葡萄实时荧光定量PCR稳定内参基因的筛选和验证

论文摘要

选择稳定的内参基因是实时荧光定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR, qPCR）分析的重要条件。本研究采用不同品种、季节和组织部位葡萄样品为研究材料,利用qPCR测定了19个候选内参基因相对表达量,并采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper等3个软件对候选内参基因表达稳定性进行分析评价。3个软件分析结果表明,表达最稳定的3个内参基因均为GAPDH、UBQ-1和EF1α-1。为验证内参基因稳定性,以筛选出的GAPDH、UBQ-1和EF1α-1为内参,对感染葡萄病毒E （Grapevine virus E, GVE）的不同部位葡萄样品中GVE相对表达量进行qPCR分析。结果表明,GAPDH、UBQ-1和EF1α-1分别单独作内参和3个基因组合作为内参进行相对定量时,GVE在植株不同部位样品中的相对表达量变化趋势基本一致,表明这3个内参基因在葡萄不同组织部位中稳定表达,适合作为葡萄qPCR分析的内参基因。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 RNA提取质量检测
•   1.2 内参基因引物特异性熔解曲线分析
•   1.3 内参基因稳定性分析
•     1.3.1 GeNorm分析
•     1.3.2 NormFinder分析
•     1.3.3 BestKeeper分析
•   1.4 内参基因的选择及稳定性验证
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 材料及取样
•   3.2 总RNA提取及cDNA合成
•   3.3 候选内参基因
•   3.4 实时荧光定量PCR扩增
•   3.5 数据分析
•   3.6 内参基因选择及稳定性验证

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李晨,董雅凤

关键词: 葡萄,内参基因,实时荧光定量

来源: 分子植物育种 2019年23期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 园艺

单位: 中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心

基金: 国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS-29-bc-1),中国农业科学院科技创新工程(CAASASTIP-2018-RIP-05)共同资助

分类号: S663.1

DOI: 10.13271/j.mpb.017.007801

页码: 7801-7810

总页数: 10

文件大小: 2881K

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