牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析

论文摘要

该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EKLC)。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D4K-EKLC并转化至E. coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的复性效率。复性后的目的蛋白经金属离子亲和层析纯化,并以EKLC自切方式移除重组EKLC的N-端6×His-D4K序列得到具有天然N-端氨基酸序列的EKLC,酶活性测定结果显示该研究所制备的重组EKLC高于商品化牛肠激酶。重组EKLC在大肠杆菌中非融合表达成功,为实现EKLC的经济、高效制备研究奠定了实验基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 重组EKLC蛋白表达载体构建与表达
•     1.2.2 重组EKLC蛋白包涵体复性与纯化
•     1.2.3 重组EKLC自切与纯化
•     1.2.4 EKLC酶活性分析
• 2 结果
•   2.1 重组EKLC的构建、表达
•   2.2 重组EKLC蛋白包涵体复性与纯化
•   2.3 重组EKLC蛋白自切及酶活性分析
•   2.4 重组EKLC蛋白表观相对分子质量的对比分析
• 3讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王京红,于晓甜,唐铭泽,杨洪鸣,唐金宝

关键词: 重组牛肠激酶轻链,大肠杆菌,非融合蛋白,表达,包涵体,活性分析

来源: 药物生物技术 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 潍坊医学院药学院,中国药科大学理学院

基金: 国家自然科学基金项目(No.81201346),山东省自然科学基金项目(No.ZR2018MC009)

分类号: Q78

DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190101

页码: 1-4

总页数: 4

文件大小: 533K

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