导读:本文包含了瞬时表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:香树素合成酶(AS),枇杷,悬浮细胞,瞬时表达
瞬时表达载体论文文献综述
李惠华,曾碧玉,王伟,常强,苏明华[1]（2019）在《枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位》一文中研究指出枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环叁萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase, AS)是叁萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(p DONR207-AS)为模板,经PCR扩增获得AS基因的正向开放阅读框,经酶切及与载体的连接,成功构建表达载体p BWA(V)HS-AS-GFP-Tnos。以枇杷悬浮细胞(AS分离的同源系统)为受体材料,在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101的介导下进行瞬时表达,通过共转化的GFP在激光共聚焦显微镜下成像,分析AS蛋白的亚细胞定位;采用气相色谱-质谱联合分析AS催化产物。研究结果显示,AS在枇杷悬浮细胞中定位于内质网;枇杷悬浮细胞中AS的催化产物含α-香树素和β-香树素,AS属于多功能酶。本研究可为明确五环叁萜类化合物合成途径以及枇杷悬浮细胞的转基因应用提供参考依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红[2]（2019）在《从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达》一文中研究指出为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2019年07期）
岳敏,宋亚楠,安茜,赵熙宁,薛金爱[3]（2019）在《猫爪草酰基-Δ9脱氢酶基因植物表达载体的构建及瞬时表达》一文中研究指出猫爪草种子能高水平积累棕榈油酸(C16∶1Δ9)和顺式-11-十八碳烯酸(C18∶1Δ11)等具有食品、医药和工业应用价值的ω-7脂肪酸(ω-7 FA)。酰基-Δ9脱氢酶(acyl-Δ9 desaturase,Δ9D)底物特异性决定着植物细胞合成单烯脂肪酸的种类。为检测来自猫爪草的酰基-ACP-Δ9脱氢酶(MucACP-Δ9D)是否可异源表达用于在其他植物合成ω-7 FA,文章构建了MucACP-Δ9D基因植物表达载体,并通过农杆菌介导在本氏烟草叶组织瞬时表达。用气相色谱(GC)检测烟叶脂肪酸成分,结果显示,野生型及空载体对照的ω-7FA总含量仅为0.4%;然而,MucACP-Δ9D瞬时表达的烟叶组织ω-7 FA总含量提高到14.2%,其中,C16∶1Δ9和C18∶1Δ11含量分别达8.8%和5.4%。研究表明,MucACP-Δ9D可在异源组织催化棕榈油酸合成,可进一步用于其他油料作物的油脂遗传改良,以富集ω-7 FA。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年05期）
刘艳琴,王一,杨静,李成云[4]（2018）在《稻瘟病菌两个效应蛋白基因原核表达和瞬时表达载体构建》一文中研究指出为了研究稻瘟病菌效应蛋白基因功能,本研究构建了稻瘟病菌效应蛋白基因BAS1和BAS4与3×FLAG标签融合的原核表达载体及其与GFP融合的瞬时表达载体。以持有BAS1和BAS4基因的稻瘟病菌株的cDNA为模板,RT-PCR扩增目的基因BAS1和BAS4编码区,选用p3×FLAG-CMV-10为模板扩增3×FLAG基因,分别将BAS1和BAS4与3×FLAG连接到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得原核表达载体p GEX-BAS1-3×FLAG和p GEX-BAS4-3×FLAG,测序结果表明克隆到的BAS1、BAS4和3×FLAG序列及连接方向正确。将构建好的原核表达载体转化到表达感受态细胞Transetta(DE3)中得到转化子,利用IPTG诱导表达原核表达产物,SDS-PAGE电泳结果表明,目的蛋白约为40 kD,与理论值相符。为了进一步研究BAS1和BAS4的亚细胞定位,利用同源重组方法构建了pBWA(V)HS-BAS1-GLosgfph和pBWA(V)HS-BAS4-GLosgfp瞬时表达载体。本研究所构建的BAS1和BAS4与3×FLAG融合的原核表达载体及瞬时表达载体将为进一步研究BAS1和BAS4功能及定位提供一定的实验基础。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年09期）
罗雯,艾佐佐,刘艳梅,刘旺喜[5]（2018）在《EV71抗原双元植物表达载体构建及生菜瞬时表达》一文中研究指出[目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达。[方法]根据Gen Bank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体p CAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404。农杆菌注射渗透法对意大利生菜叶片进行遗传转化,固相酶联斑点实验和免疫印迹实验检测感染叶片总蛋白提取物,分析外源基因表达效果。[结果]限制酶切验证获得共表达植物表达载体p CAMBIA2301-P1-3CD。感染叶片的外源基因表达产物中具有抗VP1抗体结合活性的蛋白,其分子量约39 k Da。[结论]成功构建EV71 3CD和P1基因双元植物表达载体,其在意大利生菜叶片中的表达产物具有免疫反应性。为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。(本文来源于《生物技术》期刊2018年01期）
常英英,梁立雄,高亚南,王颜波,丁昌俊[6]（2016）在《去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达》一文中研究指出植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子,参与基因的表达调控,与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因,采用"酶切—连接"的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-ROS1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明:17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-ROS1中目的基因的表达,17-β-雌二醇最佳诱导浓度为50~100μmol·L~(-1);随着诱导时间的延长,目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高。该诱导表达载体的构建为研究植物抗逆胁迫过程中的表观遗传机制奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2016年05期）
魏琦超,张锐,孟志刚,孙国清,周焘[7]（2016）在《人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因植物表达载体的构建及瞬时表达》一文中研究指出人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体具有特异性诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒性的特点,被认为是肿瘤凋亡疗法较有希望的候选药物。植物生物反应器在药用蛋白质生产方面具备较大优势。构建了可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的植物表达载体,进行本氏烟(Nicotiana benthamiana)瞬时表达,并对目的蛋白的体外活性进行检测。结果显示,本氏烟叶片中目的蛋白平均表达量为68.60 pg/mg TSP;在浓度为200 pg/m L时,对NCI-H460细胞株的抑制率为28.75%。研究表明,经密码子优化的编码基因能够在受体植物中表达出有活性的目的蛋白,为开展目的基因的稳定转化工作奠定了基础。(本文来源于《中国农业科技导报》期刊2016年01期）
常英英,高亚南,梁立雄,丁昌俊,苏晓华[8]（2016）在《AtDME1化学诱导表达载体的构建及其瞬时表达》一文中研究指出以拟南芥去甲基化转移酶基因DME1为目的基因,采用酶切、连接和重组反应的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-DME1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明,较低浓度的17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-DME1中目的基因的表达,诱导处理后目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高,之后缓慢下降。该载体的成功构建为深入研究DNA去甲基化与植物的生殖发育调控奠定了基础。(本文来源于《东北林业大学学报》期刊2016年02期）
孙平杰,宋建臣,李海峰,许应天[9]（2015）在《瑟氏泰勒虫p23与牛IL-18复合基因真核表达载体的构建与瞬时表达》一文中研究指出为构建瑟氏泰勒虫p23-IL-18复合基因真核表达质粒,以pMD-18T-p23和pMD-18T-IL-18克隆质粒为模板,应用重组PCR技术得到瑟氏泰勒虫p23-IL-18复合基因,将其先克隆到pMD-18-T载体,再亚克隆到真核表达载体pVAXⅠ中,得到重组质粒pVAXI-P23-IL-18。对该重组质粒进行PCR、酶切鉴定及测序后,采用脂质体法将其转染到BHK-21细胞,用RT-PCR和IFA进行鉴定。结果表明,瑟氏泰勒虫p23-IL-18复合基因真核表达质粒pVAXIP23-IL-18构建成功,可在BHK-21细胞中表达。本试验为p23-IL-18复合基因的免疫学研究奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2015年06期）
周潇,姜航,屈汉金,邓子牛,A·Gentile[10]（2015）在《柑橘冷诱导基因及其启动子表达载体构建与瞬时表达分析》一文中研究指出【目的】以YFP为报告基因,构建柑橘冷诱导基因及其启动子的植物表达载体。【方法】克隆获得枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8,柠檬中同源基因Clcor8及其启动子p Clcor8;双酶切含启动子的克隆载体和植物表达原始载体p1D4,连接获得含启动子的中间载体;再双酶切含冷诱导基因的克隆载体和中间载体,连接后获得重组质粒;通过冻融法将重组质粒导入农杆菌EHA105中。【结果】构建了p1D4/p Ptcor8-Ptcor8::YFP,p1D4/p Ptcor8-Clcor8::YFP和p1D4/p Clcor8-Ptcor8::YFP 3个融合表达载体,瞬时表达发现3个融合基因均可在冰糖橙叶片中表达。【结论】3个融合表达载体的成功构建为下一步转化柠檬,分析枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8的功能奠定了基础。(本文来源于《果树学报》期刊2015年03期）
瞬时表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
瞬时表达载体论文参考文献
[1].李惠华,曾碧玉,王伟,常强,苏明华.枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位[J].农业生物技术学报.2019
[2].田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红.从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达[J].中国畜牧杂志.2019
[3].岳敏,宋亚楠,安茜,赵熙宁,薛金爱.猫爪草酰基-Δ9脱氢酶基因植物表达载体的构建及瞬时表达[J].山西农业科学.2019
[4].刘艳琴,王一,杨静,李成云.稻瘟病菌两个效应蛋白基因原核表达和瞬时表达载体构建[J].分子植物育种.2018
[5].罗雯,艾佐佐,刘艳梅,刘旺喜.EV71抗原双元植物表达载体构建及生菜瞬时表达[J].生物技术.2018
[6].常英英,梁立雄,高亚南,王颜波,丁昌俊.去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达[J].浙江农业学报.2016
[7].魏琦超,张锐,孟志刚,孙国清,周焘.人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因植物表达载体的构建及瞬时表达[J].中国农业科技导报.2016
[8].常英英,高亚南,梁立雄,丁昌俊,苏晓华.AtDME1化学诱导表达载体的构建及其瞬时表达[J].东北林业大学学报.2016
[9].孙平杰,宋建臣,李海峰,许应天.瑟氏泰勒虫p23与牛IL-18复合基因真核表达载体的构建与瞬时表达[J].中国兽医学报.2015
[10].周潇,姜航,屈汉金,邓子牛,A·Gentile.柑橘冷诱导基因及其启动子表达载体构建与瞬时表达分析[J].果树学报.2015
标签：香树素合成酶(AS); 枇杷; 悬浮细胞; 瞬时表达;