金黄色葡萄球菌亚单位疫苗的构建及其免疫保护效应的初步研究

论文摘要

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是人畜共患病原菌,能够引起菌血症、中毒性休克综合征、心内膜炎、骨髓炎和肺炎等多种疾病。自20世纪60年代以来,随着耐药性金黄色葡萄球菌菌株的出现,给金葡菌治疗带来了严峻的挑战。疫苗接种是预防或治疗S.aureus感染的有效手段之一,然而目前尚无安全有效S.aureus疫苗问世。因此,开发能够预防S.aureus感染的疫苗迫在眉睫。本研究选取S.aureus表面蛋白TraP、Efb、Csa1、Rap、MntC、GapC、FhuD2作为候选抗原,分别构建上述抗原重组表达载体,诱导表达并纯化目的蛋白。将目的蛋白配伍弗氏佐剂分别免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清中的抗体水平。在末次免疫后,将金葡菌通过滴鼻的方式进行攻毒,检测各组小鼠的体温变化、肺脏病理变化、肺部载菌量及存活率,明确各蛋白的免疫保护效果。结果表明,成功构建TraP、Efb、Csa1、Rap、MntC、GapC、FhuD2蛋白的重组表达载体,经诱导表达纯化,获得纯蛋白。与PBS对照组相比较,TraP、Efb、Csa1、Rap、MntC、GapC、FhuD2抗原都能显著提高小鼠血清中特异性IgG抗体滴度;在攻毒实验中,TraP、Csa1、Rap、MntC、GapC抗原能够提高小鼠对金葡菌的抵抗能力,各组小鼠存活率如下:TraP为80%、Efb为20%、Csa1为80%、Rap为60%、Mntc为80%、Gapc为60%、FhuD2为30%。接下来选取免疫保护效果为80%以上的抗原作为候选抗原（TraP、Csa1、Mntc）,将上述三种抗原等比例混合后配伍乳酸菌多糖佐剂EPS29、EPS30,制备成多抗原混合疫苗,并分别对小鼠进行免疫,ELISA法检测小鼠血清中的特异性抗体及其亚型水平。末次免疫后,将金葡菌通过滴鼻的方式进行攻毒,检测各组小鼠体温变化、肺脏病理变化、肺部载菌量及存活率。结果发现:与PBS组、EPS29组、EPS30组、TraP+Csa1+Mntc组相比较,TraP+Csa1+Mntc+CFA/IFA、TraP+Csa1+Mntc+EPS29、TraP+Csa1+Mntc+EPS30免疫组能够提高小鼠对金葡菌的抵抗能力,并且能够减少金葡菌在肺部的定植;TraP+Csa1+Mntc+CFA/IFA、TraP+Csa1+Mntc+EPS29、TraP+Csa1+Mntc+EPS030免疫组均能显著提高小鼠血清中特异性IgG抗体以及IgG抗体亚类IgG1、IgG2a和IgG2b的抗体滴度;同时能够促进细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-17的分泌。本研究为研发S.aureus新型基因工程疫苗提供理论依据和实验数据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一章 金黄色葡萄球菌概述
•   1.1 金黄色葡萄球菌
•   1.2 金黄色葡萄球菌的感染
•   1.3 金葡菌疫苗的选择策略
•   1.4 金葡菌疫苗的研究进展
•   1.5 金黄色葡萄球菌Rap、TraP、Efb、Csa1、MntC、GapC、FhuD2 候选抗原研究概况
•     1.5.1 RNAIII激活蛋白（Rap）
•     1.5.2 RNAIII激活蛋白的靶蛋白（TraP）
•     1.5.3 纤维蛋白原结合蛋白（Efb）
•     1.5.4 保守的葡萄球菌抗原（Csa）
•     1.5.5 锰离子转运蛋白C（MntC）
•     1.5.6 甘油醛-3-磷酸脱氢酶-C（GapC）
•     1.5.7 铁-异羟肟酸摄取蛋白D2（FhuD2）
•   1.6 课题研究意义
• 第二章 金黄色葡萄球菌表面蛋白的提取
•   2.1 实验材料
•     2.1.1 菌株
•     2.1.2 主要试剂
•     2.1.3 主要仪器及设备
•     2.1.4 主要溶液配制
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 traP、efb、csa1、rap、mntC、gapC基因的克隆鉴定以及表达载体构建
•     2.2.2 重组蛋白的制备与纯化
•   2.3 结果与分析
•     2.3.1 目的基因克隆及表达载体构建
•   2.4 讨论
• 第三章 各抗原疫苗免疫效应的检测
•   3.1 材料与设备
•     3.1.1 试验动物与菌株
•     3.1.2 主要试剂
•     3.1.3 主要仪器及设备
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 小鼠分组及免疫
•     3.2.2 各抗原组小鼠存活率检测及免疫效应的检测
•   3.3 结果与分析
•     3.3.1 各组小鼠感染S.aureus后体温变化情况
•     3.3.2 各组小鼠肺部病理结果分析
•     3.3.3 各组小鼠肺部载菌量的测定
•     3.3.4 各组小鼠感染S.aureus后存活率检测
•     3.3.5 单抗原特异性抗体水平检测结果
•   3.4 讨论
• 第四章 混合抗原配伍乳酸菌胞外多糖佐剂免疫效果及免疫效应的检测
•   4.1 材料与设备
•     4.1.1 试验动物与菌株
•     4.1.2 主要试剂
•     4.1.3 主要仪器及设备
•   4.2 实验方法
•     4.2.1 小鼠分组及免疫
•     4.2.2 各组小鼠存活率检测及免疫效应的检测
•   4.3 结果与分析
•     4.3.1 各组小鼠感染S.aureus后体温变化情况
•     4.3.2 各组小鼠肺部病理结果分析
•     4.3.3 小鼠肺部载菌量的测定
•     4.3.4 各组小鼠感染S.aureus后存活率检测
•     4.3.5 抗原疫苗的免疫效果评价
•     4.3.6 胞内因子的染色
•   4.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 佟鹤

导师: 王潇

关键词: 金黄色葡萄球菌,表面蛋白,混合疫苗,乳酸菌胞外多糖

来源: 内蒙古大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 内蒙古大学

分类号: R392

总页数: 85

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