导读:本文包含了重链可变区论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,噬菌体,层析,免疫球蛋白,地中海,引物,病毒。
重链可变区论文文献综述
石彬,马嘉欣,涂文静,吴皓明,陈先恋[1]（2019）在《人免疫球蛋白重链可变区基因的特征分析》一文中研究指出目的:分析五类免疫球蛋白重链可变区基因的特征.方法:收集IMGT/LIGM-DB数据库中人类五类Ig重链可变区的基因序列,利用IMGT/HighV-QUEST分析其基因取用、V区AA变化、CDR3氨基酸长度和构成以及连接多样性.结果:IgM、IgG和IgE均较多地取用IGHJ4、IGHV1-69和IGHV5-51,且在IgM、IgG、IgA与IgE中可观察到几个相似的优势V-J配对.IgD具有较高的V区突变,主要体现在FR3区的高突变(AA变化值为7.2±2.4),而IgM的每个结构域的突变均明显低于其他类Ig.此外,IgD具有较高P插入发生率和插入核苷酸数明显多于其他四类Ig.结论:本研究从基因特征上描绘了人类五类Ig相互间的相似性与差异性,这些结果可为抗体工程领域提供重要参考数据.(本文来源于《聊城大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
杜丽娟[2]（2016）在《山羊胚系免疫球蛋白重链可变区基因座结构及多样性机制分析》一文中研究指出免疫球蛋白是动物获得性免疫系统的重要组成部分,存在于鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类所有的有颌动物中。目前关于免疫球蛋白的结构和表达机制的认识大多是以人或者小鼠为模型获得的,对这些机制在家养动物中的认识还比较少。山羊是重要家畜之一,以其作为试验模型研究免疫球蛋白的结构和表达特点,一方面可以了解其免疫球蛋白基因表达的分子机制,另一方面也可以为深入理解其抗病机理、开展抗病育种工作提供理论基础。本试验以西农萨能奶山羊作为研究对象,利用公布的山羊基因组数据库,通过体外克隆免疫球蛋白重链重组的可变区序列并与胚系基因比对,探究其基因座结构和多样性机制,获得如下结果:以已克隆的山羊免疫球蛋白可变区序列(NCBI登录号:EU344746-EU344750)作为种子序列在山羊基因组数据库中进行搜索,发现重链可变区VH基因分布在5个基因组Scaffold片段上,共8个基因序列,根据核苷酸相似性分成两个家族,其中第一家族包括3个潜在功能基因、1个开放阅读框片段和2个假基因片段,与绵羊第一基因家族和小鼠第二家族基因亲缘关系较近;第二家族包含2个假基因片段。3个DH片段和6个JH片段位于基因组Scaffold1847上。DH基因呈5’-DH1-DH2-DH3-3’结构排列,全部为功能基因。JH基因以5’-ψJH1-ψJH2-ψJH3-JH1-ψJH4-JH2-3’结构排列,其中JH1和JH2为功能基因,ψJH1、ψJH2、ψJH3和ψJH4是假基因。从山羊脾脏中克隆重链重组的可变区,共得到238个不同的cDNA片段。分析显示:山羊重链对可变区3种基因片段的使用均具有一定的偏好性。在所有克隆中,IGHV1-2片段表达偏好性最强;JH1的使用频率高于JH2。在225个克隆中鉴定出重排的DH片段,偏好使用第叁个开放阅读框;3个DH片段中DH1的表达偏好性最强,其次是DH3片段。在28个克隆中可能存在两个不同DH片段共同连接的情况。CDR3的长度在5~27个(平均长度为11.33)氨基酸残基。所有cDNA序列同3个潜在功能VH片段比对,分析体细胞高突变过程中碱基的替换突变和插入/缺失情况,结果显示:碱基发生转换突变的频率均高于颠换,其中以A→G的突变数目最多,其次为G→A;总体嘌呤发生替换的比例是嘧啶的2倍左右;不同区段的替换数表现为CDR2区高于CDR1,FR3区高于FR1和FR2。碱基的插入/缺失主要在CDRs区,数目多为3或者3的倍数。综上,本研究揭示了山羊免疫球蛋白重链可变区的基因座结构,并阐述了VDJ重组多样性和体细胞高突变机制对于多样化重链可变区表达谱的重要作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-05-01）
杨沙,文李艳,朱平,陈礼杰,刘艳君[3]（2014）在《肿瘤细胞来源IgG重链可变区糖基表位模拟肽的筛选与鉴定》一文中研究指出研究背景:非B细胞来源Ig(non-Ig)不仅在多种肿瘤细胞中存在,在肿瘤恶化、迁移和增殖中也具有重要作用。2008年,Lee发现肿瘤细胞来源的IgG重链成份(CA215)和正常人IgG高度同源,单抗RP215可特异性识别肿瘤Ig重链可变区特殊的糖基表位(CA215C),但不识别正常人Ig。在卵巢癌、宫颈癌、结肠癌等多种肿瘤组织和患者血清中,CA215检测呈阳性;RP215单抗不仅能在体外实验中抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡,还可有效抑制裸鼠体内的肿瘤增长。因此,作为一种泛肿瘤标志,CA215可作为肿瘤诊断和治疗的新靶点。由于CA215是糖基表位,属于TI抗原,限制了其直接成为疫苗候选靶点的可能性。本研究以单抗RP215为靶分子,利用噬菌体展示肽库技术可将其转化为肽表位。目的:筛选肿瘤细胞来源的IgG重链可变区糖基表位的模拟肽,探索用于治疗性肿瘤疫苗的新候选表位。方法:用特异性识别肿瘤来源Ig重链可变区特殊糖基表位CA215的单克隆抗体RP215作为钓饵分子,筛选噬菌体12肽库,双夹心ELISA鉴定噬菌体克隆,根据阳性克隆的DNA序列,合成线性肽并鉴定其与RP215的结合。以BSA为载体交联线性肽免疫小鼠,并对其免疫血清进行鉴定。结果:以RP215为钓饵蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选后,得到22个可与RP215结合的噬菌体克隆,经DNA序列分析显示,其中17个克隆的氨基酸序列中包含5组保守序列,其余5个克隆的序列均不相同。经对比后选择3个序列进行肽合成,经ELISA检测表明其中两个序列R-2和R-42合成肽可特异地与单抗RP215结合。以BSA为载体的合成肽交联物免疫的小鼠抗血清可与CA215特异性结合,并能有效竞争抑制RP215和CA215的结合。结论:筛选得到的噬菌体克隆及合成线性肽R-2/R-42可与RP215特异性结合,合成线性肽和BSA交联后免疫小鼠得到的抗血清具有和RP215相似的特性,提示该合成肽可能为肿瘤细胞来源IgG重链可变区特殊糖基结构CA215的表位模拟短肽。(本文来源于《第九届全国免疫学学术大会论文集》期刊2014-10-18）
包英夫,宋德光,贺文琦,张希牧,李吉达[4]（2014）在《抗ORFV免疫球蛋白重链可变区基因序列的RT-PCR扩增及其多样性》一文中研究指出利用RT-PCR方法从羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染绵羊脾脏总RNA中扩增获得免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)重链可变区cDNA克隆,随机挑选52个阳性克隆进行测序,获得49条完整的不重复序列。序列比对结果显示,49条序列的核苷酸同源性分别为84.3%(H7与H38)~100%(H5与H6)不等;绵羊IgH可变区V片段氨基酸聚类结果显示,克隆H1~H49的VH区段自动聚类为2个相对独立的单位。通过BLAST-N程序在GenBank数据库在线搜索,并结合其他参考序列进行比较分析,分析数据显示,D片段从9到46个碱基长度不等,无论是在核苷酸还是氨基酸序列上,其同源性均存在高度的变异性;结合其亲水性分布图可知,可变区的亲水性氨基酸主要分布在VH区域和D高变区,对照抗原指数图和表面可能性图,亲水性强的VH区域和D高变区易形成抗原决定簇。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2014年04期）
文李艳[5]（2013）在《（--~(SEA)）α地贫基因携带者zeta链荧光微球免疫层析试纸条体系的建立及肿瘤细胞来源IgG重链可变区糖基表位模拟肽疫苗候选的初步研究》一文中研究指出第一部分摘要东南亚型(--SEA) a地中海贫血是世界上常见的人类单基因遗传病之一,主要集中在东南亚及我国广西、广东和海南叁省。其基因携带率达到4.5%-14%,是造成重症α地贫(Bart's水肿胎和Hb H病)的主要类型。通过基因检测筛查适龄人群中(--SEA)缺失型α地贫基因携带者是实现预防地贫的有效手段。但是基因检测需要特殊仪器设备及技术培训,且检测费用高,难以在基层医院普及,从而限制了地贫基因携带者的大规模筛查。Zeta珠蛋白链是胚胎期特有的血红蛋白成分,在出生3个月后不再被检出。1988年,Chui等发现(--SEA)缺失型α地中海贫血的基因携带者的成人血红蛋白中仍可检出微量的zeta链,从而开辟了一条筛查α地贫的新途径。目前目前检测zeta链的主要方法包括反向高效液相层析(RHPLC),免疫细胞化学(immunocytochemistry)及酶联免疫吸附测定(ELISA)。其中ELISA法特异敏感、操作简便,可进行高通量检测。本实验室已成功研制出国内第一个双抗体夹心ELISA试剂盒,并已应用于临床和大规模筛查。然而ELISA由于需要特殊的仪器设备,专业的技术人员,历时约2h的检测时间,使其在个性化检测和现场筛查中的应用受到限制。因此,研究和开发更加简单快速,适用于高通量和个性化检测的新技术势在必行,这也是本课题研究的目的。免疫层析法(ICA)操作简单快速、成本低,只需肉眼判断或简单仪器便可判读结果,适用于个体化和现场大规模检测。目前,ICA已广泛用于疾病或违禁添加物的定性或半定量检测。免疫层析技术常见的标记物有胶体金、磷光微粒、乳胶、明胶等,其中运用最普遍的标记物是胶体金,已成功应用于筛检和监测多种物质,包括抗生素、病原体和药物。但胶体金免疫层析法用于检测血液红细胞裂解标本时,血红蛋白的红色背景则会对胶体金颗粒形成的反应线造成干扰,因胶体金颗粒多为红色或橙红,个别为蓝灰,从而影响结果判读,这也是至今无检测血红蛋白的免疫层析试纸条的主要原因之一。为解决血红蛋白在ICA检测中红色背景的干扰,并保证较理想的灵敏度,本课题使用荧光乳胶微粒代替胶体金作为标记物,建立了检测zeta链的荧光微球免疫层析试纸条(FL-ICA)。该检测体系简单快速,检测器为市售验钞笔,在10min之内即可显示结果。以分子生物学基因诊断为金标准进行核准,运用本体系及双抗体夹心ELISA检测314份血液样本,结果显示本体系的特异性为100%,灵敏度为98.0%,而ELISA的为100%,99.2%,提示本实验建立的免疫荧光试纸条体系具有良好的灵敏度和特异性。一、免疫层析试纸条基本组成及荧光ICA建立层析试纸条的基本组成主要由样品垫、带有荧光微球标记单抗3H9的结合垫、分别包被了兔抗鼠IgG和单抗4D11作为质控C线和检测T线的硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸这四个基本部分组成。免疫层析试纸条的结果判断检测过程中,用最佳激发光源对滞留硝酸纤维素膜的反应线的荧光微球标记物进行激发,根据NC膜的条带显示情况来判断检测结果。只有质控C线显色,为阴性结果；质控C线和检测T线均显色,为阳性结果；质控C线若不显色,则该试纸条无效。二、荧光ICA体系的条件优化根据本实验室已建立并获得国家批文的双单抗夹心ELISA体系,在荧光免疫层析试纸条中,仍以单抗4D11作为捕获抗体,荧光微球标记3H9为检测抗体。主要根据以下3个方面的标准进行免疫层析试纸条的条件优化：①血液样本滴加到样品垫后跑样是否顺畅均匀；②结合垫荧光标记单抗释放是否理想；③NC膜质控C线和检测T线显色是否正确明亮。最终确定条件为：采用粒径为100nm的荧光微球作为标记物,按照每毫克荧光微球标记25ug抗zeta链单抗3H9的比例进行标记；每厘米聚酯纤维膜喷涂6ul FL-3H9的比例,用浸泡的方法将FL-3H9固化到结合垫上；NC膜上检测T线的划线浓度为3mg/ml时,有利于避免假阴性和假阳性；血液标本先用ddH20充分裂解后,再用含脱脂奶粉的生理盐水稀释,可有效减少假阳性和假阴性的发生。叁、荧光免疫层析试纸条在zeta链检测中的应用将经过优化的各组成部分——样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸组装成试纸条,用于检测正常血液标本和(_SEA)缺失型α地贫基因携带者。结果显示,检测正常血液只有质控C线显色,为阴性结果；检测携带者血液标本时,质控C线和检测T线均显色,为阳性结果。经过实验证明,本研究建立的荧光免疫层析试纸条具有良好的敏感性,(--SEA)缺失型α地贫基因携带者血液稀释度达到1250倍时,FL-ICA仍可检测出阳性。用试纸条和双抗夹心ELISA同时检测314份血液标本,同时以分子生物学诊断作为金标准进行核准。两种免疫学方法的特异性均为100%,灵敏度FL-ICA为98%,ELISA为99%,该结果提示我们建立的荧光微球免疫层析试纸条具有良好的特异性和灵敏度,符合临床检测要求。第二部分摘要免疫球蛋白(Ig)是重要的免疫分子,经典的免疫学理论认为其来源为B淋巴细胞。2003年,邱晓彦教授在Cancer research上发文首报上皮来源肿瘤也可产生Ig分子。其工作在基因水平和蛋白水平上证明一些非免疫细胞,如上皮来源的多种肿瘤细胞及部分正常的上皮细胞也可以表达Ig分子,成为非B细胞来源Ig(non-Ig)。此观点已逐步得到国内外学者的认同,并且陆续有研究证明,non-Ig不仅在多种肿瘤细胞中存在,而且在肿瘤恶化、迁移和增殖中具有重要作用。2008年,Lee发现肿瘤细胞来源的IgG重链成份(CA215)和正常的人IgG高度同源,在其重链可变区存在一段特殊的糖基表位(CA215C),该表位可被单克隆抗体RP215特异性识别。其工作证明了在卵巢癌、宫颈癌、结肠癌等多种肿瘤组织和病人血清中,CA215检测呈阳性；用其特异性单抗RP215处理,不仅能抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡,还可以有效抑制裸鼠体内的肿瘤增长。因此,作为一种泛肿瘤标志,CA215可作为肿瘤诊断和治疗的新靶点。目前Lee已将单抗RP215进行人源化以作为治疗用抗体。而以CA215为靶点进行免疫治疗的另一途径是治疗性肿瘤疫苗。然而,由于CA215是非蛋白抗原的糖基表位,属于非胸腺依赖抗原(TI抗原),免疫原性弱,难以诱导再次抗体应答,且不能诱导特异性细胞免疫,这就限制了CA215C直接成为疫苗候选靶点的可能性。本课题的主要研究思路是：利用Lee提供的单抗RP215从噬菌体展示随机肽库中筛选可模拟CA215的特殊糖基表位CA215C的短肽,将其非蛋白抗原表位的性质改变为短肽,进而制备短肽-载体蛋白交联物或多价抗原肽(MAP),从而将TI抗原改变为TD抗原,目的在于诱导机体内产生有效的再次抗体应答和保护性免疫。我们用单抗RP215从噬菌体12肽随机展示肽库中筛选了数十个模拟位克隆,最终选择了叁个模拟CA215C表位的序列合成短肽,制备了短肽-BSA载体交联物,免疫接种所获的小鼠抗血清体能有效识别CA215,并且和人正常IgG不结合,即模拟肽可能成功模拟了CA215C的抗原表位。一、应用噬菌体展示技术筛选CA215C模拟肽克隆可结合单抗RP215并模拟CA215C表位克隆的筛选RP215(ATCC HB-10095)由加拿大哥伦比亚大学Lee教授提供,该单抗经鉴定可结合肿瘤细胞来源的CA215C,以该单抗为钓饵分子从噬菌体线性12肽随机展示肽库筛选可与抗体结合,即模拟CA215C表位的噬菌体克隆。对噬菌体12肽库进行了3轮筛选后,从第叁轮洗脱产物中随机挑选50个噬菌体克隆,用夹心ELISA鉴定,单抗PR215作为捕获抗体包被酶标板,并以无关对照排除非特异吸板序列,得到33个可以和RP215结合的阳性克隆。阳性噬菌体测序及序列分析在上述33个阳性噬菌体克隆中挑选30个进行DNA测序,并对其氨基酸序列进行分析,最终得到5组保守序列特征。其中,第1、2、5、6、11、31号克隆具有保守序列Ⅰ:E-LWR;第4、12、25、36号克隆具有保守序列Ⅱ:E-HWR;第18、21、39号克隆具有保守序列Ⅲ:E-WR;第3、40号克隆具有保守序列Ⅳ:EDLW;:第7、42号克隆具有保守序列Ⅴ:E-LW.其中I、II、III这3组序列均含有E-(-)wR；I.IV.V这3组序列均含有E-(-)LW.二、模拟肽的合成及抗原性鉴定模拟肽序列优势选择为了在5组保守序列组共17个短肽序列中选择出优势序列,通过包被不同浓度的RP215检测不同保守序列组的代表性样本,以及包被低浓度的RP215检测同一保守序列组的不同样本,最终选择和RP215亲和力较好的保守序列I中的No.2、保守序列V中的No.42以及无规律序列组中的NO.13序列短肽进行了合成。模拟肽的抗原性鉴定体外ELISA鉴定结果表明,以生物素标记的3种线性模拟肽R2,R13,R42中,R2和R42能够特异性结合抗CA215C单抗RP215,而R13与RP215无明显结合；竞争抑制实验结果显示,R2和R42均能剂量依赖性地抑制相应噬菌体2号和42号与RP215的结合,抑制效果可达到70%以上。上述结果提示,R13线性肽未能模拟CA215C表位的抗原性,而R2和R42线性肽模拟了相应噬菌体中与RP215结合的保守短肽序列,并可能模拟了CA215C的某一抗原性表位。叁、模拟肽的免疫原性评价不同载体的模拟肽交联物的特异性鉴定将2种合成模拟肽R2/R42分别与鼠IgG(模拟肽-mIgG)和BSA作为载体制备交联(模拟肽-BSA)抗原,鉴定其与RP215、羊抗人IgG多抗的结合。实验结果显示,R2/R42和鼠IgG交联后,交联物不仅可以和RP215结合,也能和羊抗人IgG结合；而R2/R42和BSA交联后,交联物均不能羊抗人IgG结合,但仍然可以和RP215结合。提示模拟肽和鼠IgG交联后,可能形成了和人正常IgG的交叉表位；而模拟肽R2/R42和BSA交联后,仍保留了与RP215结合的表位,并且和人正常IgG没有交叉表位。以模拟肽-BSA交联物的免疫原性评价以BSA为载体的2种模拟肽交联物与弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠,小鼠的抗血清可以和CA215结合,并且和人正常IgG没有交叉反应；另外,抗血清能有效抑制CA215和RP215的结合。结果提示,抗血清含有针对CA215C的抗体,合成肽可能模拟了CA215C上的某一抗原表位。(本文来源于《南方医科大学》期刊2013-04-25）
李慧瑾,李研,孙晶莹,高锦伟,赵向绒[6]（2013）在《甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析》一文中研究指出目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果:巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论:建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2013年01期）
周世权,廖智,杨林,周吉航,刘晓光[7]（2012）在《从兔外周血直接克隆IgG重链可变区》一文中研究指出目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因。结果获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。(本文来源于《解剖学报》期刊2012年06期）
文李艳,刘艳君,侯晓睿,焦德龙,富宁[8]（2012）在《肿瘤细胞来源IgG重链可变区特殊糖基模拟肽的初步研究》一文中研究指出研究背景和目的:作为一种泛肿瘤生物标志,CA215是多种肿瘤细胞来源的免疫球蛋白,其重链与人Ig G高度同源,但可变区存在可被单抗 RP215特异性识别的特殊糖基表位,可能成为新的肿瘤诊断与治疗靶标。但由于糖基结构是一种非蛋白成分的胸腺非依赖抗原(TI),免疫原性较弱,不能诱导T细胞介导免疫,而且在体内难以诱导有效而持久的保护性免疫。我们拟用噬菌体展示肽库技术,筛选模拟肿瘤细胞来源Ig G重链可变区特殊糖基结构的短肽,为研制抗肿瘤疫苗奠定基础。方法:用特异性识别CA215重链可变区特殊糖基表位的单克隆抗体 RP215作为捕获分子,筛选噬菌体12肽库,双夹心ELISA鉴定噬菌体克隆,根据阳性克隆的保守氨基酸序列合成线性肽并鉴定其与 RP215的结合。结果:对噬菌体12肽库进行3轮筛选后,得到23个可与 RP215结合的噬菌体克隆,经DNA序列分析显示,其中17个克隆的氨基酸序列具有四组保守序列特征,其余6个克隆的序列均不相同。通过双夹心ELISA选择,得到两个优势序列,根据此序列合成的线性肽和鼠Ig G交联后,经ELISA检测表明线性肽和交联物均可特异地和 RP215结合。以此交联物免疫小鼠所获抗血清可与CA215结合。结论:筛选得到的噬菌体克隆及合成线性肽可与 RP215结合,为肿瘤细胞来源Ig G重链可变区特殊糖基结构某段表位的模拟短肽。(本文来源于《第八届全国免疫学学术大会论文集》期刊2012-10-18）
荆琳,龚玖瑜,刘蓉蓉,王颖,宋朝君[9]（2012）在《抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定》一文中研究指出目的:在成功制备小鼠抗人IL-13Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人IL-13Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应。将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因。结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2012年09期）
姜晶,孙颖,刘红艳,牟玲,罗恩杰[10]（2012）在《人免疫球蛋白重链可变区基因引物设计方法的改良》一文中研究指出针对抗体胚系基因数据库的数据不断更新和完善,为获得人全部免疫球蛋白(Ig)重链可变区基因,改进引物设计方法,自主设计针对可变区基因高度保守的框架区1(FR1)和框架区4(FR4)的引物,提取未经免疫的健康人外周血单个核细胞,通过RT-PCR扩增重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列分析符合人免疫球蛋白重链基本框架结构,为胚系基因重排产生的序列。多个克隆的测序结果对比分析显示了良好的多样性。获得的重链序列为研制基因工程抗体及构建噬菌体抗体库奠定了物质基础,也为扩增其他物种Ig可变区基因的引物提供新的设计思路。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2012年02期）
重链可变区论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
免疫球蛋白是动物获得性免疫系统的重要组成部分,存在于鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类所有的有颌动物中。目前关于免疫球蛋白的结构和表达机制的认识大多是以人或者小鼠为模型获得的,对这些机制在家养动物中的认识还比较少。山羊是重要家畜之一,以其作为试验模型研究免疫球蛋白的结构和表达特点,一方面可以了解其免疫球蛋白基因表达的分子机制,另一方面也可以为深入理解其抗病机理、开展抗病育种工作提供理论基础。本试验以西农萨能奶山羊作为研究对象,利用公布的山羊基因组数据库,通过体外克隆免疫球蛋白重链重组的可变区序列并与胚系基因比对,探究其基因座结构和多样性机制,获得如下结果:以已克隆的山羊免疫球蛋白可变区序列(NCBI登录号:EU344746-EU344750)作为种子序列在山羊基因组数据库中进行搜索,发现重链可变区VH基因分布在5个基因组Scaffold片段上,共8个基因序列,根据核苷酸相似性分成两个家族,其中第一家族包括3个潜在功能基因、1个开放阅读框片段和2个假基因片段,与绵羊第一基因家族和小鼠第二家族基因亲缘关系较近;第二家族包含2个假基因片段。3个DH片段和6个JH片段位于基因组Scaffold1847上。DH基因呈5’-DH1-DH2-DH3-3’结构排列,全部为功能基因。JH基因以5’-ψJH1-ψJH2-ψJH3-JH1-ψJH4-JH2-3’结构排列,其中JH1和JH2为功能基因,ψJH1、ψJH2、ψJH3和ψJH4是假基因。从山羊脾脏中克隆重链重组的可变区,共得到238个不同的cDNA片段。分析显示:山羊重链对可变区3种基因片段的使用均具有一定的偏好性。在所有克隆中,IGHV1-2片段表达偏好性最强;JH1的使用频率高于JH2。在225个克隆中鉴定出重排的DH片段,偏好使用第叁个开放阅读框;3个DH片段中DH1的表达偏好性最强,其次是DH3片段。在28个克隆中可能存在两个不同DH片段共同连接的情况。CDR3的长度在5~27个(平均长度为11.33)氨基酸残基。所有cDNA序列同3个潜在功能VH片段比对,分析体细胞高突变过程中碱基的替换突变和插入/缺失情况,结果显示:碱基发生转换突变的频率均高于颠换,其中以A→G的突变数目最多,其次为G→A;总体嘌呤发生替换的比例是嘧啶的2倍左右;不同区段的替换数表现为CDR2区高于CDR1,FR3区高于FR1和FR2。碱基的插入/缺失主要在CDRs区,数目多为3或者3的倍数。综上,本研究揭示了山羊免疫球蛋白重链可变区的基因座结构,并阐述了VDJ重组多样性和体细胞高突变机制对于多样化重链可变区表达谱的重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重链可变区论文参考文献
[1].石彬,马嘉欣,涂文静,吴皓明,陈先恋.人免疫球蛋白重链可变区基因的特征分析[J].聊城大学学报(自然科学版).2019
[2].杜丽娟.山羊胚系免疫球蛋白重链可变区基因座结构及多样性机制分析[D].西北农林科技大学.2016
[3].杨沙,文李艳,朱平,陈礼杰,刘艳君.肿瘤细胞来源IgG重链可变区糖基表位模拟肽的筛选与鉴定[C].第九届全国免疫学学术大会论文集.2014
[4].包英夫,宋德光,贺文琦,张希牧,李吉达.抗ORFV免疫球蛋白重链可变区基因序列的RT-PCR扩增及其多样性[J].中国兽医学报.2014
[5].文李艳.（--~(SEA)）α地贫基因携带者zeta链荧光微球免疫层析试纸条体系的建立及肿瘤细胞来源IgG重链可变区糖基表位模拟肽疫苗候选的初步研究[D].南方医科大学.2013
[6].李慧瑾,李研,孙晶莹,高锦伟,赵向绒.甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析[J].生物技术通讯.2013
[7].周世权,廖智,杨林,周吉航,刘晓光.从兔外周血直接克隆IgG重链可变区[J].解剖学报.2012
[8].文李艳,刘艳君,侯晓睿,焦德龙,富宁.肿瘤细胞来源IgG重链可变区特殊糖基模拟肽的初步研究[C].第八届全国免疫学学术大会论文集.2012
[9].荆琳,龚玖瑜,刘蓉蓉,王颖,宋朝君.抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志.2012
[10].姜晶,孙颖,刘红艳,牟玲,罗恩杰.人免疫球蛋白重链可变区基因引物设计方法的改良[J].微生物学杂志.2012
论文知识图
