MCFP敲除小鼠肝脏线粒体功能异常

论文摘要

目的研究线粒体载体家族蛋白(MCFP)基因敲除对小鼠肝脏线粒体功能的影响。方法利用CRISP/Cas9技术建立MCFP基因敲除小鼠模型,并检测小鼠体质量、脏器系数、血生化以及糖代谢情况。分离小鼠原代肝实质细胞检测线粒体膜电位。提取肝脏线粒体,检测三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,利用非变性凝胶电泳偶联凝胶内酶活染色,检测线粒体呼吸链复合体活性。结果与同窝对照小鼠相比,MCFP敲除小鼠生理指标无明显差异,但线粒体膜电位及ATP水平降低,呼吸链复合体活性下降、ROS升高、SOD活性下降、MDA含量增加。结论 MCFP基因敲除造成肝脏线粒体功能异常,提示MCFP在线粒体抗氧化损伤及合成ATP过程中发挥重要调控作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•    1.1 材料
•      1.1.1 小鼠来源
•      1.1.2 主要试剂
•    1.2 方法
•      1.2.1 小鼠基因型鉴定
•      1.2.2 葡萄糖耐受实验（glucose tolerance test,GTT）
•      1.2.3 丙酮酸耐受实验（pyruvate tolerance test,PTT）
•      1.2.4 胰岛素耐受实验（insulin tolerance test,ITT）
•      1.2.5 小鼠原代肝实质细胞分离
•      1.2.6 肝线粒体分离
•      1.2.7 JC-1法检测线粒体膜电位
•     1.2.8非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
•      1.2.9 凝胶内酶活性染色
•      1.2.1 0 肝细胞活性氧（ROS）检测实验
•      1.2.1 1 肝超氧化物歧化酶（SOD）活性检测
•      1.2.1 2 肝丙二醛（MDA）检测
•    1.3 统计学处理
• 2结果
•   2.1小鼠基因型鉴定
•   2.2 MCFP敲除小鼠体质量、脏器比、血生化及代谢分析
•   2.3 MCFP敲除小鼠肝线粒体功能受损
•   2.4 MCFP敲除小鼠肝线粒体呼吸链复合体活性下降
•   2.5 MCFP敲除小鼠肝氧化应激增加
• 3讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周斌,陈慧,翟华立,王宪,杨晓明,于淼

关键词: 线粒体载体家族蛋白,小鼠,基因敲除,线粒体功能,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,呼吸链复合体,氧化应激,氧化损伤

来源: 军事医学 2019年08期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所,蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心国家蛋白质科学中心(北京)

基金: 蛋白质组学国家重点实验室项目（SKLP-K201404）

分类号: R329.2

页码: 592-597

总页数: 6

文件大小: 2012K

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