甲醇诱导条件对登革病毒四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区表达的影响

论文摘要

目的探讨甲醇诱导浓度和诱导时间对登革病毒（dengue virus,DENV）四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区（envelope domainⅢ,EDⅢ）表达的影响,以期实现该蛋白在毕赤酵母中的高效表达。方法采用不同浓度甲醇（0. 05%、0. 1%、0. 25%、0. 5%、0. 75%、1%、1. 5%、2%、2. 5%、3%、5%、7. 5%）诱导表达带His标签的DENV四型联合重组EDⅢ蛋白,分别诱导18、24、30、48、72 h,样品经Western blot检测。最佳条件下诱导表达的蛋白液经Ni-Agarose His亲和层析纯化后,进行10%SDS-PAGE检测。结果最佳甲醇诱导浓度为2. 5%,最佳甲醇诱导时间为72 h。纯化产物经10%SDS-PAGE检测,于相对分子质量约41 000处可见单一目的蛋白条带,纯度为99%。结论当甲醇浓度为2. 5%,诱导时间为72 h时,可实现DENV四型联合重组EDⅢ蛋白在毕赤酵母中的高效表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 甲醇诱导DENV四型联合重组EDⅢ蛋白表达条件的优化
•     1.3.1 甲醇诱导浓度
•     1.3.2 甲醇诱导时间
•   1.4 酵母菌体蛋白的提取
•   1.5 菌体蛋白的鉴定
•   1.6 蛋白的纯化及鉴定
• 2 结果
•   2.1 甲醇诱导DENV四型联合重组EDⅢ蛋白的最适表达条件
•     2.1.1 甲醇诱导浓度
•     2.1.2 甲醇诱导时间
•   2.2 DENV四型联合重组EDⅢ蛋白的纯化
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 席珏敏,陈俊英,李多,邱丽娟,潘玥,王晓丹,孙强明

关键词: 甲醇,登革病毒,包膜蛋白区,毕赤酵母

来源: 中国生物制品学杂志 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省虫媒传染病防控研究重点实验室

基金: 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(协同创新团队项目,2016-I2M-3-026),国家“十二五”“重大新药创新”科技重大专项(2012ZX09104-302),国家自然科学基金面上项目(81171946),云南省自然科学基金(2016FA029)

分类号: R373.33

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002220

页码: 144-146+151

总页数: 4

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