导读:本文包含了逆转录病毒表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:逆转录,病毒,载体,基因,免疫,蛋白,树突。
逆转录病毒表达载体论文文献综述
余飞,盛冠男,陈冠男,王南南,宁莉莉[1]（2019）在《MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立》一文中研究指出目的:构建迁移诱导基因(migration inducing gene 7,MIG7)的逆转录病毒表达载体并测序,初步建立其包装细胞株。方法:根据MIG7已知序列设计合成所需脱氧寡核苷酸序列,并与线性RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体连接。PCR扩增热转化后的连接产物,检测和挑取阳性克隆和阳性菌落,提取质粒后测序,与Gen-Bank中特异性MIG7-shRNA基因序列对比。包装并获取MIG7-shRNA重组逆转录病毒,qRT-PCR测定MIG7-shRNA重组逆转录病毒滴度并转染MHCC-97H细胞株。结果:构建的MIG7-shRNA表达载体与设计的完全一致,成功获得MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒CTC698-1-1和CTC698-2N-1转染的PT67细胞克隆株,pSIREN-M1病毒和pSIREN-MN病毒颗粒数约为1.0×10~8v.p/ml,能高效转染MHCC-97H细胞株。结论:成功构建了MIG7的逆转录病毒表达载体并建立其包装细胞株。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年10期）
汪速飞,杨梓艺,魏巍,余冰,李雨蔓[2]（2018）在《荧光蛋白标记逆转录病毒整合酶及Brd2真核表达载体的构建》一文中研究指出目的构建绿色荧光蛋白标记的莫洛尼鼠白血病病毒(MLV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)整合酶及红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒,为研究整合酶与Brd2相互作用打下基础。方法以Prr88-MLV、HIV质粒pNL4-3及含有Brd2的质粒为模板,采用PCR技术扩增MLV-IN、HIV-IN、Brd2片段;利用酶切反应体系构建psectag2A-GFP-mIN、psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳后进行测序分析;用重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜观察目的蛋白表达情况,并进行WB鉴定。结果构建psectag2A-GFP-hIN、psectag2AGFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表达质粒,酶切以及测序结果与预期相符。将上述质粒分别转染293T细胞,WB及荧光显微镜均检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了绿色荧光标记的HIV、MLV整合酶真核表达质粒和红色荧光蛋白标记的Brd2真核表达质粒,尽管Brd2真核表达质粒荧光相对较弱,但这对整合酶与Brd2相互作用研究奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2018年07期）
何云锋,吴小候,唐伟,尹志康,蒲军[3]（2015）在《Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能》一文中研究指出目的构建Treg(regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变。方法设计编码区全长序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列。胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化p SCV-Bsd RFP质粒连接并测序鉴定。将p SCV-Bsd RFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒。反复感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆转录病毒液。将此高表达逆转录病毒命名为p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变。结果 Hi Fi PCR得到编码区全长序列DNA,连接到p SCV-Bsd RFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列。p SCV-Bsd RFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达。IL-10和TGF-β表达增强。结论成功构建Foxp3高表达逆转录病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2015年11期）
马翠花,廖金凤,王大刚,刘淑艳,任倩[4]（2015）在《mM-CSF及其剪切体重组逆转录病毒表达载体的构建》一文中研究指出目的构建膜结合型M-CSF(mM-CSF)及其胞内区截短30个氨基酸的剪切体(mM-CSF-Δ)重组逆转录病毒表达载体。方法用DNA重组技术构建并鉴定mM-CSF和mM-CSF-Δ的重组逆转录病毒表达载体MSCVPGK-GFP-mM-CSF、MSCV-PGK-GFP-mM-CSF-Δ,与空载体对照MSCV-PGK-GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒,并感染HEK293细胞,通过流式分选术获得3种阳性细胞。结果经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染HEK293细胞,获得了稳定表达细胞株HEK293-M、HEK293-M-Δ和对照细胞株HEK293-V。RT-PCR以及Western blotting法检测发现HEK293细胞中有mM-CSF和mM-CSF-Δ的表达,HEK293-M细胞和HEK293-M-Δ细胞经流式抗体标记后均能检测到膜蛋白的表达。结论成功构建了mM-CSF及其剪切体的重组逆转录病毒表达载体。(本文来源于《山东医药》期刊2015年31期）
赵红珂,莫凌昭[5]（2014）在《人端粒酶逆转录酶基因小片段干扰RNA慢病毒表达载体的构建及其在子宫颈癌caski细胞的表达》一文中研究指出目的构建及鉴定携带沉默人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)慢病毒(lentivirus,LV)表达载体,并观察其在子宫颈癌caski细胞的表达情况。方法以Designer3.0(Genepharma)软件设计靶向h TERT基因特异性的小片段RNA(sh RNA)干扰序列,将h TERT-sh RNA基因片段插入重组慢病毒p GLV3/H1/GFP+Puro,构建慢病毒表达质粒LV3-sh RNA-h TERT,酶切、DNA测序验证h TERT片段准确性。LV3-sh RNA-h TERT与包装质粒共转染293T细胞,浓缩上清液并测定病毒滴度获得重组慢病毒后感染caski细胞。将细胞分为空白对照组(未感染病毒的caski细胞)、阴性对照组(感染空载病毒LV3-sh NC的caski细胞)和h TERT干扰组(感染携带LV3-shh TERT慢病毒的caski细胞)。绿色荧光蛋白(GFP)的表达判断转染结果并估计转染效率,流式细胞术仪检测病毒感染率,实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测转染后基因h TERT m RNA的表达情况,CCK-8法检测caski细胞增殖情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功;成功包装成高滴度的慢病毒,且能有效感染子宫颈癌caski细胞。荧光定量PCR检测结果证实构建的h TERT-小片段干扰RNA慢病毒表达载体可显着抑制h TERT基因的表达。h TERT干扰组细胞增殖受抑制,生长速度较阴性对照组生长缓慢。结论成功构建了携带h TERT-sh RNA慢病毒表达载体LV3-sh RNA-h TERT,并稳定转染子宫颈癌caski细胞。该载体能够有效抑制h TERT的表达,使子宫颈癌caski细胞增殖缓慢,为进一步探讨h TERT基因在子宫颈癌的发病机制和体外基因干预治疗奠定基础。(本文来源于《中国癌症防治杂志》期刊2014年04期）
莫小亮,罗殿中,莫凌昭,赵红珂[6]（2014）在《人端粒酶逆转录酶基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其病毒包装鉴定》一文中研究指出目的:构建携带人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)慢病毒表达载体LV3-shRNA-hTERT及其病毒包装鉴定并稳定转染宫颈癌Caski细胞系。方法:使用Designer3.0(Genepharma)软件设计靶向hTERT的小发卡RNA(shRNA)序列,将hTERT-shRNA基因片段插入慢病毒载体pGLV3/H1/GFP+Puro中,构建慢病毒表达质粒LV3-shRNA-hTERT。通过酶切、DNA测序验证hTERT片段的准确性,将LV3-shRNA-hTERT与包装质粒共转染293T细胞,浓缩上清并测定病毒滴度获得重组慢病毒,将该重组慢病毒感染Caski细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达判断转染成功与否以及估计转染效率,RTPCR、Western blot分别测定转染后不同时间点的hTERTmRNA水平和hTERT蛋白表达情况,TRAP-ELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:LV3-shRNA-hTERT携带正确hTERT基因,重组病毒经PCR证实hTERT-shRNA基因插入。利用重组慢病毒介导将重组质粒LV3-shRNA-hTERT高效转导入宫颈癌Caski细胞并稳定表达,荧光显微镜观察转染后24 h Caski细胞即开始发出绿色荧光,72 h后有大量荧光表达,而在稳定转染空质粒的Caski细胞中不表达。检测转染后的Caski细胞,发现有3条链能明显抑制hTERT mRNA和蛋白水平的表达,并显着降低了细胞端粒酶活性,其中以72H-TERT-1515抑制作用最强,对hTERTmRNA和蛋白的抑制率分别达75.0%和70.3%,端粒酶活性下降74.6%。结论:成功构建携带hTERT-shRNA慢病毒表达载体LV3-shRNA-hTERT,并稳定转染Caski细胞系,实验设计的shRNA能有效抑制宫颈癌Caski细胞hTERT mRNA水平和hTERT蛋白表达,并显着降低细胞端粒酶活性。为端粒酶在宫颈癌发病机制的研究、宫颈癌基因治疗的体外干扰治疗奠定了工作基础。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2014年04期）
吴倩,肖波[7]（2013）在《探索携带CAG启动子的逆转录病毒过表达载体在神经干细胞转染中的转染效率》一文中研究指出目的病毒载体介导的单基因敲除或导入技术是目前众多科学研究中使用较多的干预手段。其中,用逆转录病毒作为载体则是对神经干细胞的形态学示踪研究的最佳选择。目前研究表明,不携带基因片段或仅携带shRNA片段的逆转录病毒载体能够特异高效地在体外或者体内实验中转染具有分裂能力的神经干细胞,通过介导宿主基因的整合使外源基因长期持续地表达。尚无研究使用逆转录病毒的过表达载体对具有分裂能力的神经干细胞进行转染,其原因可能(本文来源于《第五届CAAE国际癫痫论坛论文集》期刊2013-09-12）
邓宇婷,林玮,储以微[8]（2013）在《葡萄球菌肠毒素(SEB)特异性TCR荧光蛋白逆转录病毒双表达载体的构建及功能检测》一文中研究指出研究背景:T细胞与抗原提呈细胞(APC)之间形成的免疫突触在T细胞活化中起非常重要的作用,但免疫突触中分子的不同分布形式对T细胞激活的分子机制尚不明确。通过对T细胞或抗原提呈细胞上的免疫突触形成的关键分子进行荧光标记,可直观了解免疫突触的形成过程及其关键分子发挥的作用。葡萄球菌肠毒素(SEB)作为超抗原可在体外快速活化大量的T细胞,以此在体外实时动态地观察免疫突触的形成。目的 :构建SEB特异性的TCR红色荧光蛋白逆转录病毒双表达载体,初步检测树突状细胞(DC)-T细胞间免疫突触的形成。为进一步动态研究DC-T间相互作用,揭示免疫应答的分子机制提供细胞模型。方法 :体外以LPS、IFN-γ诱导树突状细胞系DC2.4成熟,并负载SEB(100ng/m L)与C57B6/L小鼠脾脏CD4+T细胞共孵育;抽提孵育后的T细胞总RNA;逆转录提取c DNA;特异性引物扩增TCR Vα13链和TCR Vβ8链;构建p Turbo RFP-TCR Vα13质粒后,将TCR Vα13-Turbo RFP与TCR Vβ8构建到双表达载体p Bud CE4.1上以获取p EF-1a启动子;再将TCR Vα13-Turbo RFP、p EF-1a和TCR Vβ8一起连接到p MSCV载体上,构建成红色荧光逆转录病毒双启动子表达载体;293T细胞包装病毒;获取病毒颗粒感染C57B6/L小鼠脾脏初始CD4+T细胞。Western blot检测TCR Vα13-Turbo RFP和TCR Vβ8的表达,流式细胞仪检测TCR Vα13和TCR Vβ8的表达比例。与IFN-γ、LPS诱导成熟后负载SEB的DC2.4-ICAM-1-EGFP共孵育,激光共聚焦显微镜检测DC-T细胞间免疫突触的形成。结果:成功构建SEB特异性TCR的红色荧光蛋白逆转录病毒双表达载体p MSCV-TCRαβTurbo RFP。在293T细胞中的包装效率可达90%;流式细胞术以及Western blot均能检测到TCR Vα13、Turbo RFP和TCR Vβ8的表达;用p MSCVTCRαβTurbo RFP感染后的C57B6/L小鼠脾脏CD4+T细胞与DC2.4-ICAM-1-EGFP共孵育后可观察到红色荧光蛋白标记的TCR和绿色荧光蛋白标记的ICAM-1在DC-T细胞间聚集。结论 :成功构建SEB特异性TCR的红色荧光逆转录病毒双表达载体p MSCVTCRαβTurbo RFP,并检测其功能,为进一步动态研究免疫突触在T细胞激活中的作用奠定了基础。(本文来源于《第二届免疫学博士生论坛论文集》期刊2013-07-27）
刘彦魁[9]（2012）在《逆转录病毒整合酶真核表达载体的构建及其与Brd2相互作用初探》一文中研究指出逆转录病毒基因组整合到宿主细胞染色体是逆转录病毒感染的重要环节，而整合的位点是随机的，其机制尚不明了，病毒整合酶与宿主细胞之间的相互作用可能影响整合的过程。溴结合域蛋白2（Brd2）是一种含有多个磷酸化功能位点和溴区结合域的转录核因子，是与转录调控和表观遗传学相关的蛋白质家族，国外有学者初步发现Brd2与MLV、HIV的整合酶之间可能存在相互作用，本课题构建了绿色荧光蛋白标记的MLV、HIV整合酶和红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒，应用激光共聚焦共定位的方法初步探讨了Brd2与MLV、HIV的整合酶之间的相互作用，为揭示Brd2对逆转录病毒整合位点的影响打下实验基础。目的：构建绿色荧光蛋白标记的MLV、HIV整合酶和红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒，应用激光共聚焦共定位试验探讨Brd2与MLV、HIV整合酶之间的相互作用。方法：用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白标记的HIV整合酶的真核表达质粒psectag2A-GFP-hIN、MLV整合酶的真核表达质粒psectag2A-GFP-mIN和红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒pDsred2-N1-Brd2。分别将psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2和psectag2A-GFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2共转染293T细胞，观察相应的荧光，检测转染质粒的表达，通过激光共聚焦共定位试验探讨Brd2与HIV、MLV整合酶之间的相互作用。结果：本课题构建了psectag2A-GFP-hIN、 psectag2A-GFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表达质粒，经测序结果与预期相符，将构建好的上述质粒分别转染到293T细胞，荧光检测到了转染质粒的表达，并初步应用激光共聚焦共定位试验探讨了Brd2与HIV、MLV整合酶之间存在的相互作用。结论：成功构建了HIV、MLV整合酶的真核表达质粒，并对其进行了绿色荧光标记，成功构建了红色荧光蛋白标记的Brd2真核表达质粒，而Brd2的荧光表达强度需要进一步加强。应用激光共聚焦共定位实验有待完善。同时，我们也正在利用Western Blot实验来证实重组质粒的表达。下一阶段，我们课题组拟通过敲除宿主细胞内的Brd2基因及过表达Brd2后，用逆转录病毒载体感染细胞，从而比较Brd2对整合位点选择的影响。(本文来源于《华中科技大学》期刊2012-12-01）
何颖红,赵文珍,杨勇琴,王一心[10]（2012）在《IRF4逆转录病毒表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的将小鼠IRF4基因定向克隆入MSCV-IRES-GFP质粒,得到长期稳定表达IRF4的逆转录病毒载体.方法以含IRF4 cDNA质粒作为模板,PCR扩增所需目的片段;将该片段连接入MSCV-IRES-GFP质粒;以磷酸钙法转染293T细胞,收集病毒上清感染GP+E86细胞后,流式细胞术和蛋白印迹技术检测IRF4的表达.结果经琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的片段成功连接到逆转录病毒MSCV载体上.逆转录病毒上清成功感染GP+E86细胞系.结论成功构建了小鼠IRF4逆转录病毒表达载体,并实现了IRF4在GP+E86细胞系中的外源性表达.(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2012年07期）
逆转录病毒表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建绿色荧光蛋白标记的莫洛尼鼠白血病病毒(MLV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)整合酶及红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒,为研究整合酶与Brd2相互作用打下基础。方法以Prr88-MLV、HIV质粒pNL4-3及含有Brd2的质粒为模板,采用PCR技术扩增MLV-IN、HIV-IN、Brd2片段;利用酶切反应体系构建psectag2A-GFP-mIN、psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳后进行测序分析;用重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜观察目的蛋白表达情况,并进行WB鉴定。结果构建psectag2A-GFP-hIN、psectag2AGFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表达质粒,酶切以及测序结果与预期相符。将上述质粒分别转染293T细胞,WB及荧光显微镜均检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了绿色荧光标记的HIV、MLV整合酶真核表达质粒和红色荧光蛋白标记的Brd2真核表达质粒,尽管Brd2真核表达质粒荧光相对较弱,但这对整合酶与Brd2相互作用研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
逆转录病毒表达载体论文参考文献
[1].余飞,盛冠男,陈冠男,王南南,宁莉莉.MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立[J].现代肿瘤医学.2019
[2].汪速飞,杨梓艺,魏巍,余冰,李雨蔓.荧光蛋白标记逆转录病毒整合酶及Brd2真核表达载体的构建[J].中国病原生物学杂志.2018
[3].何云锋,吴小候,唐伟,尹志康,蒲军.Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能[J].免疫学杂志.2015
[4].马翠花,廖金凤,王大刚,刘淑艳,任倩.mM-CSF及其剪切体重组逆转录病毒表达载体的构建[J].山东医药.2015
[5].赵红珂,莫凌昭.人端粒酶逆转录酶基因小片段干扰RNA慢病毒表达载体的构建及其在子宫颈癌caski细胞的表达[J].中国癌症防治杂志.2014
[6].莫小亮,罗殿中,莫凌昭,赵红珂.人端粒酶逆转录酶基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其病毒包装鉴定[J].中国妇幼保健.2014
[7].吴倩,肖波.探索携带CAG启动子的逆转录病毒过表达载体在神经干细胞转染中的转染效率[C].第五届CAAE国际癫痫论坛论文集.2013
[8].邓宇婷,林玮,储以微.葡萄球菌肠毒素(SEB)特异性TCR荧光蛋白逆转录病毒双表达载体的构建及功能检测[C].第二届免疫学博士生论坛论文集.2013
[9].刘彦魁.逆转录病毒整合酶真核表达载体的构建及其与Brd2相互作用初探[D].华中科技大学.2012
[10].何颖红,赵文珍,杨勇琴,王一心.IRF4逆转录病毒表达载体的构建及鉴定[J].昆明医科大学学报.2012
论文知识图
