论文摘要
目的分析Cu2+胁迫前后福寿螺谷胱甘肽S转移酶（PcGST）基因的表达规律,探讨福寿螺适应Cu2+的相关机制。方法 80只福寿螺随机分为4组,每组20只福寿螺, Cu2+胁迫浓度分别为0、 50、 100、 150μg/L。分别于Cu2+胁迫后的0、 1、 7、 14 d,各组随机取3只福寿螺,分离其肝脏、鳃、肾脏组织,分别提取组织中的RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测Cu2+胁迫前后PcGST m RNA的相对表达量。基于Cu2+胁迫下的福寿螺基因转录组筛选获得PcGST基因,构建pET-28a-PcGST重组质粒,转化至大肠埃希菌（E. coil） BL21 （DE3）感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分析重组蛋白表达情况。将转化菌株（含PcGST基因的E. coil）和非转化菌株（未转化的E. coil）等量分成6份,随机取3份作为Cu2+胁迫组（含0.2 mmol/L的CuSO4）,另3份作为对照组（不含CuSO4）, 20℃、 150 r/min摇床培养。每隔1 h测定一次菌液吸光度（A600）值,连续测定6 h。采用t检验比较转化菌株和非转化菌株对Cu2+的耐受能力。结果设定无Cu2+胁迫下的福寿螺组织中PcGST mRNA的相对表达量为1.0±0.0。肝脏组织中, 50μg/L Cu2+胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量于0～14 d呈持续上升趋势,峰值为4.9±0.5; 100μg/L、 150μg/L Cu2+胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量先上升后下降,峰值均于7 d出现,分别为13.0±3.0和12.2±2.2。鳃组织中,50μg/L、 100μg/L Cu2+胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量先上升后下降,峰值均于7 d出现,分别为5.3±0.7和23.3±16.5; 150μg/L Cu2+胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量也呈现先上升后下降的趋势,峰值于1 d出现,为9.8±3.3。肾脏组织中, 50μg/L Cu2+胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量随时间变化不显著; 100μg/L Cu2+胁迫下, PcGST m RNA的相对表达量前期随时间变化不显著,于14 d出现显著增加,为3.9±1.0; 150μg/L Cu2+胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量于0～14 d呈持续上升趋势,峰值为18.0±0.8。PcGST基因PCR扩增产物约为600 bp。SDS-PAGE结果显示, PcGST蛋白的相对分子质量（Mr）约为26 370。LB液体培养基中,转化菌株与非转化菌株的生长曲线接近,最大A600值分别为1.5±0.0和1.4±0.0,差异无统计学意义（P> 0.05）;含0.2 mmol/L CuSO4的LB液体培养基中,转化菌株的生长曲线优于非转化菌株,最大A600值分别为1.5±0.1和1.0±0.0,差异有统计学意义（P <0.05）。结论Cu2+胁迫能促进福寿螺体内PcGST基因的表达。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 茅光耀,周鸿让,黄芸,岳志远,段磊,许秋利,郭云海,党志胜,张仪,肖宁
关键词: 福寿螺,胁迫,谷胱甘肽转移酶,基因表达分析
来源: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年02期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学,基础医学
单位: 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室
基金: 国家重点研发计划(No.2016YFC1200500)~~
分类号: R384
页码: 213-217+231
总页数: 6
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