导读:本文包含了大片吸虫文库论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:大片吸虫,cDNA文库,组织蛋白酶L1
大片吸虫文库论文文献综述
郭敏,徐梅倩,岳城,何国声[1]（2007）在《大片吸虫成虫cDNA文库的构建和组织蛋白酶L1基因的克隆》一文中研究指出目的大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)基因的克隆。方法提取大片吸虫成虫总RNA,运用SMART技术构建大片吸虫cDNA文库。根据文献设计并合成PCR引物,从上述文库中克隆大片吸虫FgCL1基因,定向克隆至原核表达载体pET28a中。结果文库容量为2.08×106pfu/mL,重组率为98%。扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp。应用两个已知基因(FgCL1 FgGST)从文库中成功钓取到相应的全长基因。将含有FgCL1的阳性克隆测序,用Genebank Blast进行序列比较,证实为FgCL1基因。结论成功构建了cDNA文库,提供筛选大片吸虫基因资源;从该文库中克隆出FgCL1,为进一步表达该基因,研制诊断试剂盒创造了条件。(本文来源于《中国兽医寄生虫病》期刊2007年03期）
郭敏[2]（2007）在《大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1基因的克隆和表达》一文中研究指出片形吸虫病(Fasciolasis)是由片形属的肝片吸虫(Fasciola hepitica)和大片吸虫(Fasciola gigantica)寄生于牛、羊等多种动物的胆管和肝脏中引起的一种寄生虫病。该病在我国分布广泛,给畜牧业带来巨大的经济损失。同时片形吸虫的囊蚴也可感染人,严重危害人们的健康,是一种重要的人兽共患寄生虫病。本研究利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了大片吸虫成虫cDNA文库,文库库容量为2.08×106 pfu/mL,重组率为98%。扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1000 bp。采用PCR从已构建的DNA文库中克隆了组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)编码序列,提交GenBank,登录号为EF536899。FgCL1编码序列亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,重组质粒pGEX/FgCL1在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导以包涵体形式表达,其分子量为61KD左右,利用High-Affinity GST Resin亲和层析法进行目的蛋白的纯化,纯度为77.8%。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染大片吸虫的牛血清。用纯化的FgCL1作为包被抗原,建立了一种检测片形吸虫病的ELISA诊断方法,并对ELISA反应条件进行了优化。确定抗原的最适包被浓度为4ug/ml;血清的稀释度为1:200,37℃作用0.5h;最佳封闭条件为5%脱脂奶粉,37℃封闭3h;酶标二抗的最佳稀释度是1:16 000,37℃作用0.5h;底物显色时间为20min。根据已经建立的ELISA方法及反应条件,确定阴阳性临界值为0.143。重组抗原与血吸虫、华支睾吸虫、弓形虫无交叉性感染,但与东毕吸虫有轻微交叉反应,说明建立的ELISA方法特异性较好。为我国片形吸虫病的免疫诊断和血清学调查提供了行之有效的技术手段。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2007-05-01）
罗洪林,张为宇,郑小龙,黄维义[3]（2005）在《应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库》一文中研究指出为构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,用Trizol试剂提取大片吸虫成虫总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用LD-PCR扩增方法,合成双链cDNA。用SfiⅠ内切酶修饰此双链cDNA,使形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的黏性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集400 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA表达文库。经测定,库容量为1.08×106PFU/mL,重组率为96.6%。扩增后的文库滴度为2.41×109PFU/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp。这些结果表明已成功构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,适合进一步筛选大片吸虫新基因。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2005年11期）
罗洪林,张为宇,郑小龙,黄维义[4]（2005）在《大片吸虫成虫cDNA表达文库的构建及其表达序列标签初步分析》一文中研究指出为发现潜在的抗大片吸虫病的候选疫苗分子,控制大片形吸虫病,本研究以大片吸虫成虫为材料,应用SMARTTcDNA文库构建技术,构建了以表达载体λTriplEx2为基础的大片吸虫成虫cDNA表达文库。经测定,库容量为1·08×106PFU/ml ,重组率为96·6 %,扩增后的文库滴度为2·41×109PFU/ml ,插入片段平均大小约为1 000 bp;经大肠杆菌BM25·8质粒化后,从文库中随机挑选40个重组克隆测序,获得32条有效ESTs ;经BLASTX和BLASTn程序检索和分析,发现有9条ESTs代表已知基因, 16条ESTs相似性较低或无匹配,列为新基因。9条已知基因代表了半胱氨酸蛋白酶、卵壳蛋白、钙连接蛋白等叁类功能蛋白,其余新基因也暗示与信号传导、蛋白合成、免疫刺激等基因相关,具有潜在的研究价值[动物学报51 (5) : 879 -883 , 2005]。(本文来源于《动物学报》期刊2005年05期）
罗洪林[5]（2005）在《大片吸虫成虫cDNA文库的构建及其表达序列标签（EST）的研究》一文中研究指出大片形吸虫(Fasciola gigantica)主要寄生在牛、羊等反刍动物肝脏,是我国华东、华南地区的优势虫种,给畜牧业和人民身体健康带来严重危害,但目前还没有有效的药物和疫苗来控制。本文通过构建大片形吸虫成虫的cDNA文库并获取部分表达序列标签(EST),旨在发现潜在的抗大片形吸虫的候选疫苗分子,为防大片形吸虫病奠定基础。 本研究应用SMART方法构建了高质量的大片形吸虫成虫cDNA文库,经测定,库容量为1.08×10~6 Pfu/mL,重组率为96.6%。扩增后的文库滴度为2.41×10~9Pfu/mL,插入片段平均大小约为1000bp;经大肠杆菌BM25.8质粒化后,从文库中随机挑选40个重组克隆测序,获得32条有效ESTs,经BLASTX和BLASTn程序检索和分析,发现有9条ESTs代表已知基因,16条ESTs相似性较低或无匹配,列为新基因。9条已知基因代表了半胱氨酸蛋白酶、卵壳蛋白、钙连接蛋白等叁类功能蛋白,其余新基因也暗示与信号传导、蛋白合成、免疫刺激等基因相关,具有潜在的研究价值;从所获得的ESTs中挑选了一条作为目标序列,运用生物信息学方法并结合相关软件,利用网络数据库进行了电子克隆(in siloco cloning),获得了长度为1920bp的重迭群(contig),开放阅读框(ORF)长930bp,编码310个氨基酸,预测为卵壳蛋白,在抗生殖免疫方面发挥重要作用。对此重迭群设计引物,(本文来源于《广西大学》期刊2005-05-01）
罗洪林,黄维义,张为宇,张维谊,郑小龙[6]（2004）在《应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库》一文中研究指出目的及意义:片形吸虫病是反刍动物常见的、危害最为严重的寄生虫病之一,阐明片形吸虫感染的致病机理和鉴定、筛选有效的候选疫苗分子是疫苗研究的基础和关键。利用互联网上的寄生虫基因组资源进行同源性搜索、电子拼接或组装,可加速寄生虫新基因的识别及全长cDNA 克隆的步伐从而为寄生虫病疫苗的研制提供丰富的、可供选择的候选疫苗基因。本实验构建的大片吸虫成cDNA 表达文库是构建作为热带、亚热带地区片形吸虫病最重要的病原大片吸虫(F.gigantica)的表达序列标签(ESTs)数据库的基础工作,随后将利用生物信息学方法和技术对所获得的ESTs序列进行分析,通过数据库和数据处理模块寻找新基因,为鉴定和筛选大片吸虫候选疫苗分子奠定基础和提供依据。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集》期刊2004-11-01）
大片吸虫文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
片形吸虫病(Fasciolasis)是由片形属的肝片吸虫(Fasciola hepitica)和大片吸虫(Fasciola gigantica)寄生于牛、羊等多种动物的胆管和肝脏中引起的一种寄生虫病。该病在我国分布广泛,给畜牧业带来巨大的经济损失。同时片形吸虫的囊蚴也可感染人,严重危害人们的健康,是一种重要的人兽共患寄生虫病。本研究利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了大片吸虫成虫cDNA文库,文库库容量为2.08×106 pfu/mL,重组率为98%。扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1000 bp。采用PCR从已构建的DNA文库中克隆了组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)编码序列,提交GenBank,登录号为EF536899。FgCL1编码序列亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,重组质粒pGEX/FgCL1在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导以包涵体形式表达,其分子量为61KD左右,利用High-Affinity GST Resin亲和层析法进行目的蛋白的纯化,纯度为77.8%。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染大片吸虫的牛血清。用纯化的FgCL1作为包被抗原,建立了一种检测片形吸虫病的ELISA诊断方法,并对ELISA反应条件进行了优化。确定抗原的最适包被浓度为4ug/ml;血清的稀释度为1:200,37℃作用0.5h;最佳封闭条件为5%脱脂奶粉,37℃封闭3h;酶标二抗的最佳稀释度是1:16 000,37℃作用0.5h;底物显色时间为20min。根据已经建立的ELISA方法及反应条件,确定阴阳性临界值为0.143。重组抗原与血吸虫、华支睾吸虫、弓形虫无交叉性感染,但与东毕吸虫有轻微交叉反应,说明建立的ELISA方法特异性较好。为我国片形吸虫病的免疫诊断和血清学调查提供了行之有效的技术手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大片吸虫文库论文参考文献
[1].郭敏,徐梅倩,岳城,何国声.大片吸虫成虫cDNA文库的构建和组织蛋白酶L1基因的克隆[J].中国兽医寄生虫病.2007
[2].郭敏.大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1基因的克隆和表达[D].新疆农业大学.2007
[3].罗洪林,张为宇,郑小龙,黄维义.应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库[J].畜牧兽医学报.2005
[4].罗洪林,张为宇,郑小龙,黄维义.大片吸虫成虫cDNA表达文库的构建及其表达序列标签初步分析[J].动物学报.2005
[5].罗洪林.大片吸虫成虫cDNA文库的构建及其表达序列标签（EST）的研究[D].广西大学.2005
[6].罗洪林,黄维义,张为宇,张维谊,郑小龙.应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集.2004