猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法的建立

论文摘要

为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶12 800～1∶25 600,而韩国JBT PCV2试剂盒检测的阳性滴度为1∶3200～1∶6400;对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒等10种其他病原体的20份阳性血清的检测结果均为阴性,表明本研究研制的试剂盒具有良好的特异性;批内重复性试验变异系数(C.V%)为2.26%～7.60%,批间重复试验的变异系数(C.V%)为1.67%～6.41%,变异系数均小于10%,呈现良好的可重复性。因此,我们成功建立了敏感性高、特异性强及重复性好的猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 血清
•     1.1.2 ELISA试验相关试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 ELISA试验步骤
•     1.2.2 抗原最适包被浓度与血清稀释度的确定
•     1.2.3 包被条件的确定
•     1.2.4 封闭液的确定
•     1.2.5 血清最佳结合时间的确定
•     1.2.6 二抗最佳稀释度及结合时间的确定
•     1.2.7 底物作用时间的确定
•     1.2.8 间接ELISA方法阴、阳性血清临界值的确定
•     1.2.9 间接ELISA方法的敏感性试验
•     1.2.1 0 间接ELISA方法的特异性试验
•     1.2.1 1 间接ELISA方法的重复性试验
• 2 结果
•   2.1 最佳Cap蛋白包被浓度与血清稀释度的确定
•   2.2 包被条件的确定
•   2.3 封闭液的确定
•   2.4 血清最适结合时间的确定
•   2.5 二抗最佳稀释度及结合时间的确定
•   2.6 底物作用时间的确定
•   2.7 间接ELISA方法阴、阳性血清临界值的确定
•     2.7.1 阴性、阳性标准血清检测结果
•     2.7.2 158份阴性血清检测结果
•     2.7.3 临界值 （OD450） 的确定
•   2.9 间接ELISA方法的敏感性试验
•   2.1 0 间接ELISA方法的特异性交叉试验
•   2.1 1 间接ELISA方法的重复性试验
•     2.1 1. 1 批内重复
•     2.1 1. 2 批间重复
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐保娟,王丽萍,崔晓霞,宫晓,孙厚民,郭伟伟,李陆梅,范根成,荣俊

关键词: 猪圆环病毒型,间接,阴性血清,阳性血清

来源: 中国动物传染病学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 青岛易邦生物工程有限公司,动物基因工程疫苗国家重点实验室,长江大学

基金: 青岛市动物保健品行业智库联合基金

分类号: S852.651

页码: 25-34

总页数: 10

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