导读:本文包含了二元载体构建论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,基因,番茄,兴安,曲霉,落叶松,剑麻。
二元载体构建论文文献综述
梅丽丽,郭鑫,张尧,林晓飞,张文波[1]（2018）在《兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因启动子的克隆及双元载体的构建》一文中研究指出为研究兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因(LgUGPase)的表达特性,利用Tail-PCR的技术克隆了1 376 bp的LgUGPase基因上游序列。利用PlantCARE对该序列进行预测与分析发现,其含有TATA-BOX、CAAT-BOX等启动子基本元件,同时包含光元素响应元件,低温和干旱等逆境响应元件,赤霉素、茉莉酸甲酯和生长素等植物激素响应元件。由此推断LgUGPase基因的表达可能受到光、低温、赤霉素、茉莉酸甲酯等的调控。为进一步研究LgUGPase基因的表达模式和调控机理,将该启动子序列克隆到pORE-R1载体GUS基因的上游,构建了pORE-R1-pLgUGPase::GUS双元表达载体,为通过遗传转化拟南芥及GUS染色研究该启动子的功能及LgUGPase的表达特性提供理论参考。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年22期）
莫爱琼,文了,黎海燕,马丽,万小荣[2]（2016）在《番茄红素β-环化酶基因(LcyB)启动子调控LcyB RNAi双元载体构建》一文中研究指出根据番茄基因组DNA序列信息设计引物进行PCR扩增了Micro-Tom中番茄红素β-环化酶(Lycopeneβ-cyclase,Lcy B)基因起始密码子上游1 534 bp启动子区域序列(Lcy Bp),生物信息学分析表明,该启动子序列中存在TATA-盒、CAAT-盒、昼夜节律响应元件Circadian、光响应元件Box I、真菌激发子响应元件Box-W1、低温响应元件LTR、响应赤霉素的作用元件P-box、乙烯响应元件ERE、响应生长素的作用元件TGA-element等顺式作用元件.依据番茄Lcy B基因序列,设计2对含有不同酶切位点的特异引物进行PCR扩增Lcy B基因3’端特异的276 bp DNA片段,利用RNAi载体p KANNIBAL构建了"Lcy B启动子-Lcy B基因正义片段(Sense)-PDK内含子-Lcy B基因反义片段(Antisense)-OCS终止子"的RNAi表达框,并将这一RNAi表达框插入植物双元表达载体p ART27的Not I位点,构建成本研究的Lcy B启动子驱动的Lcy B基因RNAi植物双元表达载体p ART-Lcy Bp-RNAi-Lcy B.为利用RNAi技术特异性敲除Lcy B基因进而提高番茄果实中番茄红素含量奠定实验基础.(本文来源于《华南师范大学学报(自然科学版)》期刊2016年04期）
戴鹏秀[3]（2016）在《须癣毛癣菌转录组测序分析及ZafA基因遗传转化用双元载体的构建》一文中研究指出须癣毛癣菌(Trichophyton Mentagrophytes)是常见的人畜共患皮肤癣菌病病原,可引起严重的皮肤感染,但目前常用的真菌性皮肤病的防治手段相对简单,对于该菌的研究仍大都停留在流行病学和药物疗效等方面,已不能满足临床医学的需求。在真菌等微生物的生长和繁殖中,锌是一种重要的微量营养元素,其常与多种功能蛋白结合以形成锌指蛋白来完成生物学功能。目前,多种真菌的锌吸收转运调控因子已经明确,如:烟曲霉的ZafA蛋白、酵母菌的Zap1蛋白等,此类蛋白作为锌响应活力因子可在转录水平上对多种锌转运蛋白的表达进行调控,从而控制真菌对锌离子的摄取,在真菌的生长和致病过程中扮演重要角色。但目前,须癣毛癣菌的锌响应活力因子的基因组成及功能还未确定,锌吸收转运调控网络尚不清楚,确定须癣毛癣菌中锌响应活力因子以及锌转运蛋白的基因组成对于须癣毛癣菌致病性的研究具有重要意义。研究发现多种真菌的锌响应活力因子的基因组成具有一定的相似性,初期试验,以烟曲霉锌响应活力因子的基因序列为基础设计引物,以须癣毛癣菌全基因组DNA、cDNA为模板进行PCR扩增,经过多次试验发现无法获得须癣毛癣菌锌响应活力因子的基因组成。因此,我们使用Illumina HiSeqTM 2000技术对正常状态下及锌缺乏情况下的须癣毛癣菌进行了转录组测序,并对测序数据进行了从头组装、基因功能注释以及基因的差异表达分析等,后续通过BLASTX序列相似性搜索以及对须癣毛癣菌转录组测序数据的分析确定出须癣毛癣菌锌响应活力因子的基因组成,初步推断出与锌吸收转运相关的其他基因;并使用重组克隆技术构建了针对ZafA基因的遗传转化用双元载体,为后续的基因功能验证奠定了基础。研究结果如下:1使用Illumina测序平台对须癣毛癣菌进行了RNA-seq,共获得10751个unigenes,89%以上的基因得到功能注释,对于须癣毛癣菌的基因功能研究以及基因组图谱的组装提供了宝贵的数据支持。2通过与烟曲霉ZafA基因、酿酒酵母Zap1基因进行序列同源性比对以及功能注释分析等,确定了须癣毛癣菌中与锌吸收转运相关的基因并高保真扩增出须癣毛癣菌ZafA基因。3将ZafA基因左右侧翼片段以及来自质粒pAN7-1的潮霉素B抗性基因(hph)同时插入到双元载体pDHt/SK中,构建ZafA基因转化用双元载体pDHt/ZafAⅠ、Ⅱ::hph,经PCR及酶切验证,双元载体构建成功。试验结果表明,本研究完成了须癣毛癣菌的转录组测序及功能注释;确定了须癣毛癣菌ZafA基因的组成,并成功地构建了转化用双元载体pDHt/ZafAⅠ、Ⅱ::hph,为之后的ZafA基因的毒力试验及功能验证奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-05-01）
师连枝[4]（2015）在《新型职业农民成长的多元载体构建》一文中研究指出新型职业农民的培育和成长需要特定的载体,构建新型职业农民多元载体是培育新型职业农民的关键。为此,需重点发展家庭农场,构建新型职业农民成长的核心载体;大力发展农民专业合作社,构建培育新型职业农民的基本载体;积极推进现代农业园区建设,打造培育新型职业农民的标准载体;做大做强农业产业化龙头企业,构筑新型职业农民发展的宽广平台;着力发展新型农业社会化服务组织,建设新型职业农民发展的理想载体;继续办好国有农场,使其成为培育新型职业农民的复合载体。更需整合各种资源,建立培育新型职业农民的协作联动体系,最终真正构建起适宜新型职业农民成长的多元载体。(本文来源于《河南商业高等专科学校学报》期刊2015年05期）
王宏归,黄晨,姜雅,严秋香,周春洪[5]（2015）在《糖皮质激素诱导重组转基因二元载体pElrLEG的构建》一文中研究指出以p Jawoh18-RNAi载体为骨架,构建地塞米松诱导的二元载体p Elr LEG。通过在p Elr LEG载体上的Xho I与Spe I位点插入2个同向的locus of X-over P1(Loxp)位点,以及在Loxp位点之间再插入Glucocorticoid Recepot(GR)融合的Cre重组酶及Gateway cassette,从而成功构建地塞米松诱导型二元载体。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2015年25期）
覃海燕,徐洪伟,高建明,鹿志伟,莫廷辉[6]（2015）在《APX基因植物表达双元载体的构建及转化剑麻》一文中研究指出剑麻是中国热带地区最重要的麻类经济作物。剑麻H.11648是中国唯一的当家品种,此品种虽高产但易感斑马纹病,而现有的化学农药防效差且病原菌易产生抗性。为了培育出剑麻抗病新品种,以Pcambia3300为基础质粒,构建由35S驱动的APX基因的植物表达载体Pcambia3300-35S-APX-nos,再通过农杆菌EHA105将其导入剑麻中,经PCR扩增后电泳检测分析,结果表明外源基因已整合到受体植物基因组中。(本文来源于《热带作物学报》期刊2015年06期）
张红心,王桂兰,陈超,赵璞,马春红[7]（2015）在《种子中特异表达IPT基因的植物双元载体构建及转基因水稻获得》一文中研究指出为研究细胞分裂素在水稻籽粒发育中的作用,构建了p1300-p PG-5α-IPT-Nos植物表达载体,并对水稻进行遗传转化。以水稻品种9311为材料,采用PCR法获得种子中特异表达的PG-5α基因启动子,并将此启动子与p1300相连接,构建p1300-p PG-5α载体,用NcoⅠ和SpeⅠ双酶切p SG516,获得IPT-Nos核酸片段,然后将此核酸片段插入到p1300-p PG-5α中,构建p1300-p PG-5α-IPT-Nos植物表达载体。以水稻品种日本晴愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化。成功构建了植物表达载体p1300-p PG-5α-IPT-Nos,获得了阳性率为81.3%转IPT基因群体。获得转基因株系后,将为进一步筛选高效表达株系及观察其籽粒生长发育过程提供基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2015年01期）
曹旸,刘永翔,谭玉梅,王海,刘作易[8]（2013）在《G418抗性基因nptⅡ双元载体的构建及谢瓦氏曲霉间型变种的遗传转化》一文中研究指出为给谢瓦氏曲霉间型变种(Aspergillus chevalieri var.intermedius)多基因功能的研究提供新的选择标记,利用MYA培养基测G418敏感性后,以质粒pcDNA3.1(+)为中间载体构建nptⅡ基因表达元件,利用根癌农杆菌介导法转化至谢瓦氏曲霉间型变种。结果表明:用构巢曲霉PgpdA启动子、nptⅡ基因和构巢曲霉色氨酸C终止子TtrpC组成的G418抗性基因盒替换双元载体pDHt/sk-bar上的草丁膦抗性盒,成功构建双元载体pDHt/sknt,并且通过根癌农杆菌介导的转化获得的G418抗性转化子遗传稳定,nptⅡ基因主要以单拷贝形式插入谢瓦氏曲霉间型变种基因组DNA中。因此,双元载体pDHt/sknt适用于谢瓦氏曲霉间型变种的遗传转化。(本文来源于《西南农业学报》期刊2013年06期）
卢双楠,李粲,滕峥,刘开雨,刘芳[9]（2012）在《高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建》一文中研究指出【目的】利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGFP插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia1300-cbcor15a-bar。【方法】参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点。利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察。【结果】与导入pCambia1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号。【结论】重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障。(本文来源于《南方农业学报》期刊2012年09期）
闫晓红[10]（2012）在《pYBA植物表达双元载体构建与构巢曲霉alcM启动子在拟南芥中功能验证》一文中研究指出在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的植物遗传转化中,常常需要用到植物表达双元载体。为了便于基因工程操作并能在获得转基因植物后方便将标记基因删除,本试验构建了植物表达双元载体pYBA载体系列,以满足用于生产安全转基因植物的需要。本研究通过融合PCR方法,尽可能去除所有非必需的序列,将pYBA载体最小化。pYBA载体在大肠杆菌中为多拷贝,骨架为3.69kb。试验中构建的含NptⅡ植物筛选标记基因的载体pYBA100为5.37kb,含Hyg植物筛选标记基因的载体pYBA200为5.60kb,含Bar植物筛选标记基因的载体pYBA300为5.12kb,pYBA系列载体共同含有的多克隆位点为22个,方便基因工程操作。pYBA载体系列T-DNA区的植物筛选基因表达框两侧预留有LoxP-FRT融合位点,方便在获得转基因植物后通过ere或FLP重组酶将植物筛选标记基因删除。pYBA载体能于大肠杆菌和农杆菌中自我复制,并成功转化了拟南芥(Arabidopsis thaliana),符合农杆菌介导的植物转基因要求。pYBA100载体离体删除试验结果证明,pYBA载体系列能经Cre重组酶删除植物标记基因表达框。目前广泛应用的乙醇诱导的alc表达系统,主要为AlcR/alcA诱导表达系统。为了获得具有自主知识产权的新型乙醇诱导系统,开发更加有效的并可以严格从时间和空间上控制目的基因表达的乙醇诱导系统。本试验从构巢曲霉菌基因组中克隆a1CM(SM)启动子全长,构建了含alcR基因的pBBB-AlcR-SM双元表达载体。利用农杆菌介导的花序浸染法转入拟南芥,并通过GUS染色验证原始的未加任何修饰的SM启动子的功能。GUS染色乙醇诱导的阳性苗,阳性苗基本全株呈蓝色,而相应未经诱导处理的阳性苗经GUS染色后根部可见少量蓝色。SM启动子在拟南芥中受乙醇诱导调控下游基因表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2012-06-01）
二元载体构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据番茄基因组DNA序列信息设计引物进行PCR扩增了Micro-Tom中番茄红素β-环化酶(Lycopeneβ-cyclase,Lcy B)基因起始密码子上游1 534 bp启动子区域序列(Lcy Bp),生物信息学分析表明,该启动子序列中存在TATA-盒、CAAT-盒、昼夜节律响应元件Circadian、光响应元件Box I、真菌激发子响应元件Box-W1、低温响应元件LTR、响应赤霉素的作用元件P-box、乙烯响应元件ERE、响应生长素的作用元件TGA-element等顺式作用元件.依据番茄Lcy B基因序列,设计2对含有不同酶切位点的特异引物进行PCR扩增Lcy B基因3’端特异的276 bp DNA片段,利用RNAi载体p KANNIBAL构建了"Lcy B启动子-Lcy B基因正义片段(Sense)-PDK内含子-Lcy B基因反义片段(Antisense)-OCS终止子"的RNAi表达框,并将这一RNAi表达框插入植物双元表达载体p ART27的Not I位点,构建成本研究的Lcy B启动子驱动的Lcy B基因RNAi植物双元表达载体p ART-Lcy Bp-RNAi-Lcy B.为利用RNAi技术特异性敲除Lcy B基因进而提高番茄果实中番茄红素含量奠定实验基础.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
二元载体构建论文参考文献
[1].梅丽丽,郭鑫,张尧,林晓飞,张文波.兴安落叶松UDP焦磷酸化酶基因启动子的克隆及双元载体的构建[J].分子植物育种.2018
[2].莫爱琼,文了,黎海燕,马丽,万小荣.番茄红素β-环化酶基因(LcyB)启动子调控LcyBRNAi双元载体构建[J].华南师范大学学报(自然科学版).2016
[3].戴鹏秀.须癣毛癣菌转录组测序分析及ZafA基因遗传转化用双元载体的构建[D].西北农林科技大学.2016
[4].师连枝.新型职业农民成长的多元载体构建[J].河南商业高等专科学校学报.2015
[5].王宏归,黄晨,姜雅,严秋香,周春洪.糖皮质激素诱导重组转基因二元载体pElrLEG的构建[J].安徽农业科学.2015
[6].覃海燕,徐洪伟,高建明,鹿志伟,莫廷辉.APX基因植物表达双元载体的构建及转化剑麻[J].热带作物学报.2015
[7].张红心,王桂兰,陈超,赵璞,马春红.种子中特异表达IPT基因的植物双元载体构建及转基因水稻获得[J].华北农学报.2015
[8].曹旸,刘永翔,谭玉梅,王海,刘作易.G418抗性基因nptⅡ双元载体的构建及谢瓦氏曲霉间型变种的遗传转化[J].西南农业学报.2013
[9].卢双楠,李粲,滕峥,刘开雨,刘芳.高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建[J].南方农业学报.2012
[10].闫晓红.pYBA植物表达双元载体构建与构巢曲霉alcM启动子在拟南芥中功能验证[D].内蒙古农业大学.2012
论文知识图
