小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立

论文摘要

本研究制备了针对小反刍兽疫PPRV全病毒特异性卵黄抗体,利用PPRV N蛋白特异性单克隆抗体和PPRV IgY为主要材料,建立了PPRV双夹心ELISA检测方法检测小反刍兽疫病毒。用该ELISA方法分别检测小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒、鹿流行性出血病病毒、水泡性口炎病毒、赤羽病病毒、口蹄疫病毒,结果表明该ELISA方法可以特异性检出PPRV而与其他病毒间无交叉。用该ELISA和RT-PCR同时检测162份临床样品,结果表明ELISA的特异性和敏感性分别为99.2%和93.7%,两种方法的符合率为98.1%。该方法的建立为小反刍兽疫病毒的初筛检测及小反刍兽疫流行病学调查提供了经济、快速、有效的方法,适用于设备条件不足的基层实验室。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•     1.1.1 病毒和细胞株
•     1.1.2 实验动物
•     1.1.3 主要试剂及试剂盒
•     1.1.4 主要仪器设备
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的制备
•       1.2.1.1 病毒培养, 纯化, 免疫抗原制备:
•       1.2.1.2 动物免疫:
•       1.2.1.3 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的分离与纯化:
•       1.2.1.4 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的效价测定:
•       1.2.1.5 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的特异性:
•     1.2.2 小反刍兽疫病毒双夹心ELISA方法的建立
•       1.2.2.1 ELISA方法的建立:
•       1.2.2.2 ELISA结果判定标准的确定:
•       1.2.2.3 ELISA方法的特异性:
•       1.2.2.4 临床样品检测:
•       1.2.2.5 重复性试验:
• 2 结果与分析
•   2.1 PPRV特异性IgY的制备
•     2.1.1 病毒培养, 纯化, 免疫抗原制备
•     2.1.2 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的分离与纯化
•     2.1.3 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的效价
•     2.1.4 抗小反刍兽疫病毒特异性IgY抗体的特异性
•   2.2 小反刍兽疫病毒双夹心ELISA方法的建立
•     2.2.1 ELISA结果判定标准的确定
•     2.2.2 ELISA特异性实验结果
•     2.2.3 ELISA重复性实验结果
•     2.2.4 临床样品检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙洁,廖立珊,曾绍英,朱琳,陶虹,林庆燕,黄超华,花群义,杨俊兴

关键词: 小反刍兽疫,卵黄抗体,双夹心

来源: 上海畜牧兽医通讯 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心,深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心

基金: 国家863计划课题(2012AA101301)

分类号: S852.65

DOI: 10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2019.02.002

页码: 7-11

总页数: 5

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