dex组和IRI+Dex组于术前30min经腹腔注射右美托咪定100ug/Kg(右美托咪定浓度10ug/ml),Sham组和IRI组注射等量的生理盐水。手术方式:Sham和Sham+Dex组开腹后离断肝周韧带,游离肝门,结扎左膈下静脉及右肾上腺静脉;IRI组和IRI+Dex组行自体肝移植胆道缺血再灌注操作,均经历15min冷灌注时间,25min无肝期,胆道缺血时间为1h。再灌注后3、6、12、24h各时间点每组处死8只大鼠。生化法测定各时间点血清谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)和直接胆红素(DBIL)浓度。取24h点肝内外胆管进行组织病理学检查并对胆道损伤程度进行评分。取24h点胆总管组织测定超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平。酶联免疫法测定24h点血液标本炎症因子:TNF-α及IL-10水平。Tunel法测定24h点胆管细胞凋亡情况。Western blot法检测各组24h点肝外胆管组织GRP78、p-PERK、p-e IF2α、CHOP和cleaved-Caspase 3蛋白表达量。结果:1.与Sham组和Sham+Dex组相比,IRI组血清ALT、ALP、DBIL及病理评分明显增加;IRI+Dex组较IRI组血清ALT、ALP、DBIL及病理评分明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.IRI组TNF-α水平明显高于Sham组和Sham+Dex组,IL-10水平明显低于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组TNF-α水平下降,IL-10水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.IRI组MDA水平明显高于Sham组和Sham+Dex组,SOD水平明显低于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组SOD水平升高,MDA水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4.IRI组凋亡指数明显高于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组凋亡指数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5.IRI组GRP78、p-PERK、p-e IF2α、CHOP以及cleaved-Caspase 3表达量明显高于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组GRP78、p-PERK、p-e IF2α、CHOP以及cleaved-Caspase 3表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.右美托咪定能通过减轻炎症反应、氧化应激水平及胆管细胞凋亡实现对移植肝胆道缺血再灌注损伤的保护作用。2.右美托咪定可能通过PERK-e IF2α-CHOP凋亡信号通路实现对胆道缺血再灌注损伤的保护作用。(本文来源于《西南医科大学》期刊2019-05-01）
于杨[9]（2019）在《NLRP3受体阻滞剂MCC950对大鼠肝移植缺血再灌注损伤保护作用及其在猪DCD肝脏低温机械灌注中的应用》一文中研究指出目的:肝脏移植是各类终末期肝脏疾病唯一有效的治疗手段。然而,供体器官的短缺严重制约着肝移植手术的开展,每年有大量患者在等待供体的过程中死亡。为了解决供体器官短缺的问题,增加供体器官数量,许多肝移植中心开始关注并使用心脏死亡供体(Donation after cardiac death,DCD)。然而与脑死亡供体(Donation after brain death,DBD)相比,DCD在器官获取之前经历了额外的热缺血阶段,移植后会发生更为严重的缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion?injury,IRI),因此DCD受者术后发生诸如:移植物原发性无功能(primary non-function,PNF)以及缺血相关胆道疾病等严重并发症的风险更高。为了更好的利用DCD,如何对DCD进行保存和修复成为肝移植外科新兴的热点问题,并且有重要的意义。在肝脏移植的过程当中,供体器官难以避免的会经历缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion?injury,IRI),而严重的IRI被认为是引起移植术后移植物丧失的主要原因。对于肝脏移植而言,IRI的机制十分复杂,尚未被完全揭示,已知的主要机制包括:氧、氮自由基激活,细胞内钙离子超载,酸中毒,能量代谢障碍,炎性反应激活等。近年来有多篇研究表明,在肝脏移植过程中存在着多种炎性小体的激活,并与肝脏损伤的关系密切,但其具体的致伤机制尚不完全清楚。炎性小体是细胞内一种由多种蛋白质组成的复合体,其分类一般根据其包含的受体蛋白的类型进行划分,具有代表性的有:含有NOD样受体蛋白的NLRP家族炎性小体以及含有HIN200蛋白受体的AIM2炎性小体。NLRP3炎性小体是NLRP炎性小体家族中被研究的最为深入和广泛的一员,目前已经证明NLRP3炎性小体在多种自身免疫性疾病以及慢性炎症中都发挥着重要的作用,其已被广泛认可的作用机制是促进白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的成熟。同时已有研究证实,肝脏各类细胞内,在肝脏移植过程中尤其是移植术后都存在明显的NLRP3炎性小体激活并发挥损伤作用,但是其具体的致伤机制尚无明确完整的报道,有待深入研究。有报道证实,在冠心病动物模型中使用选择性的NLRP3炎性小体抑制剂MCC950治疗,可以明显改善冠心病动物的预后。受该实验结果的启发,NLRP3炎性小体是否可以作为治疗靶点,减轻肝脏IRI,从而改善DCD肝脏移植的预后具有重要的研究意义。低温机械灌注(hypothermic machine perfusion,HMP),是一种新型的肝脏保存技术,并认为可以部分修复损伤的DCD器官,改善DCD受者预后。因此HMP有取代以往传统冷保存(static cold storage,SCS)成为DCD供肝首选保存方式的趋势。但是HMP具体的保护机制尚不完全明确,HMP所采用的实施条件及参数,保存液的成分以及保存液添加剂的选用尚存在较大争议,需要大量的实验进行探索及验证。结合NLRP3炎性小体在肝脏IRI中的重要作用,为了推动HMP技术的发展,NLRP3炎性小体抑制剂MCC950是否适合作为灌注液添加剂加入到HMP的灌注液当中,从而提高HMP的保存效果具有重要的研究价值。因此,揭示NLRP3炎性小体在肝脏IRI过程中的损伤机制,并且研究NLRP3炎性小体是否可以作为治疗靶点,提高HMP这一新型技术对于DCD供肝的保存效果,是本研究的目的。研究方法:建立大鼠及小型猪原位肝脏移植模型:大鼠采用SD大鼠磁环双袖套法建立原位DCD肝移植模型,小型猪模型采用巴马小型猪DCD肝移植模型,供器官采用HMP进行保存。将SD大鼠随机分成四组:假手术组,肝移植组,MCC950组,IL-1Ra组,大鼠供肝热缺血开始前10min,MCC950组供体静脉注射MCC950,IL-1Ra组应用天然白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)拮抗剂IL-1Ra,MCC950组以及IL-1Ra组在供肝复灌流后分别静脉注射对应药物。术后根据肝脏酶学指标变化、HE染色、各炎性因子的表达情况以及TUNEL染色,评估肝组织IRI情况。并利用Western blot检测各组NLRP3炎性小体通路以及各凋亡相关蛋白及凋亡通路的表达情况。采用猪肝移植模型,结合低温机械灌注和MCC950。手术组分3组(每组6对),对照组(供肝采用常规HMP保存),术后组(供肝采用常规HMP保存并在单纯术后应用MCC950),灌注+术后组(供肝采用加入MCC950的灌注液保存,并在术后应用MCC950),术后根据肝脏酶学指标变化、HE染色、各炎性因子的表达情况以及TUNEL染色,评估肝组织IRI情况,并用MEAF评分预测受体长期预后。验证MCC950作为灌注液添加剂应用于HMP在大动物模型上的保护作用,判断是否可以转化为临床应用。结果:在大鼠及小型猪肝移植过程中,均有NLRP3炎性小体的激活,发挥损伤作用。大鼠DCD供肝热缺血前及肝脏再灌注后应用MCC950对于肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,主要表现为MCC950组相比肝移植组肝脏酶学指标降低,IL-1β血清含量下降,HE染色损伤评分降低,凋亡减少。并且,MCC950对于肝脏缺血再灌注损伤的保护作用明显优于IL-1Ra,尤其是在减少肝细胞凋亡方面,表现为MCC950组术后肝细胞凋亡显着少于IL-1Ra组。检测凋亡相关蛋白发现,MCC950组相比IL-1Ra组线粒体凋亡相关蛋白细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)以及活化的半胱天冬酶3(Cleaved caspase 3,Cleaved CASP 3)细胞质内含量明显减少。进一步检测线粒体凋亡通路上游蛋白,发现活化Bid蛋白含量明显减少。在小型猪肝移植过程中,在低温机械灌注肝脏保存的灌注液中加入MCC950并在术后重复给药,其减轻IRI的效果优于普通低温机械灌注以及单纯术后应用MCC950。表现为:灌注+术后组相比另外两组肝脏酶学指标降低,IL-1β及TNF-α等促炎因子血清含量下降,HE染色损伤评分降低,凋亡减少。结论:大鼠DCD供肝缺血再灌注过程中,存在着NLRP3炎性小体激活,并发挥重要的损伤作用。其损伤机制除了经典的促进促炎因子IL-1β成熟,促进炎症反应外,还可以通过激活bid/tbid-Cyt C凋亡通路,引起肝细胞凋亡,从而引起一定程度的肝细胞损伤。在大鼠DCD供肝获取前,供体使用MCC950并于再灌注后重复用药可以有效抑制再灌注后NLRP3炎性小体激活,从而保护供肝,减轻IRI。为了更好的进行临床转化,将MCC950加入到机械灌注保存液当中并于术后重复用药,同样可以抑制NLRP3炎性小体激活,其效果优于单独术后用药。灌注液中加入MCC950提高了HMP对于DCD肝脏的修复效果,联合术后使用可以改善DCD受体预后。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-03-01）
成名翔,李金政,陈勇,曹丁,龚建平[10]（2019）在《VEGF-C抑制Kupffer细胞激活减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤》一文中研究指出目的阐明血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3, VEGFR-3)/血管内皮生长因子-c (vascular endothelial growth factor-c, VEGF-C)信号能否抑制Kupffer细胞(KCs)活化并减轻移植肝脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury, IRI)。方法建立Lewis-Lewis大鼠肝移植模型,分为VEGF-C组(6对,在冷保存期经门静脉灌注VEGF-C)、对照组(6对,灌注等体积UW液)、假手术组(6只)。术后24 h处死动物,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、炎症因子水平,并进行病理学分析。分离KCs,RT-PCR检测VEGFR-3及极化特异性标记基因水平,EMSA检测NF-κB转录活性,Western blot检测细胞因子信号传导抑制因子1 (suppressor of cytokine signaling 1, SOCS1)和磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphorylated glycogen synthase kinase 3β, p-GSK3β)的表达。结果 VEGF-C组中ALT和TBIL水平、肝脏损伤程度、促炎因子水平均较对照组降低(P<0.05),而IL-10含量增加(P<0.05)。VEGF-C组和对照组KCs中VEGFR-3的mRNA水平明显高于假手术组(P<0.05)。VEGF-C组KCs中M1型基因表达、NF-κB活性较对照组明显降低(P<0.05),而M2型基因水平及SOCS1/p-GSK3β的表达明显增高(P<0.05)。结论 VEGF-C通过抑制炎症反应和调节KCs极化从而减轻移植肝脏IRI。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2019年07期）
大鼠肝移植论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过移植大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)治疗肝纤维化大鼠,并评价其疗效。方法通过全骨髓贴壁法分离培养纯化大鼠BMSC,用流式细胞仪对第3代BMSC进行表面抗原鉴定。选取清洁雄性SD大鼠20只,利用四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl_4)皮下注射构建大鼠肝纤维化模型,将肝纤维化大鼠随机分为BMSC组、PBS组,每组10只;分别通过尾静脉注射,予1 mL细胞浓度为1×10~6个/mL的BMSC细胞悬液、1mL PBS溶液,另取6只健康雄性SD大鼠作为空白对照组;移植后第5周处死各组大鼠,采集血液检测大鼠肝功;取肝脏组织切片进行HE、Masson染色,观测大鼠肝细胞组织损伤及纤维化程度,利用Image J软件计算肝脏胶原容积分数(Collagen Volume Fraction,CVF);通过qRT-PCR检测各组大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果(1)通过流式细胞术鉴定BMSC表面抗原,CD29、CD90高表达,CD45低表达。(2)与PBS组比较,BMSC组大鼠肝脏肝小叶网状结构较完整,CVF降低且Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少(P<0. 05)。(3)与PBS组相比,BMSC组大鼠肝功能改善,且差异具有统计学学意义(P<0. 05)。结论同种异体移植BMSC可以有效减少肝脏胶原沉积,改善肝纤维化大鼠肝脏功能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大鼠肝移植论文参考文献
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[8].罗德.右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其机制研究[D].西南医科大学.2019
[9].于杨.NLRP3受体阻滞剂MCC950对大鼠肝移植缺血再灌注损伤保护作用及其在猪DCD肝脏低温机械灌注中的应用[D].中国医科大学.2019
[10].成名翔,李金政,陈勇,曹丁,龚建平.VEGF-C抑制Kupffer细胞激活减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤[J].第叁军医大学学报.2019