与马立克病病毒编码的miR-M31-3p互作的宿主靶基因筛选与鉴定

论文摘要

血清Ⅰ型马立克病病毒（MDV-1）编码26个病毒mi RNA,前期研究发现这些miRNA可能在鸡马立克病肿瘤发生中发挥重要调控作用。为研究MDV-1编码的miRNA基因miR-M31-3p在病毒感染及致病过程中的作用机制,本研究利用杂交PCR方法构建宿主cDNA文库,对与miR-M31-3p互作的宿主候选靶基因进行初步筛选,结果获得了49个候选靶基因。通过双荧光素酶报告试验证实miR-M31-3p与鸡GNPAT、TCF12、FIGNL1、CNDP2、MGST1和CD99L2的3’-UTR在体外存在相互作用。进一步通过q RT-PCR分析显示:过表达miR-M31-3p的CEF中,上述6个候选基因m RNA转录水平均显著下调;当MDV感染CEF时,除CD99L2之外的5个候选靶基因的转录水平均显著下调,而在mi R-M31-3p基因缺失的MDV株感染的CEF中这5个靶基因均正常转录。上述结果证实CNDP2、GNPAT、TCF12、FIGNL1和MGST1为与mi R-M31-3p互作的宿主靶基因。本研究为进一步揭示miR-M31-3p调控MDV感染宿主的致病机制奠定了重要基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒、细胞和质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物设计与合成
•   1.4 宿主候选靶基因c DNA文库的构建
•   1.5 双荧光素酶报告质粒的构建及鉴定
•   1.6 双荧光素酶报告实验 （Dual luciferase reporter assay, DLRA）
•   1.7 q RT-PCR分析候选靶基因的转录水平
• 2 结果
•   2.1 宿主候选靶基因的c DNA文库构建及筛选结果
•   2.2 双荧光素酶报告质粒的构建及鉴定结果
•   2.3 DLRA分析mi R-M31-3p与候选靶基因的相互作用结果
•   2.4 q RT-PCR检测宿主靶基因在体内的转录水平
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张雅,滕蔓,李会珍,朱志坚,刘豪丽,罗俊,张改平

关键词: 马立克病病毒,宿主靶基因,文库

来源: 中国预防兽医学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院,河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室,河南科技大学动物科技学院/动物疫病与公共安全重点实验室,扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患防控协同创新中心

基金: 国家自然科学基金(31602050,U1604232),中原千人计划-基础研究领军人才,河南省农业科学院杰出青年科技基金(2019JQ01),河南省农业科学院科研发展专项资金(2019CY012)

分类号: S852.65

页码: 441-448

总页数: 8

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