导读:本文包含了真核表达载体质粒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质粒,转染,突变,细胞,基因,载体,细胞株。
真核表达载体质粒论文文献综述
马旸,韩陈陈,李亦凡,汪扬,魏伟[1]（2016）在《pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒真核表达载体的构建与表达》一文中研究指出GRK2-S670A突变体导入pI RES-EGFP真核表达载体,为寻找GRK2磷酸化GPCR的位点提供研究基础。利用PCR定点突变试剂盒,获得pG EM-T-GRK2-S670A,用Sal I/Apa I分别对pG EM-T-GRK2-S670A和EGFP-C3双酶切,构建EGFP-C3-GRK2-S670A,Sal I/BamH I双酶切EGFP-C3-GRK2-S670A和pI RES-EGFP,得到pI RES-EGFP-GRK2-S670A。将构建的质粒转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察和Western blot法检测融合蛋白的表达。酶切鉴定显示pI RES-EGFP-GRK2-S670A质粒条带大小符合,测序结果正确,成功构建pI RES-EGFP-GRK2-S670A真核表达质粒,转染HEK293细胞后可见融合蛋白表达,为后续研究奠定基础。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2016年10期）
李旭奎,姚佳,饶国洲[2]（2016）在《BimS真核质粒过表达载体构建及诱导ACC-2细胞凋亡作用》一文中研究指出目的构建BimS真核质粒过表达载体及鉴定并转染ACC-2细胞,观察其在细胞中上调BimS蛋白表达及促凋亡作用。方法根据人BimS基因设计引物,扩增目的基因片段,挑选阳性克隆,分别采用PCR扩增电泳和DNA测序鉴定。分为对照组和实验组将构建的质粒表达载体转染ACC-2细胞,通过定量PCR和Western biot检测其基因和蛋白相对表达水平,检测细胞凋亡率和超微结构的变化。结果实验组细胞凋亡明显,凋亡率为(29.6±0.3)%;对照组细胞凋亡率仅为(0.83±0.2)%,实验组与对照组细胞凋亡率比较具有统计学差异(P<0.05)。电镜下实验组细胞呈典型的细胞凋亡形态学改变,对照组细胞形态未发生变化。结论 BimS真核质粒过表达载体构建成功,并能显着上调ACC-2细胞中BimS mRNA、蛋白表达及诱导细胞凋亡。(本文来源于《北京口腔医学》期刊2016年02期）
温志红,代艳,何爽[3]（2015）在《人MicroRNA-335阳性对照质粒真核表达载体的构建及意义》一文中研究指出目的构建人MicroRNA-335(has-miR-335)阳性对照质粒表达载体。方法根据与has-miR-335"种子区"完全匹配的序列设计并合成一对互补的寡聚核苷酸链,经过缓慢降温退火得到目的小片段。将退火产物连接入荧光素酶报告基因载体p MIR-REPORT而得到has-miR-335阳性对照重组质粒。应用Lipofectamine 2000将has-miR-335阳性对照重组质粒、p MIR-REPORT空载体,分别与Pre-miRTMmicroRNA335 Precursor共转染至293T7/17细胞,用双荧光素酶方法检测has-miR-335在真核细胞中表达水平。结果获得has-miR-335阳性对照重组质粒,经测序结果正确。has-miR-335与其阳性对照结合在真核细胞中的表达下降。结论成功构建了has-miR-335阳性对照质粒表达载体。该载体可用于确认has-miR-335实验中RNA提取、转染和基因表达检测方法是否可靠。has-miR-335双荧光素酶报告基因检测体系的建立为进一步进行has-miR-335靶基因检测及验证奠定基础。(本文来源于《中国临床新医学》期刊2015年01期）
刘嵘,李一荣,胡丽华[4]（2014）在《pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体的构建和hTim-3质粒稳定转染16HBE细胞株的建立》一文中研究指出目的筛选表达Tim-3的人呼吸道相关细胞株,为进一步阐明Tim-3可能与人呼吸道疾病相关奠定基础;构建pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体,以期用于hTim-3的功能研究。将测序正确的重组质粒pEGFP-C2-hTim-3转染入人支气管上皮细胞株16HBE中,筛选出阳性细胞克隆,为后续实验提供理论基础。方法用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基于37℃5%CO2饱和湿度培养箱中体外培养人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82,调整细胞到最佳状态,对数生长期时收集细胞,抽提总RNA,逆转录为cDNA。参照人GenBank中Tim-3基因的全长序列,使用Primer5.0设计并合成其引物,采用PCR检测以上3种细胞Tim-3的mRNA。将健康人外周血Tim-3基因全长cDNA片段克隆入真核表达载体pEGFP-C2,经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,构建包含目的基因Tim-3的重组质粒pEGFPC2-hTim-3。利用脂质体介导pEGFP-C2-hTim-3质粒和pEGFP-C2质粒分别转染16HBE细胞,荧光显微镜下观察16HBE细胞的瞬时转染效率,并采用含G418的培养基筛选以获得整合pEGFP-C2-hTim-3和pEGFP-C2的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察pEGFP-C2-hTim-3和pEGFP-C2在16HBE细胞上的定位表达。结果 1)PCR显示人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82均表达Tim-3 mRNA;2)构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pEGFP-C2-hTim-3质粒载体,测序结果与预期设计完全一致;3)瞬时转染后经荧光显微镜检查可见表达pEGFP-C2-hTim-3绿色荧光蛋白的16HBE细胞不足8%,表达pEGFP-C2绿色荧光蛋白的16HBE细胞不足15%。采用G418筛选后获得表达野生型hTim-3和外源性pEGFP-C2-hTim-3的16HBE细胞及转染pEGFP-C2空质粒的16HBE细胞,经荧光显微镜观察前者定位在胞膜上,后者定位于胞质中。结论人呼吸道相关细胞株16HBE、A549和GLC-82均表达Tim-3mRNA,Tim-3可能与人类呼吸道疾病的发生和发展相关。成功构建了真核表达载体pEGFP-C2-hTim-3并获得了高表达pEGFP-C2-hTim-3的16HBE阳性克隆细胞,可供后续研究使用。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2014年10期）
王明菊[5]（2014）在《miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体的构建及其初步验证》一文中研究指出背景与目的：抑郁症是一类常见病，临床上主要表现为患者对日常活动和娱乐的兴趣减退、对前途悲观失望、容易焦虑、睡眠质量较差等，迄今，人们对抑郁症的发病原因以及发病机制还不是很清楚，但是可以肯定的是，其发病有生物、心理以及社会环境等内外因素的参与。近年来，有研究提示miRNAs与精神疾病有关联，其可能在精神疾病的发生、发展中起着十分重要的角色。有研究发现miR-134的表达水平在BD躁狂相病人的血液中降低，然而miR-134的表达水平在癫痫持续状态（status epilepticus，SE）造模成功的大鼠模型中上升，并且在内侧颞叶癫痫（Mesial Temporal LobeEpilepsy，MTLE）病人中也同样检测到miR-134表达水平的升高。目前的研究主要是证实了miR-134异常表达与精神疾病有关，但是对精神疾病中miR-134的精细调控机制的研究还十分有限。如果想要更加深入地了解miR-134发挥的作用，我们需要建立细胞或动物模型，在细胞及动物水平检测其引起的病理生理改变。本课题的目的在于构建miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体，并且将构建好的质粒和慢病毒转染至OL（oligodendroglia，人类少突胶质瘤）细胞、SD大鼠海马神经元中，为研究抑郁症的分子机制提供有效的实验工具。方法：1.用PCR的方法从OL细胞基因组中扩增含有miR-134基因的目的片段，并将miR-134基因的PCR产物和载体pEGFP-N1连接以构建pEGFP-miR-134载体，经酶切、测序证实之后采用Invitrogen公司的Lipofectamine LTX和Plus Reagents转染试剂盒将质粒瞬时转染至OL细胞中，提取总RNA,在基因水平检测miR-134在OL细胞中的表达变化。2.取出生24h内的清洁级SD乳鼠，断头后分离提取海马神经元，采用无血清培养基培养神经元，为后期在海马神经元中进行的细胞活力实验、细胞凋亡实验及突触可塑性实验奠定良好基础。3.构建Lenti-miR134-EX慢病毒表达载体，并包装、纯化慢病毒，经鉴定慢病毒包装成功后将其感染SD大鼠海马神经元，提取总RNA,在基因水平检测miR-134在海马神经元中的表达变化。结果：1.从OL细胞基因组中成功扩增出含有miR-134基因的目的片段，并将其连接到载体pEGFP-N1，命名为pEGFP-miR-134，且转染OL细胞效果较好。2.用简单的方法即可分离培养出高纯度（可达90%以上）的海马神经元。3.成功包装了能够表达绿色荧光蛋白的慢病毒载体，命名为Lenti-miR134-EX。结论：本课题成功构建了miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体，并获得瞬时转染的OL细胞以及SD大鼠原代海马神经元，为深入研究miR-134在抑郁症的精细调控机制提供了有效的工具和平台。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2014-05-01）
董娟,刘蓓蓓,严正杰,蔡令波,刘新建[6]（2013）在《人雌激素受体α真核表达载体构建及质粒免疫制备多克隆抗体》一文中研究指出目的:克隆构建表达人雌激素受体α(ERα)的真核表达质粒,并探讨通过质粒免疫的方法制备ERα抗体的可行性。方法:利用RT-PCR方法从MCF-7细胞中克隆出ERα基因,并将其构建在pCDNA3.1载体中,质粒经鉴定为正确后,大量提取重组质粒,利用脂质体转染试剂包裹,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过测定血清抗ERα效价,观察重组质粒携带ERα在小鼠体内的表达情况。结果:成功克隆构建了表达ERα的真核载体,细胞内瞬时转染实验证实重组质粒成功表达目的蛋白;通过采用该质粒免疫小鼠,获得了高效价的小鼠多克隆抗体,经验证抗体可识别内源性ERα。结论:采用真核表达质粒进行免疫制备ERα抗体具有可行性,为进一步通过质粒免疫制备ERα单克隆抗体奠定基础。(本文来源于《现代医学》期刊2013年10期）
赖静,夏爱军,杨天燕[7]（2013）在《针对HP450基因shRNA真核表达载体的质粒转染》一文中研究指出目的以pGPH1/GFP/Neo质粒为载体,构建特异性针对HP450基因shRNA真核表达载体,并通过脂质体介导转染正常的大鼠肝细胞株(BRL),以探讨靶向干扰HP450基因对BRL细胞生长的影响。方法构建pGPH1/GFP/NeoHP450真核表达载体。应用脂质体转染技术,将重组的pGPH1/GFP/Neo-HP450真核表达载体转染至大鼠肝细胞株(BRL),并于转染后6、12、24 h在荧光倒置显微镜下观察细胞状态。结果成功构建针对HP450基因shRNA真核表达载体pGPH1/GFP/Neo-HP450,通过脂质体介导转染大鼠肝细胞株BRL,在荧光倒置显微镜下可观察到细胞转染后的荧光现象。结论成功构建的HP450 shRNA真核表达载体pGPH1/GFP/Neo-HP450,可通过质粒转染方法转染至BRL细胞。(本文来源于《中国医药导报》期刊2013年29期）
李瑗春,茹懿,王秦豪,李霞,白庆咸[8]（2013）在《pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒真核表达载体的构建》一文中研究指出目的:将Bcr-Abl及Bcr-Abl T3151突变克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶BCR-Abl,抑制肿瘤细胞生长提供研究基础。方法:pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl质粒构建:分别设计引物,通过分段PCR将BCR-ABL克隆入pcDNA3.1(-)。首先通过PCR扩增出Bcr-a片段,将其克隆入pcDNA3.1(-)的NheI/XhoI之间;接着将PCR扩增出的Abl-c片段克隆入KpnI/HindIII之间,最后XhoI/KpnI双酶切pGD210,将酶切下片段插入pcDNA3.1(-)的相应位点即可。酶切鉴定及测序正确后,转染293T细胞,Western blot验证质粒的表达。pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151的突变质粒:首先设计引物,第一步以pcDNA3.1(-)-BCR/ABL为模板,以Abl-c-u和ba-M1为引物扩增出A-1:560 bp。第二步,相同模板,以ba-M2和ba-M-down为引物扩增出A-2:870 bp。第叁步,以扩增出的A-1和A-2为模板,以Abl-c-u和ba-M-down为引物,扩增出1434 bp的片段A-1+2,以Bcl和Kpn I分别酶切pcDNA3.1(-)-BCR/ABL以及A-1+2,将突变后的A-1+2置换入pcDNA3.1(-)-BCR/ABL。结果:PCR结果显示3.1(-)-Bcr-Abl及3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒条带大小符合,重组质粒经酶切鉴定和测序结果正确,转染后可见融合蛋白的表达。结论:成功构建pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151的真核表达载体,并且转染293T细胞后证实其能够正确表达,为后续研究奠定了基础。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2013年08期）
甘厦[9]（2012）在《人KCTD9真核表达质粒及慢病毒表达载体的构建与鉴定》一文中研究指出背景及目的我国乙型病毒性肝炎发病率高(约5%)，在慢性乙型肝炎基础上诱发的重型肝炎病情尤为凶险，病情进展迅速，病死率较高，可达到70%以上，一直备受临床医生和研究人员的重视。目前内科治疗对于该疾病的作用有限，虽然肝移植是终末期肝病治疗的最终选择，但因我国面临严重的供体短缺、移植价格昂贵等问题而受到临床应用的限制，因此免疫治疗为重型肝炎的治疗提供了新的思路。重型乙型肝炎发病机制复杂，涉及到病毒和宿主双重因素。其中免疫介导的肝细胞损伤中，乙型肝炎病毒（HBV）抗原特异性细胞毒性T细胞（CTL）细胞的作用及机制已经得到较好阐明，而非特异性免疫在其中的作用却尚不明确。本研究室的前期研究首次揭示肝脏自然杀伤细胞（NK细胞）在病毒诱导的肝损伤中发挥至关重要的作用。本研究室前期通过基因芯片对重症乙型肝炎患者和轻中度慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞的基因差异表达谱研究，发现离子通道相关基因--potassium channeltetramerisation domain containing9（KCTD9）在慢性乙肝的重症阶段患者的外周血单个核细胞（PBMC）中高度表达，是重型乙型肝炎的一个下调基因。进一步通过对我研究室建立的不同类型的小鼠肝炎模型和不同临床类型的乙型肝炎患者（重型肝炎和轻中度慢性肝炎患者）及健康对照组患者外周淋巴细胞和肝淋巴细胞的表达研究发现，KCTD9表达水平在外周血NK细胞和肝脏NK细胞上显着增高，其表达与重型肝炎患者肝脏受损的严重程度呈正相关。对鼠叁型肝炎病毒（MHV-3）诱导的Balb/cJ暴发型肝炎小鼠模型中干预KCTD9的表达，能够有效抑制NK细胞活化及延缓暴发型肝炎的疾病进展。这一系列研究为进一步探讨重症肝炎的肝细胞损伤机制，提供了新的方向和疾病干预靶点。为进一步研究KCTD9的免疫功能，本研究克隆了人KCTD9开放阅读框（ORF）全长，构建其表达质粒。同时，为进行进一步的信号转导途径的相关研究，我们构建了该基因的慢病毒表达载体。这些均为KCTD9分子的功能研究提供了强有力的前提保证，也为下一步的研究打下坚实的基础。研究方法1.收集重型乙型肝炎病人外周血，提取PBMC的总RNA,逆转录为cDNA后作为模板，PCR方法扩增KCTD9ORF区，并连接到pcDNA3.1质粒上，转化感受态细胞，阳性克隆PCR后小提质粒，进行双酶切及双向测序鉴定。2.构建pGC-FU-KCTD9慢病毒载体,通过测序结果和利用westernblot技术从蛋白质方面鉴定含有KCTD9的目的片段的表达。经过包装纯化，含目的基因的慢病毒颗粒可以获得较高滴度，为进行下一步的生物学功能研究做铺垫。研究结果1.观察双酶切的结果及测序结果证实从PBMC中获得的KCTD9基因连接到pcDNA3.1载体上，除第693位碱基由胸腺嘧啶突变胞嘧啶为外，其余都与NCBI基因文库中KCTD9基因切合，该处突变属于同义突变，不会影响其蛋白质的空间结构及蛋白质的生理功能。2.成功构建pGC-FU-KCTD9表达质粒，转染293T细胞后获得阳性克隆菌株经Western-Blotting证实其正确性，通过293T细胞进行慢病毒的包装，最终纯化出pGC-FU-KCTD9慢病毒颗粒。研究结论1．成功构建pcDNA3.1-hKCTD9真核表达质粒；2.成功构建pGC-FU-KCTD9慢病毒表达质粒。(本文来源于《华中科技大学》期刊2012-05-01）
任宗芳[10]（2011）在《真核表达载体pEGFP-N1-ALDH2及其突变质粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的：构建pEGFP-N1-ALDH2真核表达载体及突变载体pEGFP-N1-ALDH2 (AAA),并转染PC12细胞。验证己转染重组质粒pEGFP-N1-ALDH2的PC12细胞高表达ALDH2,而突变重组质粒则抑制ALDH2在PC12细胞中的表达。为我们今后的实验“ALDH2对PC12细胞缺氧/复氧的保护作用”打下基础。方法：1、将现成购买的大鼠ALDH2基因进行PCR扩增后克隆到质粒pUC57,构建pUC57-Simple-ALDH2重组质粒并转入感受态细胞进行大量复制,提取阳性克隆,酶切鉴定并测序.2、将pUC57-Simple-ALDH2基因克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP-N1-ALDH2真核表达载体,酶切鉴定并测序。3、采用一步法点突变技术将ALDH2基因上的第506个氨基酸Glu(GAA)突变为Lys (AAA).4、用脂质法将pEGFP-N1-ALDH2真核表达载体及突变质粒转染PC12细胞,经G418筛选稳定表达ALDH2及突变的细胞系结果：(1)、成功地PCR扩增得到ALDH2基因片段；(2)、成功地构建出pUC57-Simple-ALDH2重组质粒,酶切鉴定测序正确。(3)、成功地构建出pEGFP-N1-ALDH2真核表达载体,酶切鉴定测序正确。(4)、成功地构建出pEGFP-N1-ALDH2(AAA)真核表达载体,PCR鉴定和测序正确。(5)、两个重组质粒成功转染到PC12细胞,筛选出稳定细胞系,经过鉴定后pEGF-N1-ALDH2细胞系正常表达ALDH2蛋白,突变质粒无表达。结论：(1)、成功地将大鼠ALDH2基因进行PCR扩增,电泳结果显示得到了正确扩增的DNA条带。(2)、将正确合成的ALDH2基因克隆到质粒pUC57上,测序没有错配的碱基对后,再将pUC57-ALDH2克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建了真核表达载体pEGFP-N1-ALDH2,酶切电泳结果及DAN测序均正确.(3)、成功地将ALDH2编码区上的第506氨基酸残基Glu(GAA)突变为Lys(AAA)得到突变型ALDH2基因,并成功构建了突变型质粒pEGFP-N1-ALDH2(AAA). (4)、两个重组质粒成功转染到PC12细胞,筛选出稳定细胞系,经过鉴定后pEGF-N1-ALDH2细胞系正常表达ALDH2蛋白,突变质粒无表达。(本文来源于《昆明医学院》期刊2011-05-01）
真核表达载体质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建BimS真核质粒过表达载体及鉴定并转染ACC-2细胞,观察其在细胞中上调BimS蛋白表达及促凋亡作用。方法根据人BimS基因设计引物,扩增目的基因片段,挑选阳性克隆,分别采用PCR扩增电泳和DNA测序鉴定。分为对照组和实验组将构建的质粒表达载体转染ACC-2细胞,通过定量PCR和Western biot检测其基因和蛋白相对表达水平,检测细胞凋亡率和超微结构的变化。结果实验组细胞凋亡明显,凋亡率为(29.6±0.3)%;对照组细胞凋亡率仅为(0.83±0.2)%,实验组与对照组细胞凋亡率比较具有统计学差异(P<0.05)。电镜下实验组细胞呈典型的细胞凋亡形态学改变,对照组细胞形态未发生变化。结论 BimS真核质粒过表达载体构建成功,并能显着上调ACC-2细胞中BimS mRNA、蛋白表达及诱导细胞凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
真核表达载体质粒论文参考文献
[1].马旸,韩陈陈,李亦凡,汪扬,魏伟.pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒真核表达载体的构建与表达[J].安徽医科大学学报.2016
[2].李旭奎,姚佳,饶国洲.BimS真核质粒过表达载体构建及诱导ACC-2细胞凋亡作用[J].北京口腔医学.2016
[3].温志红,代艳,何爽.人MicroRNA-335阳性对照质粒真核表达载体的构建及意义[J].中国临床新医学.2015
[4].刘嵘,李一荣,胡丽华.pEGFP-C2-hTim-3真核表达载体的构建和hTim-3质粒稳定转染16HBE细胞株的建立[J].中国病原生物学杂志.2014
[5].王明菊.miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体的构建及其初步验证[D].重庆医科大学.2014
[6].董娟,刘蓓蓓,严正杰,蔡令波,刘新建.人雌激素受体α真核表达载体构建及质粒免疫制备多克隆抗体[J].现代医学.2013
[7].赖静,夏爱军,杨天燕.针对HP450基因shRNA真核表达载体的质粒转染[J].中国医药导报.2013
[8].李瑗春,茹懿,王秦豪,李霞,白庆咸.pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA3.1(-)-Bcr-AblT3151突变质粒真核表达载体的构建[J].现代生物医学进展.2013
[9].甘厦.人KCTD9真核表达质粒及慢病毒表达载体的构建与鉴定[D].华中科技大学.2012
[10].任宗芳.真核表达载体pEGFP-N1-ALDH2及其突变质粒的构建和鉴定[D].昆明医学院.2011
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