高产生物膜乳酸菌的筛选、鉴定及胞外多糖分泌条件的研究

论文摘要

乳酸菌以生物膜的状态存在时可以有效地抵御外界不良环境,从而更好的发挥益生特性。胞外多糖作为生物膜的主要成分,可以提高产品的质地、风味以及粘稠性,所以在食品加工中备受关注。本试验通过筛选得到10株高产生物膜的乳酸菌,将筛选出的10株乳酸菌进行潜在益生特性的研究,筛选得到益生特性较好的乳酸菌RJ2-1-4和TG1-1-10进行胞外多糖的研究,通过对胞外多糖分泌条件的优化得到最佳培养条件。主要结果如下:以发酵乳制品中分离得到的41株乳酸菌为研究对象,采用结晶紫染色法对其生物膜的形成量进行测定,从中筛选出10株高产生物膜的乳酸菌。经16S rRNA基因片段序列分析得出,乳酸菌RM1-1-4、TG1-1-10、RJ2-1-4、TG1-1-11为乳酸片球菌,RJ1-1-4为植物乳杆菌,TG7-1-1为乳酸乳球菌,TG7-1-6为乳酸乳球菌乳脂亚种,RM3-14、RM2-1-5为耐久肠球菌,TG5-1-5为肠膜明串珠菌。乳酸片球菌TG1-1-11、TG1-10、RJ2-1-4、耐久肠球菌RM2-1-5表现出较强的耐酸性,植物乳杆菌RJ1-1-4、乳酸乳球菌TG7-1-1、乳酸乳球菌乳脂亚种TG7-1-6、肠膜明串珠菌TG5-1-5、乳酸片球菌RM1-1-4、耐久肠球菌RM3-1-4表现出较好的耐碱性;胆盐耐受试验结果显示,乳酸片球菌TG1-1-11、TG1-1-10、RJ2-1-4、耐久肠球菌RM2-1-5、RM3-1-4、植物乳杆菌RJ1-1-4具有良好的胆盐耐受特性;人工胃、肠液试验结果显示,乳酸片球菌RJ2-1-4和TG1-1-10表现出较好的耐受特性。以前期试验得到的具有良好益生特性的乳酸片球菌RJ2-1-4和TG1-10为试验菌株,通过对接种量、培养时间、培养基pH值、NaCl浓度的改变,分析得到胞外多糖的变化规律为:RJ2-1-4和TG1-10在接种量分别为3%和1%时,胞外多糖产量达到最大值;随着培养时间（6-36 h）的延长和培养基pH值（1.5-8.5）的增大胞外多糖产量呈先增加后降低的趋势:随着NaCl浓度的增大胞外多糖产量呈现先降低后增加再降低的趋势。最后,对乳酸菌培养基成分进行优化,通过正交试验得出乳酸菌RJ2-1-4产胞外多糖的最佳培养基组合为:葡萄糖为20 g/L,大豆蛋白胨为20 g/L,磷酸氢二钾为8g/L。乳酸菌TG1-1-10产胞外多糖的最佳培养基组合为:葡萄糖为40g/L,大豆蛋白胨为20g/L,磷酸氢二钾为2g/L。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 1 引言
•   1.1 细菌生物膜
•     1.1.1 细菌生物膜的结构及形成过程
•     1.1.2 细菌生物膜形成机制
•     1.1.3 细菌生物膜的研究进展
•     1.1.4 乳酸菌与乳酸菌生物膜
•   1.2 乳酸菌胞外多糖
•     1.2.1 乳酸菌EPS的分类和结构
•     1.2.2 影响乳酸菌EPS合成的因素
•     1.2.3 乳酸菌EPS的功能及应用
•   1.3 研究目的及意义
• 2 材料与方法
•   2.1 试验材料
•     2.1.1 试验菌株
•     2.1.2 培养基及主要试剂的配置
•     2.1.3 主要试剂
•     2.1.4 仪器设备
•   2.2 试验方法
•     2.2.1 高产生物膜乳酸菌的筛选及鉴定
•     2.2.2 高产生物膜乳酸菌潜在益生特性的测定
•     2.2.3 乳酸菌生长曲线的测定
•     2.2.4 乳酸菌EPS的粗提取
•     2.2.5 乳酸菌EPS含量的测定
•     2.2.6 培养条件对乳酸菌EPS形成的影响
•     2.2.7 培养基成分对乳酸菌EPS形成的影响
•     2.2.8 数据处理及分析
• 3 结果与分析
•   3.1 高产生物膜菌株筛选结果
•   3.2 高产生物膜乳酸菌的鉴定
•     3.2.1 乳酸菌16S rDNA扩增结果
•     3.2.2 系统发育树及同源性分析
•   3.3 高产生物膜乳酸菌潜在益生特性的测定
•     3.3.1 乳酸菌对不同初始pH的耐受性
•     3.3.2 乳酸菌对不同浓度胆盐的耐受性
•     3.3.3 模拟人工胃液耐受性试验结果
•     3.3.4 模拟人工肠液耐受性试验结果
•   3.4 乳酸菌生长曲线测定结果
•   3.5 不同培养条件对乳酸菌EPS的影响
•     3.5.1 标准曲线的绘制
•     3.5.2 接种量对乳酸菌EPS形成的影响
•     3.5.3 培养时间对乳酸菌EPS形成的影响
•     3.5.4 初始pH对乳酸菌EPS形成的影响
•     3.5.5 渗透压对乳酸菌EPS形成的影响
•   3.6 不同培养基成分对乳酸菌EPS的影响
•     3.6.1 碳源种类及浓度对乳酸菌EPS的影响
•     3.6.2 氮源种类及浓度对乳酸菌EPS的影响
•     3.6.3 磷酸盐浓度对乳酸菌EPS的影响
•     3.6.4 正交试验对乳酸菌EPS的影响
• 4 讨论
•   4.1 乳酸菌生物膜的形成规律
•   4.2 高产生物膜乳酸菌潜在益生特性的研究
•   4.3 不同培养条件对乳酸菌EPS的影响
•   4.4 不同培养基成分对乳酸菌EPS的影响
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 钟华晨

导师: 贺银凤

关键词: 乳酸菌,生物膜,胞外多糖,培养条件,培养基优化

来源: 内蒙古农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,生物学,轻工业手工业

单位: 内蒙古农业大学

分类号: Q93;TS201.3

DOI: 10.27229/d.cnki.gnmnu.2019.000267

总页数: 73

文件大小: 4414K

下载量: 265