导读:本文包含了缺氧预适应论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,损伤,干细胞,心脏,纤维,线粒体,复合体。
缺氧预适应论文文献综述
侯娅,张静,鄢显明,王小博,艾小鹏[1]（2018）在《缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制研究》一文中研究指出目的:研究缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、缺氧组、缺氧预适应组、大花红景天口服液0. 67g/kg组、大花红景天水提物1、2、4 g/kg组。用低压低氧动物舱建立缺氧脑损伤模型,通过常压缺氧耐受实验、Morris水迷宫、TUNEL染色、透射电镜观察CA1区线粒体结构及检测线粒体膜电位(MMP)研究缺氧预适应和大花红景天对海马神经元缺氧损伤的保护作用。结果:与空白组比较,缺氧预适应组和大花红景天1、2和4 g/kg剂量组小鼠耐缺氧存活时间均明显延长。与缺氧组比较,缺氧预适应组和各药物组小鼠定位航行和空间探索能力明显改善。TUNEL结果显示,与空白组比较,缺氧组小鼠CA1区神经元凋亡明显,缺氧预适应组和各药物组可显着抑制神经元凋亡。线粒体形态及膜电位检测显示,与空白组比较,缺氧组小鼠线粒体损伤明显,MMP显着升高,缺氧预适应组和大花红景天1、2和4 g/kg剂量组可显着降低线粒体损伤和MMP。结论:缺氧预适应及大花红景天可通过抑制海马神经元凋亡、维持线粒体形态结构及降低MMP发挥抗缺氧脑保护作用。(本文来源于《中药药理与临床》期刊2018年06期）
金鑫瑶,朱征,陈娜,李娜,曾文赟[2]（2018）在《补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响》一文中研究指出目的观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制。方法复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细胞迁移实验。显微镜下观察并计数迁移至小室膜下层的心脏干细胞数; RT-PCR法检测各组心脏成纤维细胞干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中迁移相关因子SCF、SDF-1的蛋白分泌量。结果对照组、模型组、补阳还五汤组心脏干细胞迁移数呈递增趋势,对照组与模型组比较差异有统计学意义(P<0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(P<0. 05); SCF、SDF-1 mRNA表达在对照组、模型组、补阳还五汤组之间存在下调后上调的变化趋势,模型组与对照组比较差异有统计学意义(均P<0. 05),补阳还五汤与模型组比较差异有统计学意义(均P<0. 05);叁组SCF、SDF-1蛋白分泌变化趋势与RT-PCR结果一致,模型组与对照组比较SCF差异有统计学意义(P<0. 05),SDF-1差异无统计学意义(P>0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(均P<0. 05)。结论补阳还五汤可促进缺氧预适应心脏成纤维细胞诱导的心脏干细胞迁移,其机制可能与上调心脏成纤维细胞迁移相关因子SCF、SDF-1的表达有关。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年19期）
王一婧,袁晓捧,吴旦斌,孙英新,范英昌[3]（2018）在《补阳还五汤干预缺氧预适应成纤维细胞促间充质干细胞迁移的机制》一文中研究指出目的:探讨补阳还五汤干预缺氧预适应心脏成纤维细胞促间充质干细胞迁移的相关机制。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠7 d后,制备补阳还五汤含药血清及空白血清。0.56,1.12,2.25 g·m L~(-1)含药血清干预缺氧预适应的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CFs培养液中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的含量,mRNA及蛋白表达情况,并将补阳还五汤干预缺氧预适应CFs的培养液干预间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)后,检测MSC的细胞迁移能力。结果:与常氧组比较,缺氧可以显着促进CFs分泌HIF-1α,MCP-1及HGF(P<0.01),同时给予缺氧预处理的CFs培养液干预MSC后,HIF-1α,MCP-1及HGF的水平亦显着升高(P<0.01),当给予不同剂量的补阳还五汤含药血清干预后,与缺氧组比较,它们的表达进一步升高(P<0.05,P<0.01);而给予HIF-1α抑制剂YC-1处理后,补阳还五汤各组可升高MCP-1,HGF的表达(P<0.05)。结论:补阳还五汤协同缺氧预适应CFs旁分泌效应能够促进MSC迁移,其可能机制是通过上调HIF-1α的表达,提高迁移因子MCP-1,HGF的表达而实现的。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2018年23期）
唐容,李袁静,高凌云[4]（2018）在《eNOS谷胱甘肽化在缺氧预适应保护人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制》一文中研究指出目的:研究缺氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)保护人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinous endothelial cells,HUVECs)缺氧/复氧损伤的可能机制。方法:将培养的HUVECs分为5组:对照(Control)组、缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,HR)组、HPC组、HR+自由基清除组(HR+EUK134组)、HPC组+自由基处理组(HPC+H_2O_2组)。先将Control组和HR组、HR+EUK134组放在常规孵育箱中,而HPC组和HPC+H_2O_2组放入叁气低氧箱中进行3个10 min的缺氧/复氧小循环,即缺氧预适应,再将HR组、HR+EUK134组与HPC组、HPC+H_2O_2组一起放入叁气低氧箱中进行1 h大缺氧。1 h后,向HPC+H_2O_2组加入H_2O_2(100 mmol/L)、HR+EUK134组加入EUK134(10 mmol/L),然后将4组同时放入常规孵育箱复氧2 h。复氧后检测细胞存活率,测定细胞内还原型谷胱甘肽(reductive glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidative glutathione,GSSG)内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthetase,eNOS)谷胱甘肽化水平、超氧化物阴离子(superoxide anion,O2.)和一氧化氮(nitric oxide,NO)水平以及抗氧化酶过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。结果:与对照组相比,HR组O2.增加(P=0.004),抗氧化酶活性降低(P=0.000),细胞内氧化型谷胱甘肽/还原型谷胱甘肽比例(GSSG/GSH)和eNOS谷胱甘肽化水平(P=0.000)均增加,而NO生成减少(P=0.003)。自由基清除剂EUK134和HPC(P=0.028)均可减少O2.生成,增加SOD(P=0.002)和CAT活性(P=0.003),降低GSSG/GSH和eNOS谷胱甘肽化水平(P=0.001),NO生成增加(P=0.042),高浓度H_2O_2可消除HPC的作用。结论:HPC可提高细胞存活率,恢复内皮细胞eNOS功能活性,其机制可能是通过减轻氧化应激,降低细胞内GSSG/GSH和eNOS谷胱甘肽化水平,促进NO生成而实现。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2018年03期）
刘超,韦苏,张琨玮,祝倩,李烨仪[5]（2018）在《缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用》一文中研究指出目的:分离提取缺氧预适应(HPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌的微囊泡(MVs),探讨HPC-EMVs对正常H9c2心肌细胞的作用和其Caspase 3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用HPC方法诱导HUVECs释放MVs,将其和正常培养的大鼠H9c2心肌细胞孵育,通过MTT法检测细胞存活率和比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;通过Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;比色法测定培养液中Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:HPC模型构建过程中,与缺氧/复氧(H/R)组相比,HPC组细胞存活率显着升高(P<0.01),即成功构建HUVECs的HPC模型;HPC-EMVs处理H9c2细胞结果发现,与对照组H9c2细胞相比,HPC-EMVs 30、60μg/m L组细胞存活率显着降低(P<0.001),且LDH活性和Caspase 3活性显着升高(P<0.01或P<0.001),凋亡细胞量增加,Bcl-2/Bax比值显着降低(P<0.001)。结论:成功采用HPC的方法诱导HUVECs释放MVs,HPC-EMVs通过影响正常H9c2细胞Caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥促凋亡作用。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2018年02期）
徐荣丰[6]（2017）在《缺氧预适应促进心脏祖细胞抗凋亡作用及DNMT1介导的相关机制研究》一文中研究指出第一部分心脏祖细胞的体外分离培养和纯化目的优化培养条件,探索从成年小鼠心脏组织中的分离培养和纯化c-kit(+)心脏祖细胞(cardiac progenitor cells, CPCs)的有效方法。方法严格无菌条件下取2月龄成年C57BL/6小鼠心脏,剪成1mm3大小,经0.1%胶原酶Ⅳ和0.25%胰蛋白酶充分消化后,加入组织块培养基(complete explant medium,CEM)贴壁培养。2周后,Accutase酶轻柔消化心肌组织块周围的“小、圆、亮”细胞,移入心球生长培养基(cardiosphere-growing medium, CGM)继续培养。待扩增培养充分后,采用免疫磁珠筛选法获得纯化的c-kit(+) CPCs,显微镜观察细胞的形态学特点,流式细胞仪分析所得细胞表面标记c-kit、Scal-1、CD34、CD45的表达。结果心肌组织经充分消化贴壁培养后,约1周可见组织块周围出现大量成纤维样细胞,约2周可见大量“小、圆、亮”细胞附着在成纤维样细胞层上。显微镜下可见经磁珠筛选后的细胞呈克隆样扩增。流式细胞学分析显示筛选后的CPCs表面标记c-kit阳性率达80.17%±5.32%,Sca1-1阳性率为40.37%±4.61%,而CD34阳性率为1.77%±0.08%,CD45阳性率为1.22%±0.21%。结论通过酶消化成年小鼠的心肌组织及磁珠分选纯化,可以方便、稳定的获得高纯度的c-kit(+)CPCs,满足了后续实验的细胞需求。第二部分缺氧预适应对心脏祖细胞抗凋亡作用的影响目的观察缺氧预适应对c-kit(+)CPCs抗凋亡作用的影响,并初步探讨缺氧预适应影响CPCs抗凋亡的可能机制。方法将c-kit(+)CPCs预先置于正常氧(H0)或缺氧环境(0.1%O25%CO294.9%N2)分别培养6小时(H6)后,再置于无糖无血清培养基和缺氧环境下(0.1%O2 5%CO2 94.9%N2)培养24小时(24h),用流式细胞仪Annexin-V/碘化吡啶(PI)双染色法检测细胞凋亡和MTT法分析细胞增殖情况。给予急性心肌梗死模型小鼠心肌内注射经缺氧预适应处理的CPCs,术后7天经胸壁小动物心脏超声检测小鼠心功能,术后28天处死小鼠后取心脏标本行Masson染色观察心脏纤维化面积。用WB (western blot)检测CPCs经缺氧预适应处理后Akt蛋白表达水平。结果缺氧预适应组(H6组)凋亡率(15.05%±1.54%)显着低于正常氧培养组(H0 组)(28.82%±±1.43%)(P<0.05)。其作用被 PI3K 阻断剂 LY294002 阻断(H6+24h+LY 组:凋亡率 31.07±1.44%) (P< 0.01);而H0组加入胰岛素样生长因子-1 (IGF-1,PI3K激动剂)后,其凋亡率显着下降(H0+24h+IGF 组:17.26±2.13%) (P<0.05)。MTT 实验显示 H6 组细胞存活率显着高于HO (P < 0.01)。MTT实验显示缺氧预适应促进CPCs存活的效应,同样可被LY294002阻断,而被IGF-1激活。心脏彩超结果显示,H6组心功能及心脏重构改善,左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)均显着高于H0组和PBS组(P<0.05);而H6组的左室舒张末容积(LVEDD)和左室收缩末容积(LVESD)均显着小于H0组和PBS组(P<0.05)。Masson染色结果表明:H6组小鼠心梗后心脏纤维化面积(29.4%±2.13%)明显低于H0组(40.3%±4.28%)(P<0.05),而H6组和H0组心脏纤维化面积明显低于PBS组(49.2%±5.64%) (P<0.05),说明移植经缺氧预适应处理的CPCs可显着缩小小鼠心梗面积。WB结果显示:H6组磷酸化Akt (p-Akt)表达水平较对照组显着增高(p<0.01); LY294002可阻断其作用,而IGF-1可促进其作用。结论缺氧预适应可以促进CPCs抗凋亡能力,并且这一细胞保护效应可能是经由PI3K/Akt信号通路发挥作用的。第叁部分DNMT1介导的缺氧预适应调控p53的机制研究目的观察缺氧预适应通过PI3K/Akt通路对DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)和p53进行调控的机制,并探讨DNMT1与p53之间的关系。观察DNMT1甲基化催化活性对p53的影响,并进一步在转录水平上明确DNMT1对p53的调控机制。方法将c-kit(+ CPCs预先置于正常氧或缺氧环境(0.1%O2 5%C02 94.9%N2)分别培养6小时后,再置于无糖无血清培养基和缺氧环境下(0.1%O25%CO294.9%N2)培养24小时。采用WB检测CPCs经缺氧预适应处理后Akt、DNMTs和p53蛋白表达变化;采用q-PCR (real-time quantitative PCR)检测DNMTs、p53的mRNA表达水平。用siRNA靶向沉默DNMT1,并用5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-azadc)阻断DNMT1的甲基化催化活性,然后用WB检测p53蛋白的表达。查询p53启动子区0至-2000 bp区域内CpG岛的分布情况,通过亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite genomic sequence, BSP)检测该区域所有CpG岛CpG位点的甲基化状态;克隆p53启动子区+157至-2150 bp基因序列从而构建两种报告基因质粒(野生组p53 promoter和突变组p53 promoter (M)),并采用双荧光素酶实验检验DNMT1对p53的调控;采用ChIP实验检验DNMT1是否与p53启动子区直接结合。结果H6+24h组DNMT1和DNMT3β蛋白表达显著升高(p<0.01),而p53蛋白表达显着下降(p<0.01);LY294002可阻断其作用,而IGF-1可促进其作用。但DNMT3α则在各组间无显著变化(p>0.05)。缺氧预适应显着提高了 DNMT1、DNMT3β的mRNA表达水平(p<0.01),并抑制了 p53 的 mRNA 表达水平(p<0.01 )。DNMT1 被 siRNA 靶向沉默后,p53的表达显着提高(p<0.05);而DNMT1的甲基催化活性被阻断后,p53的表达水平同样有显着性提高(p<0.05);当同时干扰沉默DNMT1和阻断其甲基催化活性,p53表达则被显着激活(p<0.01),与单纯沉默DNMT1或阻断其催化活性相比,p53表达量升高但无统计学差异(p>0.05)。p53启动子区共分布有3个CpG岛,H6+24h组p53启动子区所有3个CpG岛甲基化水平与对照组比较,均未发现有统计学差异(p>0.05);双荧光素酶实验显示,H6+24h组相对荧光强度要显着低于H0+24h组(p<0.01 ),并且其在p53 promoter组要显着低于p53 promoter (M)组(p<0.01); ChIP实验显示,缺氧预适应组可扩增出与DNMT1抗体相结合的染色质片段。结论缺氧预适应可能经由PI3K/Akt信号通路上调DNMT1和DNMT3β、抑制p53的表达,并且p53受DNMT1的反向调控。DNMT1可能不是通过影响p53启动子区甲基化水平,而是作为转录因子直接与p53启动子区特定位点相结合来抑制p53的表达。(本文来源于《东南大学》期刊2017-06-01）
刘超[7]（2017）在《缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的影响》一文中研究指出缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)是威胁人类健康最重要疾病之一,且发病率和死亡率较高。血管内皮功能紊乱作为心肌缺血损伤的起始环节,其与IHD的发生发展密切相关。目前,缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)有望成为缓解心肌缺血损伤的方法,研究发现IPC处理的大鼠循环血中的微囊泡(microvesicels,MVs)含量明显增加,且MVs可发挥抗心肌缺血损伤的作用。在整个心血管系统中,不同类型的细胞间交流可以通过MVs进行,而MVs携带的活性物质可以参与到细胞间调控,并且这些MVs大部分来源于内皮细胞,并在IPC发挥抗心肌缺血损伤的过程中有重要的作用。但有关缺氧预适应(Hypoxia preconditioning,HPC)诱导的内皮细胞来源的MVs对心肌细胞的作用尚无报道。本实验通过HPC的方法诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)释放MVs,研究其对正常培养的H9c2心肌细胞的作用和和凋亡相关蛋白表达的影响,为IPC治疗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的研究开辟新的方向。目的:本研究在细胞水平采用HUVECs建立HPC模型,并采用HPC的方法诱导HUVECs分泌MVs,探讨HPC-EMVs对于H9c2细胞的作用和心肌Caspase3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:1.HUVECs HPC模型的建立将正常培养的HUVECs接种于96孔板后,于孵箱中培养24 h,分为Control、H/R(hypoxia/reoxygenation)和HPC叁组。Control组正常培养,H/R组按照缺氧12 h,复氧4 h的方式处理,HPC组采用不同的预缺氧/复氧条件处理细胞,再进行缺氧12 h,复氧4 h的处理。采用MTT法检测各组细胞存活率,选择适宜的细胞种板密度、预缺氧/复氧时缺氧液的pH值和预缺氧/复氧时间,构建HPC模型。2.HPC诱导HUVECs释放MVs和其定性定量分析HPC处理HUVECs后收集细胞及其上清,两步离心法提取MVs得到HPC-EMVs。采用BCA法对MVs进行蛋白定量测定。取少量MVs用于透射电镜观察MVs的超微结构。3.HPC-EMVs对于正常H9c2细胞的影响H9c2细胞按照1×10~5个/mL密度接种于培养板中,正常培养24 h。将细胞分为Control组、10、30、60μg/mL HPC-EMVs组。Control组加入无FBS的DMEM培养基培养4 h;HPC-EMVs组分别加入DMEM稀释的终浓度为10、30、60μg/mL的HPC-EMVs,孵育4 h。细胞存活率和损伤分别通过MTT法及比色法测定细胞培养液的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性。H9c2细胞凋亡的形态改变采用Hoechst 33258染色观察。细胞凋亡相关蛋白的检测,采用比色法测定培养液Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:1.成功建立HUVECs的HPC模型HUVECs以6×10~4个/mL的细胞密度种板,HPC组每孔加入pH 6.8的缺氧液后,进行预缺氧10 min/复氧15min的处理,再加入等量pH 5.8的缺氧液,进行缺氧12 h/复氧4 h的处理。与H/R组相比,HPC组存活率显着升高(94.83±2.55%vs 75.98±4.54%,P<0.01),且模型稳定,重复性好。2.HPC诱导HUVECs释放MVs和其定性定量分析HPC成功诱导HUVECs释放MVs,即HPC-EMVs。采用BCA法对MVs进行蛋白测定,其蛋白浓度为0.298±0.045μg/μL。通过透射电子显微镜观察到HPC-EMVs呈圆形或椭圆形膜性囊泡结构,直径在100-1000 nm。3.HPC-EMVs对于正常H9c2细胞的影响与Control组比,HPC-EMVs 30和HPC-EMVs 60μg/mL组细胞存活率明显降低(90.43±1.21%,73.19±2.11%vs 100±0%,P<0.01或P<0.001),并且HPC-EMVs 30和HPC-EMVs 60μg/mL组细胞培养液中LDH活性显着增高(132.97±4.92,157.38±6.94 vs 116.23±6.88,P<0.001),而HPC-EMVs 10组LDH活性有所降低(114.25±6.31 vs 116.23±6.88);Hoechst 33258染色观察到随HPC-EMVs浓度增加,细胞核凝聚,可见细小不规则颗粒状,细胞碎片增多,凋亡细胞数目增加;与Control组比较,HPC-EMVs 60μg/mL组Caspase3活性显着升高(307.29±9.25 vs 140.04±10.37,P<0.01)。与HPC-EMVs 10和HPC-EMVs 30μg/mL组相比,HPC-EMVs 60μg/mL组Caspase 3活性显着增高(142.51±10.55,182.78±6.58 vs 307.29±9.25,P<0.001);与Control组比,随HPC-EMVs浓度增加,蛋白Bcl-2/Bax比值逐渐下降。结论:1.本实验成功建立了HUVECs HPC的模型。2.采用缺氧液pH 6.8/5.8和预缺氧10 min/复氧15 min的方法成功诱导HUVECs产生MVs,HPC-EMVs蛋白浓度为0.298±0.045μg/μL。透射电镜观察到MVs为直径大小在100-1000 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构。3.HPC-EMVs降低正常H9c2细胞存活率,增加LDH漏出,其中60μg/mL HPC-EMVs作用最为显着。HPC-EMVs显着降低Bcl-2/Bax的比值。表明HPC-EMVs促凋亡机制可能为Bcl-2/Bax比值的下调。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
王欢[8]（2017）在《DJ-1通过保护线粒体复合体Ⅰ的活性介导心肌细胞缺氧预适应延迟保护》一文中研究指出目的:进一步从线粒体呼吸链复合体I酶活性改变对线粒体功能和细胞内氧化应激水平影响的角度探讨DJ-1蛋白介导缺氧预适应(HPC)产生延迟心肌细胞保护作用的潜在分子机制。方法:1.利用H9c2心肌细胞建立HPC模型,HPC处理24 h后,对细胞进行模拟缺血/再灌注(I/R),即缺氧/复氧(H/R),并设置对照组。H/R结束后,分离心肌细胞内胞浆蛋白和线粒体蛋白。通过Western blot检测各部分DJ-1蛋白含量变化。藉此观察HPC预处理对心肌细胞内DJ-1蛋白的表达水平以及线粒体内分布的影响。2.利用pFLAG-rDJ-1重组质粒或Si-DJ-1 RNA瞬时转染H9c2心肌细胞,并设立各自对照。转染后24 h及48 h,分别建立HPC及H/R模型;H/R后,通过Western blot检测细胞内DJ-1蛋白表达水平,JC-1荧光探针检测跨线粒体内膜电位差及MitoSOX RED试剂检测线粒体源性超氧化物的水平。藉此观察DJ-1表达水平不同对HPC产生的对抗H/R所致H9c2细胞线粒体功能损伤作用的影响。3.利用pFLAG-rDJ-1重组质粒或Si-DJ-1 RNA瞬时转染H9c2心肌细胞,并设置各自对照。转染后24 h,36 h及48 h,分别建立HPC,复合体I抑制及H/R模型;H/R结束后,分别以Western blot检测细胞内DJ-1蛋白表达的变化,分光光度法检测线粒体复合体I及抗氧化物酶(SOD、CAT和GPx)的活性,以及DCFH-DA探针检测H9c2细胞内的超氧化物(ROS)水平。藉此观察线粒体复合体I活性抑制对DJ-1介导的HPC对抗H/R所致H9c2细胞氧化应激损伤的影响。4.利用pFLAG-rDJ-1重组质粒或Si-DJ-1 RNA瞬时转染H9c2心肌细胞,并设置各自对照。转染后24 h,36 h及48 h,分别建立HPC,复合体I抑制及H/R模型;通过检测细胞内DJ-1蛋白表达的变化,细胞活力及H9c2细胞释放LDH的量,以观察线粒体复合体I活性抑制对DJ-1蛋白介导的HPC延迟心肌细胞保护作用的影响。结果:1.经HPC预处理的H9c2心肌细胞,无论是否给予H/R处理,细胞内DJ-1蛋白的表达水平均明显上调,并且线粒体内DJ-1的含量也明显升高。2.在HPC预处理的亲本H9c2心肌细胞,H/R所致的线粒体膜电位衰减明显减轻,线粒体源性超氧化物的生成也明显减少。HPC产生的这种线粒体保护作用可以在经pFLAG-rDJ-1重组质粒转染,即DJ-1高表达的细胞中重现。然而,在Si-DJ-1 RNA转染的的H9c2细胞中,HPC预处理对线粒体的保护作用被DJ-1基因沉默所取消。3.在HPC预处理的亲本H9c2心肌细胞,H/R所致的线粒体复合体I活性下降、ROS水平升高及抗氧化物酶活性降低均得到明显改善。这些保护作用同样可以在DJ-1高表达的细胞中观察到。而DJ-1基因沉默使得HPC保护线粒体复合体I和抗氧化物酶的活性、抑制ROS生成等作用均被取消。更为重要的是,HPC对抗H/R所致的ROS水平升高及抗氧化物酶活性降低可被线粒体复合体I活性抑制所取消。DJ-1高表达产生的与HPC相似的保护作用也可被线粒体复合体I活性抑制所取消。4.HPC预处理24 h后产生的抗H9c2细胞H/R损伤的保护作用可被DJ-1高表达模拟而被DJ-1基因沉默取消。而在经线粒体复合体I的抑制剂处理过的细胞中,HPC及DJ-1高表达产生的细胞保护作用均被取消。结论:DJ-1介导的HPC对抗H/R所诱发的H9c2细胞氧化应激及细胞损伤等延迟心肌保护作用与其维持线粒体复合体I的活性,改善线粒体功能有关。(本文来源于《南昌大学》期刊2017-05-01）
闫玉凤[9]（2015）在《DJ-1通过激活Nrf2信号通路上调抗氧化酶介导心肌细胞缺氧预适应延迟保护》一文中研究指出目的:从Nrf2信号通路及其所调控的抗氧化酶(Mn SOD、HO-1)表达改变的角度探讨DJ-1介导心肌细胞缺氧预适应(HPC)延迟保护的分子机制。方法:1.利用亲本H9c2细胞以及DJ-1沉默的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,分别经p Flag-h DJ-1重组载体或对照空质粒p Flag瞬时转染24 h后,建立HPC模型;HPC 24 h后,通过检测以下变化,以求观察DJ-1不同表达水平对HPC预处理H9c2细胞内Nrf2信号通路的影响:①Western Blot检测细胞内DJ-1蛋白表达的变化;②免疫共沉淀(Co-IP)检测Nrf2-Keap1的解离情况;③Western Blot检测Nrf2核转位变化;④染色质免疫共沉淀(Ch IP)法检测胞核内Nrf2与HO-1及Mn SOD基因启动子区内抗氧化反应元件(ARE)结合的变化。2.利用亲本H9c2细胞以及DJ-1沉默的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,分别经p Flag-h DJ-1重组载体或对照空质粒p Flag瞬时转染24 h后,建立HPC模型;HPC 24 h后,通过Western Blot检测细胞内抗氧化酶(Mn SOD、HO-1)蛋白表达的变化,以求观察DJ-1不同表达水平对HPC预处理H9c2细胞内Mn SOD、HO-1蛋白表达的影响。3.利用亲本H9c2细胞以及DJ-1沉默的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,分别经p Flag-h DJ-1重组载体或对照空质粒p Flag瞬时转染24 h后,各组细胞分别用Nrf2si RNA或阴性对照si RNA(NC si RNA)转染24 h,随后建立HPC模型;HPC 24h后,通过Western Blot检测细胞内Nrf2及抗氧化酶(Mn SOD、HO-1)蛋白表达的变化,以求观察Nrf2信号通路的抑制对DJ-1所依赖的HPC上调H9c2细胞内Mn SOD、HO-1蛋白表达的影响。4.利用亲本H9c2细胞以及DJ-1沉默的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,分别经p Flag-h DJ-1重组载体或对照空质粒p Flag瞬时转染24 h后,各组细胞分别用Nrf2si RNA或阴性NC si RNA转染24 h,随后建立HPC延迟保护模型和缺氧/复氧(H/R)损伤模型,通过检测以下变化,以求观察Nrf2信号通路的抑制对DJ-1所介导的HPC延迟保护的影响:①MTT法检测各实验组心肌细胞存活率的变化;②根据试剂盒说明分别检测各组细胞内LDH活性变化;③应用比色法测定MDA含量;④流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化。结果:1.在H9c2细胞,HPC 24 h后能显着上调DJ-1蛋白表达,同时促进Nrf2与其抑制蛋白Keap1解离,并促进Nrf2入核,增加Nrf2在胞核内与HO-1及Mn SOD基因启动子区内ARE的结合。然而,在DJ-1低表达的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,HPC上述效应被逆转。此外,H9c2/DJ-1 si RNA细胞经p Flag-h DJ-1转染进行回复实验后,DJ-1蛋白表达恢复,同时伴随HPC上述效应的恢复。2.在H9c2细胞,HPC 24 h后能显着上调HO-1及Mn SOD蛋白表达。然而,在DJ-1低表达的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,DJ-1沉默对HPC所诱导的HO-1及Mn SOD蛋白表达上调呈现抑制效应。同样,H9c2/DJ-1 si RNA细胞经p Flag-h DJ-1转染后,HPC上调HO-1及Mn SOD蛋白表达的效应也被恢复。3.H9c2细胞经Nrf2 si RNA处理后产生DJ-1沉默相似效应,对HPC所诱导的HO-1及Mn SOD蛋白表达上调呈现抑制效应。更为重要的是,H9c2/DJ-1si RNA细胞经p Flag-h DJ-1转染后,HPC上调HO-1及Mn SOD蛋白表达的回复效应也被Nrf2 si RNA所逆转。4.在H9c2细胞,HPC 24 h后可显着提高H/R损伤心肌细胞的生存率,抑制LDH的活性;并能显着减少H9c2心肌细胞H/R过程中所产生的活性氧(ROS),同时减少MDA的生成。然而,在DJ-1沉默的H9c2/DJ-1 si RNA细胞,HPC上述效应被逆转。更为有趣的是,H9c2细胞经Nrf2 si RNA处理后同样产生DJ-1沉默相似效应,对HPC抗H/R所诱发的氧化应激,产生延迟保护作用呈现抑制效应。此外,在H9c2/DJ-1 si RNA细胞,Nrf2 si RNA也逆转DJ-1表达恢复对HPC延迟保护的回复效应。结论:DJ-1介导心肌细胞HPC延迟保护的分子机制与其激活Nrf2信号通路,进而上调Nrf2所调控的抗氧化酶Mn SOD、HO-1的蛋白表达有关。(本文来源于《南昌大学》期刊2015-05-01）
陈丽,王志成,宋林敬,吕晓红[10]（2015）在《缺氧预适应对体外培养神经元的神经保护作用存在一个时间窗》一文中研究指出目的本实验采用体外培养皮质神经元研究缺氧预适应对谷氨酸损伤模型的保护作用,同时探索一定缺氧浓度下最佳保护作用的缺氧时间。方法原代培养神经元,确立谷氨酸损伤模型,对培养至第7天的细胞进行8%氧浓度和不同时间的缺氧预适应及谷氨酸损伤,用MTT法检测细胞的存活率。应用SPSS 17.0进行统计学分析。结果 8%O2缺氧4~8 h,皮质神经元谷氨酸损伤模型实验组与对照组相比,存活率提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 8%O2缺氧4~8 h对谷氨酸损伤模型中的原代体外培养皮质神经元具有保护作用,该保护作用至少可持续6 h。(本文来源于《中风与神经疾病杂志》期刊2015年04期）
缺氧预适应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制。方法复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细胞迁移实验。显微镜下观察并计数迁移至小室膜下层的心脏干细胞数; RT-PCR法检测各组心脏成纤维细胞干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中迁移相关因子SCF、SDF-1的蛋白分泌量。结果对照组、模型组、补阳还五汤组心脏干细胞迁移数呈递增趋势,对照组与模型组比较差异有统计学意义(P<0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(P<0. 05); SCF、SDF-1 mRNA表达在对照组、模型组、补阳还五汤组之间存在下调后上调的变化趋势,模型组与对照组比较差异有统计学意义(均P<0. 05),补阳还五汤与模型组比较差异有统计学意义(均P<0. 05);叁组SCF、SDF-1蛋白分泌变化趋势与RT-PCR结果一致,模型组与对照组比较SCF差异有统计学意义(P<0. 05),SDF-1差异无统计学意义(P>0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(均P<0. 05)。结论补阳还五汤可促进缺氧预适应心脏成纤维细胞诱导的心脏干细胞迁移,其机制可能与上调心脏成纤维细胞迁移相关因子SCF、SDF-1的表达有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
缺氧预适应论文参考文献
[1].侯娅,张静,鄢显明,王小博,艾小鹏.缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制研究[J].中药药理与临床.2018
[2].金鑫瑶,朱征,陈娜,李娜,曾文赟.补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响[J].中国老年学杂志.2018
[3].王一婧,袁晓捧,吴旦斌,孙英新,范英昌.补阳还五汤干预缺氧预适应成纤维细胞促间充质干细胞迁移的机制[J].中国实验方剂学杂志.2018
[4].唐容,李袁静,高凌云.eNOS谷胱甘肽化在缺氧预适应保护人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制[J].重庆医科大学学报.2018
[5].刘超,韦苏,张琨玮,祝倩,李烨仪.缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用[J].天津医科大学学报.2018
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[7].刘超.缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的影响[D].天津医科大学.2017
[8].王欢.DJ-1通过保护线粒体复合体Ⅰ的活性介导心肌细胞缺氧预适应延迟保护[D].南昌大学.2017
[9].闫玉凤.DJ-1通过激活Nrf2信号通路上调抗氧化酶介导心肌细胞缺氧预适应延迟保护[D].南昌大学.2015
[10].陈丽,王志成,宋林敬,吕晓红.缺氧预适应对体外培养神经元的神经保护作用存在一个时间窗[J].中风与神经疾病杂志.2015
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