导读:本文包含了猪虹膜色素上皮细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:腺相关病毒,色素上皮衍生因子,虹膜色素上皮细胞,转染
猪虹膜色素上皮细胞论文文献综述
赵莼,王方,计菁,施沃栋,范先群[1]（2011）在《腺相关病毒介导色素上皮衍生因子转染人虹膜色素上皮细胞的体外研究》一文中研究指出目的探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,对体外培养的人虹膜色素上皮(IPE)细胞进行色素上皮衍生因子(PEDF)转染,获得高效表达PEDF转基因细胞的可行性。方法构建携带PEDF基因的重组AAV载体AAV-PEDF,体外培养人IPE,用1×106pfu的AAV-PEDF按感染复数(MO I)为0、2、10和20分别感染体外培养的IPE细胞;荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况;流式细胞术检测细胞转染效率;RT-PCR和W estern b lotting法鉴定PEDF在IPE细胞中的表达。结果 AAV-PEDF转染后,IPE细胞生长正常,用荧光显微镜、RT-PCR和W estern b lotting均检测到PEDF表达。在MO I为20时,细胞感染阳性率达64.22%。结论 AAV-PEDF能有效地转染体外培养的IPE细胞并有效表达PEDF。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2011年08期）
张英瑜,高朋芬,杨丽霞[2]（2011）在《基因转染的虹膜色素上皮细胞移植后RCS鼠视网膜BDNF表达观察》一文中研究指出目的探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因转染的虹膜色素上皮细胞(AAV-BDNF-IPE)移植入皇家外科学院(royal college of surgeons,RCS)大鼠视网膜下腔后,不同时期视网膜组织BDNF表达变化。方法通过外路途径将BDNF基因转染的虹膜色素上皮细胞移植到RCS大鼠视网膜下腔,术后3、5、7、9、11周分别取RCS大鼠手术眼及对照组动物眼视网膜组织,用酶联免疫吸附法(Elisa)检测视网膜组织中BDNF的表达水平,比较分析这些数据。结果对照组RCS大鼠出生后3周龄时视网膜组织中BDNF仍保持较高水平,其后迅速降低,其中3周龄组与其它周龄组比较,P<0.01;手术组RCS大鼠术时、术后3、5、7、9、11周各组间两两比较,BDNF表达无显着差异(P>0.05);出生后6周龄直到14周龄的不同时期,AAV-BDNF-IPE移植手术组RCS大鼠视网膜BDNF表达水平均明显高于对照组(其中6周龄组P<0.05,其它各周龄组P<0.01)。结论 BDNF基因转染的虹膜色素上皮细胞在RCS大鼠视网膜下腔移植后,视网膜组织中BDNF可以持续稳定高水平表达,这为临床开发新的神经营养因子给药方式提供了实验依据。(本文来源于《局解手术学杂志》期刊2011年04期）
张英瑜[3]（2011）在《基因转染的虹膜色素上皮细胞治疗RCS大鼠视网膜色素变性的实验研究》一文中研究指出遗传性视网膜变性是一组以进行性光感受器细胞及色素上皮细胞功能丧失为共同表现的疾病。目前为止,这些疾病尚无有效治疗方法[1, 2]。全世界有数百万人因此永久致盲,危害性极大。临床上迫切需要有效措施以改善和维护RPE功能,防止感光细胞变性及凋亡,这是多年来全世界范围内一大热点和难点。目前发现脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)能促进培养的人和牛的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞分化,通过自分泌或通过胶质细胞调节视网膜变性中感光细胞的生存,使视网膜细胞存活[3, 4, 5]。本研究拟在视网膜变性的RCS(Royal College of Surgeons)鼠早期进行干预,将BDNF基因转染的虹膜色素上皮细胞(iris pigment epitheium,IPE)(AAV-BDNF-IPE)移植入早期RCS大鼠视网膜下腔后,观察不同时期视网膜电图(electroretinogram, ERG)、视网膜组织BDNF表达及视网膜形态变化,分析移植后RCS鼠视网膜改善情况,为临床对由于RPE功能障碍以及感光细胞变性引起的疾病患者提供更多的思路。方法本研究通过以下四部分进行:第一部分:出生后18-22天(3周龄)RCS大鼠48只,雌雄不拘。通过改进的巩膜外路移植法将AAV-BDNF-IPE细胞移植到RCS大鼠双眼视网膜下腔,术后观察眼底情况,并行HE染色,观察移植细胞的存活情况。第二部分:SD正常对照大鼠,按照出生后3周龄、6、8、10、12、14周龄分组,每周龄组3只,共18只,RCS大鼠及AAV-BDNF-IPE细胞移植RCS大鼠(已在第一部分实验中完成AAV-BDNF-IPE细胞移植)各18只,按出生后周龄分组同SD大鼠,分别行双眼暗适应ERG记录,电生理检查参照国际临床视觉电生理标准。每次每眼至少检查3次,迭加后取波形稳定、干扰小的ERG图形,计算ERG-a、b波振幅值并进行统计学处理。第叁部分:对照组RCS大鼠按照出生后3周龄、6、8、10、12、14周龄分组,每周龄组4只,共24只;AAV-BDNF-IPE细胞移植RCS大鼠(已在第一部分实验中完成AAV-BDNF-IPE细胞移植)24只,按出生后周龄分组同对照组RCS大鼠。分别于相应时间点即手术当天、术后3、5、7、9、11周取双眼球,用酶联免疫吸附法(Elisa)检测视网膜组织中BDNF的表达水平,比较分析这些数据并进行统计学处理。第四部分:实验动物及分组同第二部分,行电生理检测后处死大鼠,取出双眼球,取视网膜组织进行HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色检测。结果1.共计43只RCS大鼠实施了双眼视网膜下腔移植,发生大量玻璃体积血、广泛视网膜脱离、眼内炎及误注入玻璃体腔18眼。AAV-BDNF-IPE细胞成功移植入视网膜下腔68眼,手术成功率79%。RCS大鼠视网膜及睫状体部位HE染色发现,睫状体及视网膜均缺乏色素细胞层;AAV-BDNF-IPE细胞移植到RCS大鼠视网膜下腔5周后,HE染色可见大鼠视网膜下腔有散在存活的褐色上皮细胞,推测为移植后存活的AAV-BDNF-IPE细胞;视网膜或脉络膜内未见明显炎性细胞浸润反应及结构破坏(Fig.6)。2.叁组大鼠成功完成暗适应FERG记录,从出生后第3周到第14周,共记录正常SD大鼠15只30次,未干预对照RCS大鼠15只30次,细胞移植组RCS大鼠17只34次。叁组大鼠生后8周内FERG的暗适应最大反应a、b波振幅无明显差别,出生10周以后RCS大鼠FERG的暗适应最大反应a、b波振幅均明显降低,与同周龄正常SD大鼠相比显着下降(P﹤0.05),出生12周以后RCS大鼠ERG波形呈低平型,未见明显波峰波谷,a、b波模糊。AAV-BDNF-IPE移植手术组RCS大鼠出生后10周龄时b波仍保持较高水平,尽管细胞移植组RCS大鼠b波呈现缓慢下降趋势,但振幅仍显着高于同周龄未干预对照组RCS大鼠(12w和14w组P<0.05)。3.对照组RCS大鼠出生后3周龄时视网膜组织中BDNF仍保持较高水平,其后迅速降低,其中3周龄组与其它周龄组比较,P<0.01;手术组RCS大鼠术时、术后3、5、7、9、11周各组间两两比较,BDNF表达无显着差异(P﹥0.05);出生后6周龄直到14周龄的不同时期,AAV-BDNF-IPE移植手术组RCS大鼠视网膜BDNF表达水平均明显高于对照组(其中6周龄组P<0.05,其它各周龄组P<0.01)。4. HE染色结果示:AAV-BDNF-IPE移植手术组和对照组相比视杆层靠近外核层的一侧厚度略有改善;TUNEL结果:实验组凋亡指数减少,凋亡峰值后延,凋亡高峰发生于移植术后9wk;免疫组化染色结果示:实验组大鼠原外层视网膜部位GFAP呈弱阳性表达,Muller细胞着色较浅;SYN除内丛状层着色外,外丛状层呈弱阳性反应。小结1、本实验采用自制的注射器,经单通道巩膜外路法成功将AAV-BDNF-IPE移植至幼年RCS大鼠视网膜下腔,有效缩小了巩膜切口,减少了视网膜解剖结构的破坏,手术成功率达到79%。RCS大鼠视网膜及睫状体部位HE染色发现,睫状体及视网膜均缺乏色素细胞层;AAV-BDNF-IPE细胞移植到RCS大鼠视网膜下腔5周后,HE染色可见大鼠视网膜下腔有散在存活的褐色上皮细胞,推测为移植后存活的AAV-BDNF-IPE细胞;视网膜或脉络膜内未见明显炎性细胞浸润反应及结构破坏。虽然不能判定移植细胞与其宿主视网膜组织间建立了正确的解剖联系,但我们的实验结果证实,通过改进的巩膜外路移植法将AAV-BDNF-IPE细胞移植至视网膜下腔,移植细胞不但能够较长期存活,而且不发生免疫排斥反应,是安全可靠的。2、本实验发现SD正常对照大鼠、RCS大鼠及AAV-BDNF-IPE细胞移植RCS大鼠叁组大鼠生后8周内FERG的暗适应最大反应a、b波振幅无明显差别,出生10周以后RCS大鼠FERG的暗适应最大反应a、b波振幅均明显降低,与同周龄正常SD大鼠相比显着下降(P﹤0.05),出生12周以后RCS大鼠ERG波形呈低平型,未见明显波峰波谷,a、b波模糊,这些结果证实RCS大鼠视网膜色素变性进展过程中,视网膜功能逐步丧失。RCS大鼠视网膜电图的改变滞后于视网膜形态改变。将AAV-BDNF-IPE细胞移植入RCS大鼠视网膜下腔后,可以明显改善FERG b波振幅,尽管随着术后时间延长,细胞移植组RCS大鼠b波呈现缓慢下降趋势,但出生后10周龄后b波仍保持相对较高水平,且振幅显着高于同周龄未干预对照组RCS大鼠(12w和14w组P<0.05),提示AAV-BDNF-IPE细胞移植可以在一定程度上延缓RCS大鼠视网膜色素变性的进展,改善部分视网膜功能。3.对照组RCS大鼠出生后3周龄时视网膜组织中BDNF仍保持较高水平,其后迅速降低;出生后6周龄直到14周龄的不同时期,AAV-BDNF-IPE移植手术组RCS大鼠视网膜BDNF表达水平均明显高于对照组。这些结果表明,BDNF基因转染的虹膜色素上皮细胞在RCS大鼠视网膜下腔移植后,视网膜组织中BDNF可以持续稳定高水平表达,这是AAV-BDNF-IPE移植改善宿主视网膜功能的一个重要原因。4. AAV-BDNF-IPE细胞移植效果比未干预组略好:视杆层靠近外核层的一侧厚度也略有改善,这与以往的研究一致;TUNEL检测证实视细胞的丧失是一种凋亡现象,也提示AAV-BDNF-IPE的治疗可能是抑制细胞凋亡而发挥作用的;免疫组化结果提示可能减轻了代偿反应性胶质纤维增生,也可能表现了以突触恢复为特征的超微结构的变化。综上所述,该实验延缓了视网膜变性的进一步发展,表明这一方法可能拯救变性的光感受器,使之重新恢复功能。(本文来源于《福建医科大学》期刊2011-03-01）
杨晓慧,孙葆忱[4]（2008）在《碱性成纤维细胞生长因子基因转染对虹膜色素上皮细胞增殖及细胞周期的影响》一文中研究指出目的:了解重组腺相关病毒(rAAV)载体介导碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对体外培养的虹膜色素上皮细胞(IPE)增殖及细胞周期的影响。方法:在体外培养的IPE细胞中加入转染rAAV-bFGF基因细胞和未转染细胞的培养液上清,继续培养4h或1d后分别应用MTT法和流式细胞仪检测IPE细胞的生长状况。结果:MTT法结果显示,加入rAAV-bFGF基因转染组培养液上清的IPE细胞D值为0.338±0.047,对照组为0.277±0.064,2组相比,t=3.745,P<0.05。流式细胞仪检测结果显示:加入rAAV-bFGF基因转染组培养液上清的S期IPE细胞为(21.19±1.93)%,与对照组(16.47±2.37)%相比,t=-3.448,P<0.05。结论:转染rAAV-bFGF的IPE细胞分泌的bFGF具有生物活性,这为rAAV-bFGF转染IPE细胞移植治疗视网膜色素变性提供了理论支持。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2008年05期）
杨晓慧,孙葆忱[5]（2008）在《腺相关病毒介导bFGF基因对虹膜色素上皮细胞的转染及表达》一文中研究指出目的:评价重组腺相关病毒(rAAV)载体介导碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染体外培养的虹膜色素上皮细胞(IPE)后,bFGF基因在细胞内转录和翻译水平的表达情况。方法:取IPE细胞,转染含有分泌型bFGF全长cDNA和巨细胞病毒启动子的rAAV-bFGF,以未转染和同样条件下转染rAAV-GFP的细胞作对照。1周后,RT-PCR检测细胞中bFGFmRNA的表达。ELISA法检测细胞中bFGF蛋白的表达。结果:转染rAAV-bFGF的IPE细胞有bFGFmRNA的表达,转染rAAV-GFP和未转染细胞无bFGFmRNA的表达。以105个细胞计算,转染rAAV-bFGF的IPE细胞bFGF蛋白含量为(1.322±0.663)μg/L,高于未转染组的(0.213±0.036)μg/L和转染rAAV-GFP组的(0.243±0.050)μg/L,差异有统计学意义(F=18.294,P=0.000)。结论:IPE细胞能被rAAV-bFGF转染,转染细胞能够在转录和翻译水平表达bFGF基因。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2008年04期）
汪枫桦,顾青,孙晓东,钱锦,张皙[6]（2008）在《牛眼视网膜和虹膜色素上皮细胞体外培养的生物学特性比较》一文中研究指出目的分离、培养和纯化牛原代视网膜色素上皮细胞(RPE)和虹膜色素上皮细胞(IPE),比较体外培养的RPE与IPE的生物学特性。方法采用酶辅助显微分离牛眼RPE和IPE,进行体外培养,密度梯度离心法纯化并采用免疫组化法进行鉴定。透射电镜观察体外培养RPE、IPE的超微结构,比较两种细胞体外培养下的生长状况。结果纯化后体外培养牛RPE和IPE的角蛋白表达强阳性,细胞阳性率分别达到94%和88.7%。原代培养的牛RPE和IPE外形类似,为多角形,具有相似的生长曲线。电镜显示两种细胞都具有细胞极性,顶端有大量微绒毛,原代细胞内含有大量色素颗粒和内质网,RPE含有较多与其吞噬功能相适应的溶酶体。结论通过酶辅助显微分离色素上皮细胞,结合密度梯度离心的方法可以获得较纯的牛RPE和IPE,该方法同样适用于周切虹膜材料。两种色素上皮细胞具有相似的形态和生物学性状,但仍然存在与功能相适应的超微结构差异。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2008年06期）
徐国兴,谢茂松,郭健,郑卫东,何青[7]（2008）在《自体虹膜色素上皮细胞移植治疗视网膜色素上皮细胞变性研究》一文中研究指出目的:研究自体虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelium,IPE)移植治疗视网膜色素上皮细胞变性的效果。方法:采用酶-机械分离-酶消化法获取高纯度、高活力的IPE细胞用于移植,采用外路法将IPE细胞悬液移植入视网膜下腔。结果:IPE移植术后患者眼底移植区色素沉着减少,未见渗出,出血,视网膜平,视力入院时的0.15,术后2wk提高至0.2。多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升。结论:自体虹膜色素上皮细胞移植有望成为视网膜色素上皮细胞变性疾病治疗的一新方法。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2008年03期）
陈艳,罗敏,张健[8]（2007）在《兔眼虹膜色素上皮细胞自体视网膜下移植的研究》一文中研究指出目的探讨兔眼虹膜色素上皮(IPE)细胞的自体移植技术并进行术后移植区的细胞形态学观察。方法通过虹膜全切法获取10只新西兰白兔的虹膜,采用酶-机械分离-酶消化的方法分离IPE细胞,用5溴脱氧尿嘧啶(5-Brdu)标记原代或一代的细胞。将标记过的IPE细胞悬液通过内路法分别植入对侧眼的视网膜下腔。术后2、4、6周摘除眼球对移植区进行光镜、电镜检查。结果经免疫学鉴定纯化培养了兔眼IPE细胞。术后光镜显示移植的IPE细胞成单层贴附在原始的视网膜色素上皮(RPE)细胞上。电镜结果证实移植的IPE细胞尖端微绒毛与光感受器外节连接,邻近的光感受器细胞显示正常结构。结论采用内路法可成功地将细胞悬液植入家兔视网膜下腔。6周内移植的自体IPE细胞在视网膜下腔存活,与原先的RPE细胞生长状态类似,邻近的光感受器细胞无形态改变。(本文来源于《眼科研究》期刊2007年11期）
王欣玲,于韬,张国刚,阎启昌,张劲松[9]（2007）在《层黏连蛋白体外对人虹膜色素上皮细胞的影响》一文中研究指出目的:研究不同浓度的层黏连蛋白对体外培养的人虹膜色素上皮细胞(IPE)的作用。方法:采用酶辅助的显微分离法对成人眼进行IPE的原代和传代培养,观察其形态;以不同浓度的层黏连蛋白(0,1,5,10mg/L)处理第3代IPE细胞,MTT法作出生长曲线,免疫荧光法检测细胞角蛋白1(CK1)表达的变化。结果:原代培养的IPE细胞内色素丰富,而传代培养后色素显着减少;低浓度层黏连蛋白(5mg/L)明显促进IPE细胞增殖(0.187vs0.151,0.236vs0.176,0.245vs0.215,0.261vs0.238,0.279vs0.254;P<0.05);高浓度(10mg/L)明显抑制细胞增殖(0.121vs0.151,0.081vs0.176,0.094vs0.215,0.065vs0.238,0.078vs0.254;P<0.05);CK1染色均为阳性,高浓度层黏连蛋白(10mg/L)使IPE细胞聚集,CK1表达明显增强。结论:层黏连蛋白对IPE细胞具有双重作用,低浓度的层黏连蛋白适于IPE细胞的体外培养。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2007年03期）
张厚亮[10]（2007）在《微囊化猪虹膜色素上皮细胞纹状体移植治疗帕金森病大鼠的实验研究》一文中研究指出帕金森病(Parkinson's disease，PD)是以黑质多巴胺神经元变性为特征的疾病，细胞移植是有前景的治疗方法。寻找合适的供体细胞是PD细胞移植的关键问题之一。虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelium，IPE)在解剖结构上和睫状体上皮细胞等相连，为单层上皮细胞，其下可见基底膜，可与基质分离。近年来发现体外培养的IPE含有多种生长因子，如碱性成纤维细胞生长因子，胶质源性神经生长因子，脑源性神经生长因子，色素上皮生长因子等。这些生长因子对于保护神经细胞、促进细胞的生长和发育有一定作用。虽然目前未见IPE细胞分泌多巴胺的报道，但是IPE细胞胞浆中含有黑色素颗粒，考虑到多巴胺和黑色素的产生有着共同的通路，所以我们检测了体外培养的IPE细胞，我们发现IPE细胞可以分泌多巴胺和多种神经营养因子，并可以结合铁离子，所以我们认为IPE细胞可以作为帕金森病移植治疗的细胞来源。免疫排斥是细胞移植的难题，海藻酸钠—多聚赖氨酸是一种生物相容性良好的半透膜材料，用它来包裹移植物可以很好起到免疫隔离的作用。本实验旨在：1．详细研究猪IPE细胞体外多巴胺及神经营养因子的分泌特性。观察失去光线刺激的外环境是否会影响其功能，为其下一步的移植奠定基础。2．将该细胞用海藻酸钠—多聚赖氨酸包裹制作成微囊后，观察微囊包裹对细胞活性和其分泌特性的影响。3．将微囊包裹后的IPE细胞立体定向植入PD大鼠模型的纹状体，观察移植后疗效。第一部分猪IPE细胞的体外原代培养及鉴定目的：建立稳定的猪IPE细胞原代培养、纯化及鉴定方法。方法：酶消化法获取猪IPE细胞，纯化及传代后，观察细胞形态及生长状况；绘制细胞生长曲线；免疫细胞化学方法鉴定细胞：细胞角蛋白(cytokeratin)和S—100的表达，统计阳性细胞数，分别计算原代和传代后阳性细胞率。结果：细胞胞浆内含有大量黑色素颗粒；细胞经纯化、传代后，cytokeratin和S—100表达阳性率均较原代提高，P＜0.05；细胞生长曲线显示：传代后第2～3天为指数生长期，3天以后为平台期。第二部分猪IPE细胞体外生物学特性研究目的：观察猪IPE细胞体外DA、神经营养因子的分泌特性和铁结合能力，以及失去光照的环境是否对IPE细胞功能产生影响。方法：收集第1、2、3、4、5、6代IPE细胞传代后48h的培养上清液，高效液相色谱—电化学法(HPLC)检测样品中的DA含量；第2代IPE细胞分为正常培养组、光照组和遮光组，收集各组传代后第4，8，12，24，36，48，60，72h的培养上清液，HPLC法测定DA含量；ELISA法检测BDNF、GDNF、NT-3和NGF的分泌量；并测定IPE细胞结合铁的能力。免疫细胞化学法检测IPE细胞中TH的表达；RT-PCR方法检测该细胞中TH mRNA的表达。结果：第2代IPE细胞在传代后4h开始检测到多巴胺的分泌，分泌量在48h达高峰，以后缓慢下降并趋稳定；GDNF、BDNF、NT-3和NGF的分泌以及铁结合力较为恒定，随着培养时间的延长，并没有明显变化。传代后各代IPE细胞DA分泌量无显着区别；光照组的DA分泌在前16小时和其他两组无差别，16小时后的DA分泌明显高于其他两组(P＜0.05)。HVA、GDNF、BDNF、NGF和NT-3的分泌在各组之间没有明显差别(P＞0.05)。遮光组的铁结合力似乎低于其他两组，但是没有统计学意义。免疫细胞化学法检测到IPE细胞中有TH的表达；RT-PCR方法检测到IPE细胞内有TH mRNA的表达。第叁部分海藻酸钠微囊的制作及微囊对IPE细胞生物活性的影响目的：优化适合IPE细胞的微囊制作条件。观察微囊化对细胞分裂以及DA、神经营养因子分泌情况的影响。方法：应用高压静电式微囊成型装置制备海藻酸钠-多聚赖氨酸微囊化细胞，摸索最适合的制备参数；显微镜下观察微囊的形态，并测量微囊的直径，用移植所用的针头来回抽吸微囊观察其强度；显微镜下观察囊内细胞的生长状况，并在第0、3、6、9、12天破囊后进行细胞计数并用台盼兰染色法检测囊内细胞存活率；将微囊化和非微囊化两组细胞在接种后第1～6天收集培养上清液，检测其中DA、HVA、BDNF、GDNF、NGF以及NT-3的量，观察微囊包裹对其分泌特性的影响，并检测铁结合力。结果：制备微囊的最佳参数为：室温18～20℃，内层海藻酸钠浓度为2.4％，外层海藻酸钠浓度为0.24％，液面高度为22～25mm，成囊电压为3.28kv；微囊形态接近正圆，表面光滑，大小均一，直径为：275±23μm。微囊经针头抽吸后未见破损；微囊内细胞的总数没有明显变化；细胞微囊化后培养60h内，微囊组的DA分泌与非微囊组相比明显增加；60h以后，二者无显着差异。微囊内细胞HVA、BDNF、GDNF、NGF、NT-3的分泌量与非微囊组细胞相比无显着差异。铁结合力二组之间没有显着性差别。第四部分PD大鼠模型的建立及IPE细胞的移植目的：建立稳定的6-OHDA毁损的偏侧PD大鼠模型，确立可靠的行为学评价指标。观察微囊化IPE细胞移植到模型大鼠纹状体的疗效。方法：1．模型的制备及鉴定：6—OHDA毁损内侧前脑束(medial forebrain bundle, MFB)建立PD大鼠模型，通过旋转试验、组织病理证实，并评价其它行为学指标是否有效。2．移植分组：分为IPE细胞+微囊组；空微囊组；单纯手术损伤组，进行右侧纹状体两点立体定向移植，分别植入2×10~4个IPE细胞、约280个含细胞的微囊，相应的对照组注射等量的生理盐水和空微囊。3．移植后的检测：观察移植后大鼠旋转行为以及其他行为学指标的变化；HPLC法测定各组纹状体区DA和HVA的含量。移植后第12周，取大鼠脑进行TH的免疫组化染色。提取移植区周围组织的蛋白，电泳后观察移植物是否影响移植区周围脑组织的蛋白合成。结果：1．大鼠模型经旋转试验、组织病理鉴定模型成功。2．行为学指标：调整步态、启动时间、单足运动的步距和速度是有效的行为学指标，自由运动的步距和速度不适合作为PD大鼠模型的行为学评价指标。3．移植后IPE+微囊组：33％的大鼠(10只)旋转行为在移植后第1周开始逐渐改善，至第4周改善更加明显(与其他组相比，P＜0.05)，几乎不旋转，一直持续到本试验结束(第12周)。二次移植治疗的大鼠从第二次治疗的时间开始计算，仍有20％的大鼠(4只)有效。总的计算，有约47％的大鼠(14只)治疗有效。这些出现疗效的大鼠的调整步态、启动时间、单足运动的步距和速度均明显改善。其他两组移植后行为学无明显改善。各组移植后纹状体DA含量的变化同其行为学改善相符合。4．组织免疫化学发现大部分微囊形态不规则，囊壁皱缩，但囊壁完整、未见破损。微囊内可见散在的圆形细胞。行为学得到改善的大鼠纹状体TH染色显示囊内细胞呈阳性，微囊周边的纹状体可见TH阳性纤维密度较空微囊组和单纯损伤组明显增高。5．移植区周围组织的蛋白和对侧相比没有明显差别。6．IPE+微囊组中有1只大鼠移植后2周左右出现严重的扭转痉挛，解剖后发现形成肿瘤样组织。结论1．猪IPE细胞取材方便，易于分离、纯化，体外生长、增殖活跃。机械-酶消化法获得的细胞经免疫细胞化学鉴定证实为IPE细胞，传代后细胞纯度提高。2．猪IPE细胞体外基础状态下即能分泌少量DA、GDNF、BDNF、NT-3和NGF，并具有结合铁的能力。这些功能不受传代的影响。光照会使DA分泌增加，其它功能不受影响。IPE细胞中还检测到TH mRNA及蛋白的表达。3．用高压静电微囊成型装置制备的APA微囊形态、大小、均匀度及强度均十分理想。微囊内的细胞不增殖。IPE细胞的DA、GDNF、BDNF、NT-3和NGF的分泌以及结合铁的能力不受微囊包裹影响。4．6—OHDA毁损MFB建立偏侧大鼠模型的成模率高。调整步态、起动时间、单足运动的步距和速度是有效的行为学评价指标。5．微囊化猪IPE细胞的纹状体移植对PD大鼠模型有治疗作用。疗效均持续至移植后12周。移植物对移植区周围脑组织的蛋白合成不造成明显影响。有1只大鼠移植区出现肿瘤。(本文来源于《复旦大学》期刊2007-04-15）
猪虹膜色素上皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因转染的虹膜色素上皮细胞(AAV-BDNF-IPE)移植入皇家外科学院(royal college of surgeons,RCS)大鼠视网膜下腔后,不同时期视网膜组织BDNF表达变化。方法通过外路途径将BDNF基因转染的虹膜色素上皮细胞移植到RCS大鼠视网膜下腔,术后3、5、7、9、11周分别取RCS大鼠手术眼及对照组动物眼视网膜组织,用酶联免疫吸附法(Elisa)检测视网膜组织中BDNF的表达水平,比较分析这些数据。结果对照组RCS大鼠出生后3周龄时视网膜组织中BDNF仍保持较高水平,其后迅速降低,其中3周龄组与其它周龄组比较,P<0.01;手术组RCS大鼠术时、术后3、5、7、9、11周各组间两两比较,BDNF表达无显着差异(P>0.05);出生后6周龄直到14周龄的不同时期,AAV-BDNF-IPE移植手术组RCS大鼠视网膜BDNF表达水平均明显高于对照组(其中6周龄组P<0.05,其它各周龄组P<0.01)。结论 BDNF基因转染的虹膜色素上皮细胞在RCS大鼠视网膜下腔移植后,视网膜组织中BDNF可以持续稳定高水平表达,这为临床开发新的神经营养因子给药方式提供了实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪虹膜色素上皮细胞论文参考文献
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