绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定

论文摘要

绿色荧光蛋白（GFP）及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体（GBP）也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因（GBP1）的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动（MST）和等温滴定量热（ITC）实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequorea victoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和Zoanthus GFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和T-Sapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 构建原核表达载体
•   1.3 GBP1蛋白与荧光蛋白的表达与纯化
•   1.4 MALDI-TOF/TOF质谱检测
•   1.5 分子筛层析
•   1.6 微量热泳动
•   1.7 BS3交联实验
•   1.8 等温滴定量热
• 2 结果
•   2.1 GBP1蛋白的表达、纯化及鉴定
•   2.2 分子筛层析检验GBP1与荧光蛋白的结合
•   2.3 微量热泳动检测GBP1与荧光蛋白的结合能力
•   2.4 BS3交联实验
•   2.5 等温滴定量热实验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡业辉,李益鹏,王紫英,陈勖,任真,丁澦

关键词: 荧光蛋白,绿色荧光蛋白结合蛋白,纳米抗体,蛋白表达,蛋白纯化,微量热泳动

来源: 复旦学报(自然科学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系

基金: 国家自然科学基金(31470764),国家基础学科拔尖学生培养试验计划

分类号: Q51

DOI: 10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2019.02.007

页码: 183-190

总页数: 8

文件大小: 2691K

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