Annexin A2基因敲除MDCK细胞系的构建

论文摘要

应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中,用嘌呤霉素筛选敲除Annexin A2蛋白的MDCK细胞株,并通过测序和Western blot验证敲除效果。通过细胞毒性试验验证MDCK细胞膜表面的Annexin A2蛋白是否为ε毒素的受体蛋白。测序结果和Western blot结果表明,通过Crispr/Cas9技术成功敲除了MDCK细胞的Annexin A2基因,但细胞毒性试验结果表明,敲除Annexin A2基因并不能减弱ε毒素对MDCK细胞的毒性。结果表明,Annexin A2蛋白不是ε毒素在MDCK细胞表面的受体,研究结果为今后MDCK细胞其他蛋白的敲除提供了试验方法,构建的Annexin A2基因敲除的MDCK细胞也为Annexin A2蛋白引起的其他疾病的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 设计靶点及引物
•     1.2.2 构建重组质粒
•     1.2.3 抗生素筛选预试验
•     1.2.4 细胞转染及筛选
•     1.2.5 验证敲除结果
•       1.2.5.1 测序验证
•       1.2.5.2 免疫印迹验证分析
•     1.2.6 细胞毒性试验
• 2 结果
•   2.1 lentiCRISPR v2重组质粒的构建
•   2.2 抗生素筛选预试验结果
•   2.3 细胞转染及筛选
•   2.4 测序验证
•   2.5 敲除株Annexin A2蛋白的检测
•   2.6 MDCK细胞毒性试验结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄静,高洁,夏苏苏,金志颖,康琳,高姗,杨浩,辛文文,赵宝华,王景林

关键词: 技术,基因敲除,细胞系

来源: 动物医学进展 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,河北师范大学

基金: 国家自然科学基金项目(31500108)

分类号: S852.61

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.05.003

页码: 13-17

总页数: 5

文件大小: 1096K

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