导读:本文包含了重构胚论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:体细胞,重构,转基因,细胞,胚胎,氨基酸,滩羊。
重构胚论文文献综述
杜文敬,李昊,薛超,朴善花,王春生[1]（2018）在《转敲低MSTN基因绵羊重构胚的移植及鉴定》一文中研究指出为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发育至桑椹胚比率(分别为15.6%和33.0%)相比,差异无统计学意义;将重构胚移植23只受体后,获得1只流产胎儿,对其进行PCR鉴定,结果显示MSTN基因干涉序列已整合入流产胎儿的基因组中。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2018年05期）
杨磊[2]（2016）在《H3K27me3及其去甲基化酶KDM6A/B在小鼠核移植重构胚中的作用》一文中研究指出体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer, SCNT)是指将体细胞核注入到去核的卵母细胞质中获得重构胚(Reconstructed embryo),由重构胚最终发育为后代的技术。细胞的重编程能够通过核移植、细胞融合、特定转录因子以及培养条件诱导等方法来实现。但是目前唯一能够诱导细胞重新发育成个体的重编程方法只有体细胞核移植,其他方法只能够在细胞、分子或者生化的水平上产生诱导,并且都存在一些不足之处。但是,自从体细胞核移植技术建立以来,克隆效率一直处于较低的水平,只有很少的重构胚胎能够发育到足月出生,在小鼠中通常只有1-2%的出生率。而且大多数克隆小鼠在出生后不久就会死亡。成功出生的克隆小鼠也会出现胎盘巨大、胎儿过度生长等异常症状,即所谓的“胎儿巨大症”。造成这一现象的主要原因是供体细胞核不能够被完全的重编程(Reprogramming)所致。重编程主要指的是表观遗传修饰(Epigenetic modification)的擦除与重建,主要包括DNA的甲基化、组蛋白的乙酰化、基因组印记的重建、x染色体的复活与失活以及端粒长度的再延伸等修饰的动态变化。H3K27me3组蛋白去甲基化酶KDM6A/B (Lysine specific demethylase 6A/B)发现于2007年,与之相关的研究主要集中在去甲基化的生化机理方面,研究KDM6A/B在核移植重构胚发育中的作用还未见报道。在本研究中,首先我们建立了一套可行的小鼠克隆技术方案。利用卵丘细胞、胎儿的成纤维细胞和胚胎干细胞等3种细胞构建了重构胚,比较了这3种重构胚在不同激活液中的激活效率、不同培养液中的发育效率和不同胚胎移植方法的妊娠效率等。结果表明,1)Ca2+-free KSOM激活液是通用的高效激活液,激活效率在93.5%左右；2) KSOM-AA培养液适合于卵丘和胚胎干细胞重构胚的体外培养,而胎儿成纤维重构胚的最佳培养液为aMEM培养液；3)当重构胚体外发育至2-细胞时期,经输卵管双侧移植,每侧移植15枚胚胎可高效获得核移植动物。其次,我们对小鼠孤雌不同时期的胚胎进行H3K27me3修饰情况进行检测,在小鼠8-细胞和桑椹胚中,检测不到H3K27me3的修饰；在着床前胚胎中,KDM6A、KDM6B表达量很高,但8-细胞时期胚胎中检测不到KDM6A的蛋白；在着床前胚胎中,KDM6A KDM6B在mRNA及蛋白质水平上存在着功能代偿现象；降低KDM6B的表达量,有助于提高胚胎的囊胚率和囊胚质量(95.1%vs.84.3%,P<0.05)。最后,通过干扰KDM6B提高了核移植胚胎干细胞的建系效率,而且得到的si6B-ES的多能性明显要好于野生型ES细胞。通过以上的优化,最终将克隆小鼠的出生率提高近6倍。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2016-06-01）
李勇,程龙,孙毅,何玉龙,杨易[3]（2015）在《不同方法对滩羊卵母细胞孤雌激活及重构胚发育影响的研究》一文中研究指出旨在探索宁夏滩羊卵母细胞孤雌激活及胚胎培养条件,并建立转Cherry基因滩羊体细胞重构胚的融合与体外培养体系。试验分析了3种激活方法即电激活、Ionomycin结合6-DMAP与电激活结合6-DMAP对成熟的滩羊卵母细胞激活的影响,以及3种胚胎培养液mSOFaa、M16和KSOM的培养筛选,并优化了滩羊体细胞重构胚的融合与体外培养条件。结果表明:在卵母细胞孤雌激活中,最适电压为1 600V/cm,获得卵裂率和囊胚率分别为58.5%和19.5%;5μmol离子霉素结合2 mmol 6-DMAP能有效地激活成熟的滩羊卵母细胞,卵裂率为81.0%,囊胚率为26.2%;并发现mSOFaa胚胎培养液的卵裂率和囊胚显着优于M16和KSOM培养液;在转基因重构胚融合中发现在电压1 800V/cm、脉冲时间10μs、脉冲次数2次和间隔时间为1s的条件下,卵裂率和囊胚率为40.0%、21.4%。本试验建立的滩羊孤雌激活和转基因重构胚融合与体外培养体系为宁夏滩羊的分子育种奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2015年09期）
曹慧,李俊杰,苏文龙,温兵强,倪俊卿[4]（2015）在《Scriptaid和TSA对牛体细胞核移植重构胚发育效果的影响》一文中研究指出为探讨一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid处理核移植重构胚时对其发育能力的影响,本研究以牛卵丘细胞为核供体,对获得的核移植重构胚分别用Scriptaid和曲古抑菌素(TSA)处理,统计其胚胎发育效果。结果表明:TSA以0.1μmol/L为宜,与对照组相比,尽管卵裂率无显着性差异(P>0.05),但囊胚发育率显着提高(26.53%vs 18.00%,P<0.05);Scriptaid处理组以0.4μmol/L囊胚发育率最高(27.08%),显着高于对照组(15.56%,P<0.05)。对0.1μmol/L的TSA和0.4μmol/L的Scriptaid处理牛核移植重构胚发育结果进行比较,发现0.4μmol/L的Scriptaid处理组囊胚率(27.18%)显着高于0.1μmol/L的TSA处理组(23.39%,P<0.05)。可见,组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid和TSA处理均可显着提高牛核移植重构胚的囊胚发育率,并且Scriptaid处理效果优于TSA(P<0.05)。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2015年15期）
吕玲燕,陆杏蓉,孙俊铭,潘翠玲,崔奎青[5]（2015）在《不同去核方法对猪手工克隆重构胚发育效果的影响》一文中研究指出为探讨不同去核方法对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响,本研究比较了盲切法,第一极体(Pb1)定位法及脱羰秋水仙碱(DM)辅助去核法3种不同的去核方法的去核效率及HMC胚胎发育的影响。结果表明:第一极体定位法和DM辅助去核法的整体去核效率显着高于盲切法去核法(P<0.05);应用0.4μg/m L DM处理卵母细胞60 min的突起率、整体去核效率显着高于其他浓度和时间处理组(P<0.05);DM辅助去核与pb1定位去核法2种不同去核方法对HMC重构胚的发育效果的影响差异不显着。本研究表明,添加适量的DM可以提高徒手克隆去核效率,且对后期重构胚发育没有显着影响。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2015年09期）
张宝修,尹多,姜园园,孙婧陶,李钟淑[6]（2014）在《亚硒酸钠对鼠胚胎干细胞及奶山羊-鼠异种重构胚发育率的影响》一文中研究指出为了探索亚硒酸钠对小鼠胚胎干细胞和延边奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化损伤的保护能力,以及亚硒酸钠提高小鼠胚胎干细胞和延边奶山羊-鼠异种重构胚发育率的作用,通过MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测在亚硒酸钠处理下,小鼠胚胎干细胞和奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化损伤的增殖能力,并统计重构胚和异种重构胚的发育率。结果显示,经3.5μmol/L亚硒酸钠处理的90.0μmol/L H2O2氧化损伤的小鼠胚胎干细胞的增殖率显着提高。亚硒酸钠处理的小鼠胚胎干细胞重构胚和延边奶山羊-鼠胎儿皮肤成纤维细胞异种重构胚的卵裂率显着高于未经亚硒酸钠处理的胚胎干细胞。表明亚硒酸钠可提高小鼠胚胎干细胞重构胚和延边奶山羊-鼠胎儿皮肤成纤维细胞异种重构胚的发育率。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2014年04期）
谢炳坤,吕玲燕,陆杏蓉,崔奎青,孙俊铭[7]（2014）在《丙戊酸处理对猪手工克隆重构胚体外发育潜能的影响》一文中研究指出为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对猪手工克隆(HMC)胚胎发育潜能的影响,本研究比较了不同浓度(0、25、50、75和100nmol/L)VPA处理猪HMC重构胚对后期胚胎发育率、内细胞团数和组蛋白乙酰化程度的影响。结果表明,50、75nmol/L VPA处理组HMC重构胚的卵裂率和囊胚发育率均显着高于0、25和100nmol/L VPA处理组(P<0.05);与0、25、75和100nmol/L相比,50nmol/L VPA处理组能显着提高囊胚内细胞团细胞数(P<0.05),囊胚阶段VPA处理组的组蛋白H3K14乙酰化(AcH3K14)水平高于空白组和孤雌激活囊胚。因此,应用VPA处理可提高猪HMC重构胚胎分裂率、囊胚率及增加内细胞团细胞数,提高了猪HMC胚胎的体外发育潜能。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2014年05期）
马红,付博,李忠秋,王文涛,刘娣[8]（2014）在《氨基酸对猪卵母细胞成熟及重构胚发育的影响》一文中研究指出本研究旨在对比必需氨基酸和非必需氨基酸对猪卵母细胞体外成熟及重构胚发育的影响。在卵母细胞成熟培养液或重构胚培养液中分别添加1%的必需氨基酸或1%非必需氨基酸或同时添加2种氨基酸,无氨基酸组作为对照,分别统计卵母细胞成熟率和囊胚率。结果表明,在成熟培养液中添加非必需氨基酸组的卵母细胞成熟率为83.0%,显着高于其他各组(P<0.05);而在重构胚培养过程中,与对照组相比,非必需氨基酸组的囊胚率最高为20.3%(P<0.05),另外2组的囊胚率下降(P<0.05)。在卵母细胞成熟过程中添加2类氨基酸均能提高成熟率,但只有非必需氨基酸能够促进重构胚的发育。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2014年06期）
茹李波[9]（2014）在《不同抗氧化剂处理的供核细胞对小鼠体细胞核移植重构胚发育的影响》一文中研究指出体细胞克隆技术在家畜品种改良,药物生产、珍惜物种的保护特别在转基因克隆动物研究与应用方面具有非常重要的的研究价值。小白鼠作为目前研究最为深入,使用最为广泛的体细胞克隆模型,具有繁殖周期短这一其他物种不可比拟的优势,但是其克隆发育率低,仍旧是急需解决的问题。本实验从研究供核细胞的生长特性着手,试图研究抗氧化剂对小鼠胎儿成纤维细胞重构配发育的影响。目的：(1)检测昆明系小白鼠不同传代次数的胎儿成纤维细胞(MEF)的形态特征以及在特定应激条件下的细胞活力；(2)探究不同浓度维生素C (Vitamin C,VC)、维生素E (Vitamin E,VE)、褪黑素(Melatonin,MT)对供核细胞(胎儿成纤维细胞)的活力的影响(3)探究不同浓度维生素C (Vitamin C, VC)、维生素E(Vitamin E, VE)、褪黑素(Melatonin, MT)对经其处理后的供核细胞所构重构胚体外发育情况的影响进而得出各抗氧化剂最佳浓度。方法：(1)体外培养并建立小鼠胎儿成纤维细胞系,对指定代数细胞分别进行冷冻复苏后进行MTT活力测定、绘制生长曲线并与正常传代的细胞进行对比,选出最佳代数小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)作为供核细胞；(2)用不同浓度维生素C (0μM、100μM、150μM、200μM)、维生素E (OμM、25μM、50μM、100μM)、褪黑素(OM、10-8M、10-9M、10-10M)分别处理第1代正常培养与血清饥饿培养的小鼠胎儿成纤维细胞,通过MTT法测定各组活力,并进行比较；(3)用不同浓度抗氧化剂处理后的小鼠胎儿成纤维细胞作为供核细胞,再进行去核注核操作,构成重构胚,用SPSS11.0整理分析重构胚融合率、卵裂率和囊胚率。结果：(1)各代数小鼠胎儿成纤维细胞在形态学上并无明显差异；(2)实验中正常传代的1代、2代、3代、4代小鼠胎儿成纤维细胞活力差异均不显着(P>0.05)；玻璃化冷冻复苏后的1代和2代小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)差异不显着(P>0.05),但均高于3代、4代细胞(P<0.05)；该实验表明随着细胞代数的增加细胞对外界环境的抗性也在随之下降；故选定第1代细胞作为供核细胞；(3)小鼠胎儿成纤维细胞经过10%胎牛血清和不同浓度抗氧化剂培养液培养2天后,添加抗氧化剂的实验组细胞活力均高于对照组,但差异不显着(P>0.05)；而在经过0.5%胎牛血清饥饿处理后,添加抗氧化剂的实验组的细胞活力均显着高于对照组(P<0.05)。这表明血清饥饿诱导处理对供核细胞的正常生长发育带来了负面的影响；抗氧化剂的存在对这一负面的影响有改善和缓解的作用；(4)在添加维生素C实验中,重构胚体外发育融合率方面：叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05),150μM组融合率最高；在卵裂率方面：150μM组高于200μM和100μ M组,差异不显着(P>0.05),但叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05)；在囊胚率方面：150μ M组高于200μ M和100μM组,差异不显着(P>0.05),但叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05)。该实验表明血清饥饿处理过程中外源性添加维生素C的最佳浓度为150μM；(5)在添加维生素E实验中,融合率方面：叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05),实验组中100μM组融合率最高；在卵裂率方面：100μM组高于501μM和150μ M组,差异不显着(P>0.05),但叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05)；在囊胚率方面：100μM组高于50μ M和150μ M组,差异不显着(P>0.05),但叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05)。该实验表明血清饥饿处理过程中外源性添加维生素E的最佳浓度为100μM；(6)在添加褪黑素(MT)实验中,融合率方面：叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05),实验组中100μ M组融合率最高；在卵裂率方面：10-9M组高于10-8M,差异不显着(P>0.05),却显着高于10-10M组(P<0.05),10-8M高于10-10M组差异不显着(P>0.05),而叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05)；在囊胚率方面：10-9M组高于另外两个实验组,差异不显着(P>0.05),但叁个实验组均显着高于对照组(P<0.05)。该实验表明血清饥饿处理过程中外源性添加维生素E的最佳浓度为10-9M。(本文来源于《延边大学》期刊2014-06-04）
张宝修,刘佳丽,孙婧陶,茹李波,李钟淑[10]（2014）在《咖啡因对奶山羊成纤维细胞及奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化性的影响》一文中研究指出近几年来,对于细胞核移植技术,细胞介导转基因技术的探索与发展是社会上研究热点之一。此技术不仅能够精确改良动物的基因型,而且比传统育种方法更为有效。通过同种体细胞核移植已经成功获得了很多转基因动物,但异种核移植胚胎发育率较低。胎儿皮肤成纤维细胞较容易分离及培养,适合用做核移植供体细胞并能够生产出各种转基因动物[1-4],而且也已经构成生产转基因动物应用体系。自由基是机体氧化反应中产生的有害物质,具有强氧化(本文来源于《江苏农业学报》期刊2014年02期）
重构胚论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer, SCNT)是指将体细胞核注入到去核的卵母细胞质中获得重构胚(Reconstructed embryo),由重构胚最终发育为后代的技术。细胞的重编程能够通过核移植、细胞融合、特定转录因子以及培养条件诱导等方法来实现。但是目前唯一能够诱导细胞重新发育成个体的重编程方法只有体细胞核移植,其他方法只能够在细胞、分子或者生化的水平上产生诱导,并且都存在一些不足之处。但是,自从体细胞核移植技术建立以来,克隆效率一直处于较低的水平,只有很少的重构胚胎能够发育到足月出生,在小鼠中通常只有1-2%的出生率。而且大多数克隆小鼠在出生后不久就会死亡。成功出生的克隆小鼠也会出现胎盘巨大、胎儿过度生长等异常症状,即所谓的“胎儿巨大症”。造成这一现象的主要原因是供体细胞核不能够被完全的重编程(Reprogramming)所致。重编程主要指的是表观遗传修饰(Epigenetic modification)的擦除与重建,主要包括DNA的甲基化、组蛋白的乙酰化、基因组印记的重建、x染色体的复活与失活以及端粒长度的再延伸等修饰的动态变化。H3K27me3组蛋白去甲基化酶KDM6A/B (Lysine specific demethylase 6A/B)发现于2007年,与之相关的研究主要集中在去甲基化的生化机理方面,研究KDM6A/B在核移植重构胚发育中的作用还未见报道。在本研究中,首先我们建立了一套可行的小鼠克隆技术方案。利用卵丘细胞、胎儿的成纤维细胞和胚胎干细胞等3种细胞构建了重构胚,比较了这3种重构胚在不同激活液中的激活效率、不同培养液中的发育效率和不同胚胎移植方法的妊娠效率等。结果表明,1)Ca2+-free KSOM激活液是通用的高效激活液,激活效率在93.5%左右；2) KSOM-AA培养液适合于卵丘和胚胎干细胞重构胚的体外培养,而胎儿成纤维重构胚的最佳培养液为aMEM培养液；3)当重构胚体外发育至2-细胞时期,经输卵管双侧移植,每侧移植15枚胚胎可高效获得核移植动物。其次,我们对小鼠孤雌不同时期的胚胎进行H3K27me3修饰情况进行检测,在小鼠8-细胞和桑椹胚中,检测不到H3K27me3的修饰；在着床前胚胎中,KDM6A、KDM6B表达量很高,但8-细胞时期胚胎中检测不到KDM6A的蛋白；在着床前胚胎中,KDM6A KDM6B在mRNA及蛋白质水平上存在着功能代偿现象；降低KDM6B的表达量,有助于提高胚胎的囊胚率和囊胚质量(95.1%vs.84.3%,P<0.05)。最后,通过干扰KDM6B提高了核移植胚胎干细胞的建系效率,而且得到的si6B-ES的多能性明显要好于野生型ES细胞。通过以上的优化,最终将克隆小鼠的出生率提高近6倍。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重构胚论文参考文献
[1].杜文敬,李昊,薛超,朴善花,王春生.转敲低MSTN基因绵羊重构胚的移植及鉴定[J].湖南农业大学学报(自然科学版).2018
[2].杨磊.H3K27me3及其去甲基化酶KDM6A/B在小鼠核移植重构胚中的作用[D].内蒙古大学.2016
[3].李勇,程龙,孙毅,何玉龙,杨易.不同方法对滩羊卵母细胞孤雌激活及重构胚发育影响的研究[J].中国兽医学报.2015
[4].曹慧,李俊杰,苏文龙,温兵强,倪俊卿.Scriptaid和TSA对牛体细胞核移植重构胚发育效果的影响[J].中国畜牧杂志.2015
[5].吕玲燕,陆杏蓉,孙俊铭,潘翠玲,崔奎青.不同去核方法对猪手工克隆重构胚发育效果的影响[J].中国畜牧杂志.2015
[6].张宝修,尹多,姜园园,孙婧陶,李钟淑.亚硒酸钠对鼠胚胎干细胞及奶山羊-鼠异种重构胚发育率的影响[J].江苏农业学报.2014
[7].谢炳坤,吕玲燕,陆杏蓉,崔奎青,孙俊铭.丙戊酸处理对猪手工克隆重构胚体外发育潜能的影响[J].中国畜牧兽医.2014
[8].马红,付博,李忠秋,王文涛,刘娣.氨基酸对猪卵母细胞成熟及重构胚发育的影响[J].中国兽医学报.2014
[9].茹李波.不同抗氧化剂处理的供核细胞对小鼠体细胞核移植重构胚发育的影响[D].延边大学.2014
[10].张宝修,刘佳丽,孙婧陶,茹李波,李钟淑.咖啡因对奶山羊成纤维细胞及奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化性的影响[J].江苏农业学报.2014
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