导读:本文包含了加尾引物论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:引物,逆转录,果蝇,电泳,染色体,凝胶,胃癌。
加尾引物论文文献综述
邹德亮,温晓君,张雪莲,吴晓伟,周万军[1]（2015）在《加尾引物多重PCR技术检测Y染色体微缺失》一文中研究指出目的设计加尾引物多重PCR策略,并采用此技术建立一种快速检测Y染色体15个STS位点微缺失的多重PCR方法。方法以Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域15个特异性序列标签位点(sequence-tagged site,STS)为扩增子,根据加尾引物多重PCR策略设计5'端加尾引物,建立一种Y染色体微缺失多重PCR体系;并检测18例已知样本和112例临床样本观察其灵敏度与准确性。结果基于此策略的多重PCR体系优化过程简单快速,建立的多重PCR检测体系稳定可靠,各目的条带的电泳分析亮度基本一致;18例已知样本的检测结果与靶值相符;112例临床样本的检测结果也与对照方法一致。结论本研究设计的加尾引物策略可提高多重PCR扩增效率,简化优化过程,为其他多重PCR检测体系的设计与建立提供参考和借鉴;建立的Y染色体AZF15个STS位点微缺失多重PCR检测方法结果稳定,可供临床样本的快速检测。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2015年18期）
戚晓娴,李晓梅,陈永,钟国华[2]（2011）在《RNA加尾和引物延伸法检测黑腹果蝇3种microRNA表达量》一文中研究指出采用RNA加尾和引物延伸real time PCR法实时定量检测了黑腹果蝇Drosophila melanogaster的bantam、mir-14、mir-2a共3种microRNA(miRNA)在各发育阶段组织中的相对表达情况,发现3种miRNA在不同发育时期的表达差异明显,其表达变化规律与文献报道基本一致,验证了该法的可靠性.这种"加尾和引物延伸"方法,仅需1~10 ng总RNA或等同物,检测范围可达7个数量级,为昆虫miRNA研究提供了可靠的定量检测方法.(本文来源于《华南农业大学学报》期刊2011年01期）
刘耘,陈勋,李强[3]（2010）在《用5′加尾长引物进行AFLP片段的直接测序》一文中研究指出现有的AFLP标记片段测序方法比较费时,成本也较高.设计一个包括EcoRI接头引物和5′端加36个额外核苷酸的长引物AF2SC,用该引物再扩增时可AFLP片段末端增加36个碱基.再利用这36个碱基的末端序列进行测序,只需一次反应就能获得AFLP标记片段的全序列.该方法缩短了AFLP片段测序所需时间,也降低了实验成本.(本文来源于《湖北大学学报(自然科学版)》期刊2010年02期）
张宇[4]（2009）在《RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测胃癌中miRNAs的表达》一文中研究指出目的胃癌是全世界范围内处于发病率第二位的恶性肿瘤,导致每年约有100百万人死亡。在中国,胃癌的发病率高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达40万,大约死亡26万/年,占所有恶性肿瘤死亡的23.24%,同时仍然呈上升趋势。由于胃癌患者经常处于晚期才被确诊,因而预后较差,五年生存率低于20%。导致胃癌发生的因素很多,包括胃幽门螺杆菌感染,饮食,环境和遗传因素等,其中幽门螺杆菌是80%或更多胃癌患者的主要危险因素,已有研究提出其在胃十二指肠疾病中的作用。近来,尽管胃癌的诊断和治疗方面取得了一些进展,但是胃癌病人的预后仍然很差,尤其是晚期病人。尽管发现了一系列诸如p53,APC,C-met等胃癌相关的癌基因和抑癌基因,然而胃癌发生的分子机制依然不是十分清楚。目前microRNA与肿瘤发生发展的关系及潜在的诊断价值已成为肿瘤研究的新热点。微小RNA(miRNAs)是一种小分子非编码RNA,通过抑制基因mRNA的翻译或诱导mRNA的降解来调节大约30%人类基因的表达。近年来,大量的研究表明miRNA在细胞增殖、凋亡、发育、分化和代谢等过程中发挥了重要的作用。最近,miRNA的表达被证明与肿瘤的发生发展有密切的关系。如果一个miRNA在某种肿瘤中表达下调并且其靶基因是癌基因,那么这个miRNA就发挥抑癌基因的作用;同理,如果一个miRNA在某种肿瘤中表达上调并且其靶基因是抑癌基因或重要的控制分化基因,那么它就发挥癌基因的作用。因此,通过检测胃癌组织中表达失调的miRNA,并进一步确定其靶基因及其参与的信号调节通路,将对阐明胃癌发生的分子机制具有重要的理论意义。而且miRNA作为重要的生长调节和细胞周期调控分子,具有成为新一代肿瘤标记物的潜力,对于胃癌的早期诊断、分期和预后提示均具有重要的临床意义。本研究旨在通过RNA加尾引物延RT-PCR法实时定量检测miR-18b、miR-21、miR-148b、miR-365在胃癌中的表达水平。我们首先将总RNA加poly(A)尾后进行反转录,之后再用特异引物进行PCR扩增特异的miRNA,经凝胶电泳检测扩增产物的完整性和特异性后进行实时定量PCR,最后采用2~(-ΔΔCt)法对检测结果进行分析。材料与方法实验用组织均取自于中国医科大学附属第一医院肿瘤外科2007年11月至2008年7月间的12例胃癌患者经外科手术切除的标本(取前均取得患者家属同意,并与之签订知情同意书)。所取癌组织及相对应正常组织均在标离体后30分钟内取得,并在液氮冷冻30分钟后放入-80℃冰箱保存。其中男性8例,女性4例,年龄(43-72)(平均56)岁,术前均未经放化疗。提取12例胃癌手术切除标本中癌组织及相应正常组织中的总RNA,在3′末端加尾并抽提后用5′端带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异miRNA引物进行SYBR Green Real-time PCR扩增,并用2~(-ΔΔCt)法对检测结果进行分析,计算其在癌组织与相应正常组织中表达水平的相对比值。实验结果一、相对定量2~(-ΔΔCt)分析方法的优化用相对定量2~(—ΔΔCt)法对SYBR Green Real-time PCR检测的结果进行分析。该实验要求对目的基因(miR-18b、miR-21、miR-148b及miR-365)和管家基因(U6SnRNA)分别做标准曲线,且其标准曲线的斜率之差M＜0.1.miR-18b、miR-21、miR-148b、miR-365和U6在260nm波长UV下定量化,并被10倍梯度稀释:10~5,10~4,10~3,10~2,10~1。结果显示miR-18b、miR-21、miR-148b、miR-365与U6标准曲线斜率之差M分别为0.062,0.003,0.004,0.093,均小于0.1,符合该分析方法的要求。二、miR-18b、miR-21、miR-148b及miR-365在胃癌中的表达为了证实4种miRNAs在胃癌中的表达水平,我们用SYBR Green Real-time PCR从12例胃癌患者手术切除标本的癌组织及相应正常组织中检测出成熟miRNAs和U6 sn RNA的表达水平。结果显示miR-18b、miR-21、miR-365分别在其中的6例、7例、8例标本的胃癌组织中呈高表达,而miR-148b在其中的7例标本的胃癌组织中呈低表达。结论RNA加尾和引物延伸RT-PCR法是一种可行的检测miRNAs表达的方法。miR-148b在胃癌组织中较在正组织中表达有下调趋势,miR-18b、miR-21、miR-365表达则有上调的趋势,提示mi R-148b与miR-18b、miR-21、miR-365可能是在胃癌发生发展过程中分别起抑癌基因和癌基因作用的重要分子。(本文来源于《中国医科大学》期刊2009-02-01）
张旗,何湘君,潘秀英[5]（2007）在《RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA》一文中研究指出目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBRGreen实时定量PCR扩增。结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3′末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别。对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性。另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs。(本文来源于《北京大学学报(医学版)》期刊2007年01期）
张潞生,Vanessa,BECQUET,李绍华,David,ZHANG[6]（2003）在《应用红外荧光和加尾引物法进行向日葵SSR遗传分析中的多聚PCR和多聚凝胶电泳的优化(英文)》一文中研究指出在向日葵(Helianthus annuus L.)自交系SSR遗传分析中,为了提高SSR荧光分析效率、简化分析程序羊u降低研究费用,我们进行了多聚PCR和多聚凝胶电泳两项技术的优化研究。结果表明,优化多聚PCR和多聚凝胶电泳的影响因子(如逐步降低的退火温度的循环数、各个多聚位点引物浓度的平衡、PCR缓冲液浓度以及Taq DNA多聚酶的浓度等)可以收到更好的实验效果。基于以上的优化研究,系统地提出了一套优化的加尾引物法的策略。同时,提出了在多聚PCR和多聚凝胶电泳中常常遇到的技术难题的有效防止和解决的方法。(本文来源于《Acta Botanica Sinica》期刊2003年11期）
加尾引物论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
采用RNA加尾和引物延伸real time PCR法实时定量检测了黑腹果蝇Drosophila melanogaster的bantam、mir-14、mir-2a共3种microRNA(miRNA)在各发育阶段组织中的相对表达情况,发现3种miRNA在不同发育时期的表达差异明显,其表达变化规律与文献报道基本一致,验证了该法的可靠性.这种"加尾和引物延伸"方法,仅需1~10 ng总RNA或等同物,检测范围可达7个数量级,为昆虫miRNA研究提供了可靠的定量检测方法.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
加尾引物论文参考文献
[1].邹德亮,温晓君,张雪莲,吴晓伟,周万军.加尾引物多重PCR技术检测Y染色体微缺失[J].第叁军医大学学报.2015
[2].戚晓娴,李晓梅,陈永,钟国华.RNA加尾和引物延伸法检测黑腹果蝇3种microRNA表达量[J].华南农业大学学报.2011
[3].刘耘,陈勋,李强.用5′加尾长引物进行AFLP片段的直接测序[J].湖北大学学报(自然科学版).2010
[4].张宇.RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测胃癌中miRNAs的表达[D].中国医科大学.2009
[5].张旗,何湘君,潘秀英.RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA[J].北京大学学报(医学版).2007
[6].张潞生,Vanessa,BECQUET,李绍华,David,ZHANG.应用红外荧光和加尾引物法进行向日葵SSR遗传分析中的多聚PCR和多聚凝胶电泳的优化(英文)[J].ActaBotanicaSinica.2003
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