四种单增李斯特菌常用核酸检测方法的评价与应用

论文摘要

目的应用聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光PCR（Real-time PCR）、环介导等温扩增（LAMP）和多交叉置换扩增（MCDA）4种核酸检测方法,对单增李斯特菌进行检测,探索特异、灵敏、高效,且适用于肉类样本中单增李斯特菌检测的核酸检测方法。方法比较文献报道的以单增李斯特菌特异性基因lmo0733作为靶标的4种核酸检测方法,评价这4种方法在特异性、灵敏度、检出速率方面的差异,并应用于单增李斯特菌模拟样本和猪肉样本中单增李斯特菌的检测。结果传统PCR、Real-time PCR、LAMP和MCDA方法都能准确检测单增李斯特菌,其中MCDA方法检测下限为10 fg/反应,且能在30 min内完成对样本核酸的检测,灵敏度和检出速率优于其它3种核酸诊断方法;MCDA方法对于模拟样本和实际样本的检测效率优于其它3种核酸检测方法和传统分离培养方法,能够提高样本检测的阳性率。结论 MCDA方法作为一种特异、灵敏和高效的核酸检测方法,可用于肉制品中单增李斯特菌检测时的快速筛查,并能提高传统分离培养方法对标本中单增李斯特菌的阳性检出率。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材 料
•     1.1.1 实验菌株
•     1.1.2 试剂与仪器
•     1.1.3 DNA模版的制备
•   1.2 方 法
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 特异性验证
•     1.2.3 灵敏度比较
•     1.2.4模拟样本的制备
•     1.2.5 模拟样本灵敏度检测
•     1.2.6 欧标方法（ISO11290-1:2017）检测猪肉样本中的单增李斯特菌
•     1.2.7 核酸检测方法检测猪肉样本增菌液培养物
•     1.2.8 欧标检测方法和4种核酸检测方法对猪肉样本分离单增李斯特菌检出率比较
• 2 结 果
•   2.1 引物验证
•   2.2 特异性的验证
•   2.3 灵敏度结果
•   2.4 模拟样本检测灵敏度结果
•   2.5 欧标方法对市场猪肉样本中李斯特菌的检测结果
•   2.6 核酸检测方法对猪肉样本增菌液培养物的检测结果
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 纪顺师,叶长芸

关键词: 单增李斯特菌,聚合酶链式反应,实时荧光,环介导等温扩增,多交叉置换扩增

来源: 中国人兽共患病学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学,临床医学

单位: 传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

基金: 国家自然科学基金（No.31800004）,传染病预防国家重点实验室项目（No.2015SKLID507）,中国疾病预防控制中心传染病所自主课题(No.2016ZZKTB09)~~

分类号: R440;R378.994

页码: 1085-1091+1099

总页数: 8

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