长沙医学院湖南长沙410219
【摘要】目的：探讨不同剂量双酚A(bisphendA，BPA)对雄性小鼠的生殖毒性的影响。方法：选取健康雄性小鼠，采用灌胃染毒，染毒4周后颈椎脱臼处死，观察精子形态，精子畸形率，精子活度，睾丸切片。结果：双酚A实验组，其中附睾脏器系数，精子畸形率，精子活度指标随着剂量的升高而呈正相关，具有一定的对比性。HE染色得出结果显示双酚A实验组小鼠附睾有损伤，生精小管出现坏死。结论：一定剂量的双酚A对雄性小鼠精子有生殖毒性。
【关键词】BPA；生殖毒性；雄性小鼠
【中图分类号】R114【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-067-02
双酚A(bisphendA，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。日常生活中人们可以通过饮食摄入、灰尘吸入和皮肤接触BPA[1-2]。在人的血液、尿液、胎盘、乳汁、羊水及其他体液等组织中能检测到BPA[3]。BPA是一种环境内分泌干扰物[4]，能够模拟雌激素的作用，与雌激素受体结合，干扰体内天然激素的正常活动，即使是极低剂量也能对生物体的生殖、神经、免疫等功能产生影响[5-6]。本实验旨在通过研究BPA对雄性小鼠的生殖毒性，试分析BPA致雄性小鼠生殖毒性的量-效关系，探讨BPA致雄性小鼠生殖毒性可能的作用机制。
1材料与方法
1.1仪器与设备
BPA，分析纯，中国上海化工试剂公司，生产编号B108652；
玉米油，药用级，中国上海化工试剂公司，生产编号C116025；
显微镜(Unican)HV2818，生产编号30108453；
电子分析天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）。
1.2实验动物
选用湖南省疾控实验动物中心提供的普通级封闭群，KM群雄性小鼠，体重18g到22g，随机分成对照组，BPA低剂量组、BPA高剂量组。分别记为C组，B低剂量组、B高剂量组，每组3只动物，对照组采用玉米油做空白对照，BAF低组染毒剂量为50mg/kgBW,BAF高组剂量为200mg/kgBW。
1.3实验方法
1.3.1形态学观察计算精子活动率、精子畸形率。
精子活动率：采用伊红染色法，将0.5g伊红Y染料溶于100mL等渗盐水中配成染色液。计数100条精子，计数的精子所占比例即为精子活动率。
精子活动率=活精子数/100
精子畸形率：取一侧附睾置于5mL生理盐水中，剪碎，37℃孵育15-20min后，制得精子悬液。每只动物检查1000只精子，计算精子畸形率。
畸形率=畸形精子数/1000
1.3.2脏器系数迅速取出实验小鼠睾丸和附睾,去除周围的脂肪组织和结缔组织，准确称量小鼠双侧睾丸和附睾的重量。
脏器系数(%)=脏器体重(g)/小鼠体重(g)×100%
1.3.3形态学观察常规HE染色，石蜡切片，光学显微镜观察。
以上睾丸病理学染色、切片、拍照和读片将在长沙医学院病理学教研室老师指导下完成。
1.4统计方法
所有实验数据均应用SPSS18.0统计软件录入分析，实验组和对照组数据采用方差分析和LSD法进行比较。
2结果
2.1一般情况
染毒后，低剂量小组实验小鼠体重有上升，高剂量组小鼠出现活动量减少，精神萎靡，进食量也有不同程度减少，停止染毒后逐渐好转；整个实验过程中高剂量组小鼠死亡1只。
2.2BPA染毒对成年雄性小鼠精子畸形率，精子活度的影响
BPA染毒各组小鼠的精子活动率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，精子畸形率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，附睾的脏器系数与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，结果见下表。
表BAF染毒对精子活动率,精子畸形率,睾丸附睾脏器系数的影响(±s)
2.3BPA对成年雄性小鼠睾丸组织的影响
通过石蜡切片结果显示：C组结构清晰的呈圆形或椭圆形的生精管，管壁内有不同发育阶段的生精细胞，以及多数成熟精子，与生精细胞紧密相贴。睾丸及间质无胞壁脱落、坏死、钙化或精子肉芽肿，为正常辜丸组织结构。B低剂量组小鼠，主要改变有生精细胞脱离基底部向管腔部移动，成熟精子减少，少数曲细精管上皮细胞排列紊乱，少数上皮与基底部分离。B高剂量组改变可见曲细精管上皮细胞排列紊乱，少数上皮与基底部分离管腔内可见脱落的生精细胞。部分生精管内已经完全变性坏死，一些支持细胞与生精细胞呈分离状，生精细胞减少较明显。综上所述随着BPA染毒剂量的增高，生精小管胞壁以及生精小管损伤加深，甚至出现生精小管变性坏死现象。BPA通过对成熟小鼠睾丸精子数目，精子密度，睾丸以及附睾的脏器系数，精子活动率，以及精子畸形对成熟雄性小鼠的生精能力造成不同程度的影响，对生殖系统有一定毒性，见图1-3。
3讨论
本次研究发现BPA对雄性小鼠生殖系统有一定毒性。与对照组比较，BPA染毒组小鼠睾丸及附睾脏器系数降低，精子畸形率升高，精子活动率降低。切片结果显示BPA能引起受试小鼠生精小管损伤，甚至出现生精小管变性坏死。以上结果提示BPA能通过血睾屏障，干扰精子的正常生成过程，从而导致精子畸形率升高，精子活动率下降。研究发现[7]，BPA具有弱雌激素和强抗雄激素活性，其进入机体后，可通过模拟或者抑制内源性雌激素的作用，竞争性地与受体结合或者抑制受体表达、干扰内源性激素的合成分泌，进而影响机体的内分泌活动以及正常的生殖功能。
日常生活中BPA被广泛的添加于婴儿奶瓶、食品罐、烹任用器和餐具、水管、假牙及汽车零件等消费品中，人类长期暴露会导致生殖毒性，所以我们应该减少BPA制品的使用，尤其是婴幼儿的塑料奶瓶，这对减少现今BPA的毒性具有重要意义。
参考文献
[1]VandenbergLN,ColbornT,HayesTB,etal.HormonesandEndocrine-DisruptingChemicals:Low-DoseEffectsandNonmonotonicDoseResponses[J]EndocrRev,2012,33(3):378-455.
[2]黄伯贤,覃莲菊,崔毓桂,等.双酚A在日常生活中的接触及其对人类生殖内分泌的干扰[J].生殖与避孕,2013,33(10):696-700.
[3]MonikaKasper-Sonnenberg,HolgerMKoch,JurgenWitt-siepe,eta.PhthalatemetabolitesandbisphenolAinu-rinesfromGermanschool-agedchildren:ResultsoftheDuisburgBirthCohortandBochumCohortStudies[J].IntJHygEnlironHealth,2014,217(8):830-838.
[4]NghiemLD,SchaferAI.AdsorptionandtransportoftracecontaminantestroneinNF/ROmembranes[J].EnvironEngSci,2002,19:441-451.
[5]文欣.双酚A的危害多大[J].化工与生活,2012,6:100-101.
[6]张彦丽,任佳丽,李忠海,等.食品包装材料中双酚A的研究进展[J].食品与机械,2011,27(1):155-161.
[7]冉茂梅,王金桃.双酚A暴露对雄性小鼠性激素及精子质量的影响[J].山西医科大学硕士论文,2013,5:34.
作者简介：汤婷（1994—），女，就读于卫生检验与检疫专业。
通讯作者简介：曾灿（1988—），女，硕士研究生，长沙医学院公共卫生学院教师，从事预防医学教学、科研工作。
基金项目：长沙医学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目（编号：长医教〔2015〕15号-25）